Sığır vebası virüsü matriks geninin klonlanması ve ökaryotik hücrelerde açıklanması
Cloning of matrix gene of rinderpest virus and expression in eucaryotic cells
- Tez No: 118810
- Danışmanlar: PROF. DR. YUSUF BOLAT, PROF. DR. MEHMET ZİYA DOYMAZ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: Sığır vebası, matriks geni, klonlama, protein açıklanması, Rinderpest, matrix gene, cloning, protein expression
- Yıl: 2002
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Fırat Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Viroloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 68
Özet
1. ÖZET Bu çalışmanın amacı sığır vebası (SV) virüsü RBOK aşı suşu matriks (M) geninin klonlanması ve ökaryotik hücrelerde açıklatılmasıdır. Bu amaçla, SV RBOK aşı suşu ile infekte Vero hücrelerinden toplam RNA elde edildi. Matriks DNA amplikonları tersine transkripsiyon-polimeraz zincir reaksiyonu (TT-PZR) ile oluşturuldu. Matriks genine özgü primerler kullanılarak 1038 bazlık M geni kodlama bölgesi çoğaltıldı. Daha sonra, matriks geni pTOPO XL klonlama vektöründe klonlandı. Matriks geninin varlığı PZR-tarama (PZR-T) ve enzim kesim deneyleriyle gösterildi. Elde edilen plasmid EcoRL ve Şali enzimleriyle kesilerek M geni pCI-neo açıklama vektörüne yerleştirildi. pCI-neo Matrix vektöründe M geninin varlığım teyit etmek amacıyla PZR-T ve enzim kesim deneyleri yapıldı. Oluşturulan rekombinant plazmid, pCI-neo Matrix vektörü olarak adlandırıldı. Sonrasında, rekombinant pCI-neo Matrix plazmidi Vero hücrelerine geçici olarak transfekte edildi. Matriks proteinin varlığı Vestern immunoblotlama ile gösterilerek Vero hücrelerinin anti-M antikoruyla reaksiyona giren 38 kDa'luk bir proteini açıkladığı gösterildi.
Özet (Çeviri)
2. ABSTRACT The aim of this study was to cloning and in eucaryotic cells to expression of matrix (M) gene of RBOK vaccine strain of rinderpest virus (RPV). For this purpose, total RNA was extracted from Vero cells infected with RBOK vaccine strain of RPV. Matrix DNA amplicons were obtained with reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). 1038 bases matrix coding gene region was amplified by using spesific primers to the matrix gene. Then, the M gene was cloned into TOPO XL cloning vector. The presence of M gene was confirmed by PCR screening and enzyme digestion assays. The recombinant plasmid was cut with EcoRL and Sail enzymes to obtain the M gene. Then, the M gene was placed into pCI-neo mammalian expression vector. So, the resulting recombinant plasmid was named as pCI-neo Matrix. Afterwards, the pCI-neo Matrix vector was transiently tranfected into Vero cells. The presence of the Matrix proteins was showed by Western Immunoblotting assay demonstrating that Vero cells express a 38 kDa protein reacting with anti-M antibody.
Benzer Tezler
- Serological investigation of peste des petits ruminants in lambs in Iraq-Kirkuk region
Irak–Kerkük bölgesinde kuzularda küçük ruminant vebası (pestedes petits ruminants ppr)'ın seroprevalansı
SARWAT KHORSHED RAHEEM
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
Sağlık YönetimiVan Yüzüncü Yıl ÜniversitesiSağlık Bilimleri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SÜLEYMAN KOZAT
- Sığır vebası virüsü nükleoprotein geninin klonlanması ve ökaryotik hücrelerde açıklanması
Cloning of nucleoprotein gene of rinderpest virus and expression in eucaryotic cells
ŞÜKRÜ TONBAK
Doktora
Türkçe
2002
Veteriner HekimliğiFırat ÜniversitesiViroloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. YUSUF BOLAT
Y.DOÇ.DR. AYKUT ÖZDARENDELİ
- Sığır vebası virüsünün hemaglutinin proteinine karşı monoklonal antikorların elde edilmesi ve karakterizasyonu
Production and characterization of monoclonal antibodies against heamagglutinin protein of rinderpest virus
İREM GÜLAÇTI
Doktora
Türkçe
2002
Veteriner HekimliğiFırat ÜniversitesiViroloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. YUSUF BOLAT
Y.DOÇ.DR. HAKAN BULUT
- Koyun ve keçilerde küçük ruminantların vebası (Pesde des petits ruminants) ve sığır vebası enfeksiyonlarının serolojik ve virolojik olarak araştırılması
Serological and virological investigation of rinderpest and paste des petits ruminants in sheep and goats
NİGAR TATAR
- Koyunlarda ve sığırlarda küçük ruminant vebası virusunun virolojik, serolojik ve moleküler yönden araştırılması ve soyağacı oluşturulması
Investigations on the peste des petits ruminants virus (PPRV) in sheep and cattle by virological, serological, molecular and phylogenetic analyses
EDA ALTAN TARAKCI
Doktora
Türkçe
2014
Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıklarıİstanbul ÜniversitesiViroloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HÜSEYİN YILMAZ