Tavuklarda marek hastalığı virusunun polimeraz zincir reaksiyonu ile saptanması
Detection of marek's disease virus in chickens using polymerase chain reaction
- Tez No: 118408
- Danışmanlar: PROF.DR. ÖMER AKAY
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2002
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 76
Özet
ÖZET Bu çalışma tavukların tümöral bir hastalığı olan Marek'in yeni moleküler tekniklerden biri olan PCR'la teşhisi ve yine PCR ile patojen ve aşı suşlarının birbirinden ayrılması amacıyla yapılmıştır. Bu amaçla Pendik Veteriner Kontrol ve Araştırma Enstitüsü Tavuk Hastalıkları laboratuvarına getirilen ve tavuk çiftliklerinden hastalıktan şüpheli tavuklardan toplanan iç organ ve kan örneklerinde MHV-1 'e ait gen bölgesi aranırken, 8. pasajdaki wMD1 1 ve ileri pasajdaki CVI988 aşı suşu patojen ve attenue suşları birbirinden ayırmak için kullanılmıştır. Aynı kaynaklardan toplanan tüy örnekleri ise AGP testinde kullanılmıştır. Virüsün 132bp repeat bölgesine spesifik primerler kullanılarak yapılan PCR ile Marek'in serotip-2 ve serotip-3 grubunda yer alan aşı suşlarında herhangi bir bant elde edilmezken, incelenen 64 adet tavuğa ait iç organ örneklerinin 39 adedinde etkenin 132bp repeat bölgesine spesifik bantlar elde edilmiş, 25 adedinde herhangi bir bant izlenmemiş, 30 adet kan örneğinin 21 adedi Marek yönünden pozitif bulunurken 9 adedi negatif bulunmuştur. 8. pasajdaki wMD11 DNA'sında olduğu gibi, (317bp lik bant) doku ve kan örneklerinden patojen suşlarda görülmesi beklenen ve hedef bölgenin 2 (317bp) veya 1 (185bp) kopyasına ait bantlar elde edilirken, CVI988 aşı suşuyla attenüe suşlarda görülmesi beklenen ve hedef bölgenin çok sayıda kopyasını içeren birbirinin aynı yoğunlukta bantlar elde edilmiş böylece, attenue ve patojen Marek suşlarının PCR ile birbirinden ayrılması gerçekleştirilmiştir. Elde edilen PCR ürünleri, ürünler arasında herhangi bir genetik farklılığın bulunup bulunmadığını incelemek amacıyla Nsp1 restriksiyon enzimi ile kesilmiş kesim sonucu herhangi bir farklılık saptanmamıştır. AGP testi ile incelenen 33 adet tavuğa ait tüy örneğinden 10 adedi Marek yönünden pozitif bulunurken 23 adedinde ağarda herhangi bir presipitasyon bantına rastlanmamıştır. Sonuç olarak PCR; Marek'in teşhisi, MHV-1 suşlarının MHV-2 ve MHV-3 suşlarından ayrımı, Marek'in diğer tumoral hastalıklardan ayrımı ve patojen ile attenue suşları birbirinden ayırmada kullanılabilecek hızlı, sensitivitesi ve spesifitesi yüksek bir test olarak değerlendirilmiştir. 67
Özet (Çeviri)
SUMMARY Detection of Marek's disease virus in chickens using polymerase chain reaction. The study was carried out for the diagnosis and differentiation of pathogen and vaccine strains of Marek's disease, a tumoral disease of chickens, using PCR one of the new molecular techniques. For this purpose, visceral organs and blood belong to Marek's disease suspicious chickens were collected from both chickens that were brought to Poultry disease laboratory of Pendik Veterinarian Control and Research Institute and from poultry farms, to seek the MHV-1 specific gene. wMD1 1 in the passage levels of 8 and CVI988, a vaccine strain in the high passage level, were used to differentiate pathogen and attenue strains of MDV. Also feather samples from the same sources were used in the AGP test. While using the primers specific to 132bp repeat region of MDV were not obtained any band with serotype -2 and serotype-3 vaccine strains of Marek's disease. Out of 64 investigated visceral organ samples, 39 had the bands specific to the 132bp repeat region of MDV-1, 25 did not have any bands, out of 30 investigated blood samples 21 were found positive, 9 were found negative for MDV using PCR. Similar to the DNA bands belong to vvMD1 1 in the passage level of 8 (317bp), using the tissue and the blood samples were obtained 2 (317bp) or 1 (185bp) copies of the target region which was expected to be seen. Using CVI988 vaccine strain were obtained many bands in the same intensity on the agar expected to be seen. Thus, the differentiation of pathogen and attenue strains of MDV had been performed using PCR. Eluted PCR products were digested with Nsp1 restriction enzyme to investigate any genetical differences among the PCR products but, any differences were not be detected. Feather samples that belong to 33 chickens were used in the AGP test. While 10 samples were found positive, 23 were negative for Marek's disease and there was not any visible precipitation band on the agar. As a result, PCR was evaluated as a rapid, high in specificity and sensitivity for the diagnosis of MDV, differentiation of MDV-1 from MDV-2 and MDV-3 and from other tumoral diseases, differentiation of pathogen and attenue strains of MDV. 68
Benzer Tezler
- MHV antikorunun tayininde kullanılacak indirekt ELISA tekniği için tavuk Marek hastalığı virusunun (MHV) katı faza immobilize edilmesi
The Immobilization of Marek's disease virus (MDV) to solid phase to be used in the indirect ELİSA technique for determination of MDV antibody
Ş.TÜRCAN GÜRCAN
- Tavşanlarda marek hastalığı virusu (MHV) antikorunun eldesi ve ELISA yöntemi için katı faza immobilizasyonu
Isolation of the antibody against Marek disease virus (MDV) from rabbits and its immobilization to solid phase for the ELİSA technique
JAFAR GAREAYAGHİ
- Tavuklarda marek hastalığının snp genetik markerlerinden yararlanılarak araştırılması
Identification of genetic resistance to marek's disease in chicken using snp markers
HASAN MEYDAN
- Tavuklarda marek hastalığının patolojik ve immunohistokimyasal yöntemlerle tespiti
Pathological and immunohistochemical techniques for detection of marek?s disesase in the chicken
HİKMET KELEŞ
- Bursa yöresi tavuklarda görülen marek hastalığının teşhisinde, deri ve iç organ bulguları üzerinde floresan antikor (FA) ve histolojik yöntemler kullanarak yapılan araştırmalar
Studies on the skin and visceral organ findings of marek's disease diagnosis in chickens by using fluorescent antibody (FA) and histological methods in Bursa region
OSMAN KUTSAL
Doktora
Türkçe
1987
Veteriner HekimliğiAnkara ÜniversitesiPatoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. CEMALETTİN KÖKÜUSLU