Sığır vebası virüsü nükleoprotein geninin klonlanması ve ökaryotik hücrelerde açıklanması
Cloning of nucleoprotein gene of rinderpest virus and expression in eucaryotic cells
- Tez No: 118809
- Danışmanlar: PROF.DR. YUSUF BOLAT, Y.DOÇ.DR. AYKUT ÖZDARENDELİ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: Sığır vebası virüsü, nükleoprotein geni, klonlama, protein açıklatılması, Rinderpest virus, nucleoprotein gene, cloning, protein expression
- Yıl: 2002
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Fırat Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Viroloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 80
Özet
l.ÖZET Bu çalışmada, sığır vebası virüsü RBOK aşı suşu (SV-RBOK) nükleoprotein (NP) geninin klonlanması ve ökaryotik hücrelerde açıklatılması amaç edilmiştir. Bu amaçla SV-RBOK ile infekte Vero hücrelerinden elde edilen toplam RNA'lara NP genine spesifik primerlerle tersine transkripsiyon-polimeraz zincir reaksiyonu (TT-PZR) yapıldı. Tersine transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonundan sonra 1575 baz çifti uzunluğunda ürün elde edildi. Sığır vebası RBOK aşı suşu NP geni pGEM-3Zf (-) klonlama vektörüne klonlandı. Nükleoprotein geninin varlığı enzim kesim ve polimeraz zincir reaksiyonu tarama (PZR-T) deneyleri ile teyit edildi. Nükleoprotein genini elde etmek için rekombinant plazmid Nhel ve Sail enzimleri ile kesildi. Daha sonra NP geni pCI- neo memeli açıklama vektörüne yerleştirildi. pCI-neo vektöründe NP geninin varlığını teyit etmek için PZR-T ve enzim kesim deneyleri yapıldı. Sonuçlanan rekombinant plazmid pSV-NP olarak isimlendirildi. pSV-NP geçici olarak Vero hücrelerine transfekte edildi. Vero hücrelerinin 60 kDa'luk NP proteinini açıklaması anti-NP antikorları kullanılarak Vestern immunblotlama deneyi ile gösterildi.
Özet (Çeviri)
2. ABSTRACT In the present study, cloning and expression nucleoprotein (NP) gene of rinderpest virus (RPV) RBOK vaccine strain in eucaryotic cells are reported. For this purpose, total RNA extracted from RPV-RBOK infected Vero cells was subjected to reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) with the NP gene spesific primers. After RT-PCR, a 1575 bp amplicon was yielded. The NP gene of RPV-RBOK vaccine strain was cloned into pGEM-3Zf (-) cloning vector. The presence of the NP gene was confirmed by PCR-screening and enzyme digestion assays. The recombinant plasmid was cut with Nhel and Sail enzymes to obtain the NP gene. Then, the NP gene was placed into pCI-neo mammalian expression vector. To confirm the presence of the NP gene in pCI-neo vector; PCR-screening and enzyme digestion assays were performed. So, the resulting recombinant plasmid was named as pSV-NP. Afterwards, pSV-NP was transiently transfected into Vero cells. The presence of the NP proteins was showed by Western Immunoblotting assay demonstrating that Vero cells express a 60 kDa protein reacting with anti-NP antibody.
Benzer Tezler
- Sığır vebası virüsü matriks geninin klonlanması ve ökaryotik hücrelerde açıklanması
Cloning of matrix gene of rinderpest virus and expression in eucaryotic cells
AHMET KÜRŞAT AZKUR
Doktora
Türkçe
2002
Veteriner HekimliğiFırat ÜniversitesiViroloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. YUSUF BOLAT
PROF. DR. MEHMET ZİYA DOYMAZ
- Sığır vebası virüsünün hemaglutinin proteinine karşı monoklonal antikorların elde edilmesi ve karakterizasyonu
Production and characterization of monoclonal antibodies against heamagglutinin protein of rinderpest virus
İREM GÜLAÇTI
Doktora
Türkçe
2002
Veteriner HekimliğiFırat ÜniversitesiViroloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. YUSUF BOLAT
Y.DOÇ.DR. HAKAN BULUT
- Koyun ve keçilerde küçük ruminantların vebası (Pesde des petits ruminants) ve sığır vebası enfeksiyonlarının serolojik ve virolojik olarak araştırılması
Serological and virological investigation of rinderpest and paste des petits ruminants in sheep and goats
NİGAR TATAR
- Serological investigation of peste des petits ruminants in lambs in Iraq-Kirkuk region
Irak–Kerkük bölgesinde kuzularda küçük ruminant vebası (pestedes petits ruminants ppr)'ın seroprevalansı
SARWAT KHORSHED RAHEEM
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
Sağlık YönetimiVan Yüzüncü Yıl ÜniversitesiSağlık Bilimleri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SÜLEYMAN KOZAT
- Koyunlarda ve sığırlarda küçük ruminant vebası virusunun virolojik, serolojik ve moleküler yönden araştırılması ve soyağacı oluşturulması
Investigations on the peste des petits ruminants virus (PPRV) in sheep and cattle by virological, serological, molecular and phylogenetic analyses
EDA ALTAN TARAKCI
Doktora
Türkçe
2014
Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıklarıİstanbul ÜniversitesiViroloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HÜSEYİN YILMAZ