Glutamat toksisitesi oluşturulmuş glioma hücre dizilerinde MgSo4 ve lazaroid U-83836E'nin hücre yaşam oranına etkisi
The effects of MgSo4 and lazaroid U-83836E against glutamate-induced toxicity on glioma cell lines survival
- Tez No: 115041
- Danışmanlar: PROF.DR. RUHİ UYAR
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Fizyoloji, Physiology
- Anahtar Kelimeler: L-glutamat, MgSO4, lazaroid U-83836E, glioma, hücre çoğalması, L-glutamate, MgSC>4, lazaroid U-83836E, glioma, cell proliferation
- Yıl: 2002
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Eskişehir Osmangazi Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Fizyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 65
Özet
ÖZET L-glutamat merkezi sinir sisteminde ana uyarıcı nörotransmiter olmasına ek olarak aynı zamanda önemli bir nörotoksin ve glial toksindir. Hücredışı ortamda glutamatın artması nöronlarda ölüme neden olduğu gibi astroglial hücrelerin şişmesine ve ardından parçalanmasına öncülük ederek bir dizi yıkıcı olayları başlatır. Nörodejeneratif hastalıklar sonrası, nöronların yaşamını sürdürmesi ve iyileşmesinde astrositlerin rolü giderek önem kazanmaktadır. Bir kez hasar oluşunca astrosit fonksiyonlarındaki azalma, merkezi sinir sistemindeki daha ileri kayıplara katılabilir. Bu nedenle astrosit yaşamının uzamasının daha ileri bir nöron korumaya olanak sağlayacağı düşünülmektedir. Lazaroidler (21 aminosteroidler) lipid peroksidasyon inhibitörü olarak geliştirilen antioksidan ilaçlardır. Özellikle travma, subaraknoid hemoraji ve iskemiye maruz kalmış beyin dokusunda güçlü bir antioksidan kapasitelerinin olduğu gösterilmiştir. Yine MgSO4'ün iskemi ve travma nedeniyle oluşan nöronal hasarı önlediği gösterilmiştir. Glial hücrelerde Mg'un ve lazaroidlerin glutamat toksisitesi üzerindeki etkisini gösteren herhangi bir çalışmaya rastlanmamıştır. Sıçan glioma hücre dizisinden elde edilen C6 hücreler, glia hücre özellik ve fonksiyonlarının tanımlanmasında kullanılmaktadır. C6 hücreleri ve iki adet insana ait glioblastoma multiforme hücreleri % 5 CO2, 37 °C ve % 100 nem içeren inkübatörde çoğaltıldı. Öncelikle hücreler üzerinde L-glutamatın % 50 öldürücü dozu belirlendi. Elde edilen dozda L-glutamat 24 saat süreyle uygulandı ve ardından uzaklaştırılarak, MgSÜ4 veya U-83836E dozları besiyerine eklendi. 24 saat sonra hücrelerin yaşama oranlarını gösteren 3-(4,5-Dimethylthyazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide; thiazolyl blue (MTT) testi uygulandı. Elde edilen veriler tek yönlü varyans analizi ve ardından Tukey'in çok yönlü karşılaştırma testi ile istatistiksel olarak değerlendirildi. Ayrıca L-glutamat ile birlikte ve ardından Ca2+ içermeyen besiyeri, inositol trifosfat (IP3) kapılı kalsiyum kanallarını bloklayan heparin, hücre dışındaki Ca2+'u tutan 111etilen diamin tetra asetikasit (EDTA), 10 veya 50 mM CaCl2 kullanılarak L-glutamat toksisitesinde Ca2+ iyonlarının rolü ortaya konmaya çalışıldı. Yine L-glutamat ile birlikte ardından Mg2+ bulunmayan besiyeri ve 2, 5, 10, 50 veya 100 mM MgSO4 kullanılarak, eksitotoksisitede Mg iyonlarının rolü araştırıldı. C6 ve insan glioma hücrelerinde sırasıyla 0.01 mM MgSO4'ün % 17, % 15 ve % 5; 1 uM U-83836E'nin % 12, % 13 ve % 4.9 oranında hücre yaşam oranında artışa neden olduğu ortaya kondu. Üç hücrenin canlı hücre yoğunluğunda, Ca2+'suz besiyeri grubunda % 23, 17 ve 21, EDTA grubunda % 44, 30 ve 34, heparin grubunda %23, % 10 ve % 17, 10 mM CaCl2 grubunda % 34, % 17 ve % 22, 50 mM CaCl2 grubunda % 44, % 24 ve % 27 oranında azalma görüldü. Mg 'suz besiyeri grubunda ise canlı hücre miktarında % 13, % 20 ve % 18'lik bir azalma belirlendi. Sadece 2 mM MgSO4 hafif bir koruma sağlarken, besiyerine MgSO4 'ün artan dozlarda eklenmesi ise toksisiteyi daha da arttırdı. Sonuç olarak, MgSO4 ve U-83836E glutamatın neden olduğu hücre ölümünü 9+ tam olarak engelleyememesine rağmen, verilerimiz Mg iyonları ve serbest radikal oluşumunun olayda küçük de olsa rolü olduğunu önermektedir. Oysa L-glutamat toksisitesi ile Ca2+ iyonları arasında doğrudan bir ilişki kurulamamıştır.
Özet (Çeviri)
SUMMARY L-glutamate is the major excitatory neurotransmitter as well as an important neurotoxin and gliotoxin in the central nervous system (CNS). Elevated extracellular L- glutamate levels have been shown to change astrocytic volume. Furthermore, L- glutamate induces a sequence of degenerative events that leads to the lysis of the cultured astrocytes. The role of astrocytes in promoting neuronal survival and recovery following cerebral insult is becoming increasingly appreciated. Once damaged, the resulting reductions in astrocyte function may further contribute to CNS losses. In concert with improving astrocyte survival, advanced neuroprotection would be expected. The 21-aminosteroids, or lazaroids, are potent inhibitors of lipid peroxidation in neural tissue and have been developed for the acute treatment of CNS injury, ischemia or subarachnoid hemorrhage. It has been shown that MgSC>4 also improves neuronal injury after ischemia and trauma. The possible effect of MgSC>4 and lazaroids on glutamate toxicity on glial cells has not been studied yet. C6 rat glioma and human glioblastoma multiforme cells were grown in an incubator atmosphere of 5 % CO2, 37 °C and 100 % humidity. First, the determined IC50 value of L-glutamate was given for 24 hours and removed, and then MgSÛ4 or U- 83836E doses were added to the culture medium. After 24 hours 3-(4,5- Dimethylthyazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide; thiazolyl blue (MTT) test was done. For the statistical analysis one-way ANOVA following Tukey's multiple comparison tests were used. In addition we have tried to show the role of Ca2+ on L-glutamate toxicity by using Ca2+ free medium, heparin which blocks inositol triphosphate (IP3) gated calcium channels, ethilendiamine tetraaceticacid (EDTA) which blocks extracellular Ca2+, 10 mM or 50 mM CaCİ2. We have also attempted to show the role of Mg2+ ions by using Mg2+ free medium, 2, 5, 10, 50 or 100 mM MgS04.We have found that MgS04 at the dose of 0.01 mM increased C6 and human glioma cell growth by 17, 15 and 5 %, respectively. At the dose of 1 uM U-83836E also increased C6 and human glioma cell growth by 12, 13 and 4.9 %, respectively. The medium used without Ca2+decreased the survival of C6 and two human glioma by 23, 17 and 21 %, respectively. EDTA decreased the cell survival of C6 and two human glioma by 44, 30 and 34 %, respectively. The heparin caused a decrease of the survival of C6 and two human glioma cell by 23, 10 and 17 %, respectively. 10 and 50 mM CaCb decreased the cell survival of C6 and two human glioma cells by 34, 17 and 22 %, and by 44, 24 and 27 %, respectively. It is found that Mg2+ free medium declined the cell survival of the three sources by 13, 20 and 18 %, respectively. Although MgS04 at the dose of 2 mM slightly increased the cell survival, addition of increased amount of MgSC>4 to the cultures increased the toxicity. In conclusion, although MgSC>4 and U-83836E do not strongly block glutamate- induced cell death, it is suggested that Mg2 + ions and free radical production may have a small role. It is also suggested that L-glutamate toxicity does not related directly with Ca2+ ions.
Benzer Tezler
- HT22 hücrelerinde oluşturulan glutamat nörotoksisite modelinde gebe serumu uygulamasının olası nöroprotektif etkilerinin in vitro analizi
In vitro analysis of possible neuroprotective effects of pregnancy serum administration in a glutamate neurotoxicity model established in HT22 cells
DENİZ KİBAR
Doktora
Türkçe
2024
Histoloji ve EmbriyolojiMersin ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ŞAKİR NECAT YILMAZ
- Monosodyum glutamat ile deneysel toksikasyon oluşturulmuş yaşlı ratlarda, betanin'in (C24H26N2O13) olası koruyucu etkilerinin araştırılması
Investi̇gati̇on of possi̇ble protecti̇ve effects of betani̇n (C24H26N2O13) i̇n elderly rats experi̇mental toxi̇cated wi̇th monosodi̇um glutamate
GÜRKAN BAYTAR
Doktora
Türkçe
2022
BiyokimyaAydın Adnan Menderes ÜniversitesiYaşlı Sağlığı Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SERDAL ÖĞÜT
- Nörodejeneratif modelde HT-22 hücrelerinin hücresel senesens belirteçlerinin incelenmesi, in vitro çalışma
Investigation of cellular senescence markers of HT-22 cells in neurodegenerative model, in vitro study
SENA YÜKSEL
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
NörolojiOndokuz Mayıs ÜniversitesiSinir Bilimi Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MEHMET EMİN ÖNGER
- Determination of the resistance status of tetranychus urticae populations collected from vegetable crops in the Mediterranean Region to some neurotoxic acaricides and screening for target site mutations
Akdeniz bölgesi sebze yetiştiricilik alanlarından toplanan tetranychus urtıcae popülasyonlarının bazı nörotoksik akarisitlere karşı direnç durumunun belirlenmesi ve hedef yeri mutasyonlarının taranması
OMAR MASOUD ELSAYED MASOUD
- Primer mikst glia hücre kültüründe glutamat toksisitesi üzerine melatonin, 7-nitroindazol ve riluzolun etkileri
The effects of melatonin, 7-nitroindasole and riluzole on glutamate toxicity in primary glial cell culture
TANER DAĞCI
