Sheep liver microsomal flavin-monooxygenases: Characterization and effect of some modulators
Koyun karaciğer mikrozomal flavin-monooksijenazlar: Karakterizasyon ve bazı modülatörlerin etkileri
- Tez No: 119413
- Danışmanlar: PROF. DR. ORHAN ADALI
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: FMO, flavin-monooksijenaz, metimazol, imipramin, koyun, karaciğer, mikrozom, karakterizasyon. VI, FMO, flavin-containing monooxygenase, methimazole, imipramine, sheep, liver, microsome, characterization. IV
- Yıl: 2002
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 145
Özet
öz KOYUN KARACİĞER MİKROZOMAL FLAVİN-MONOOKSİJENAZLAR: KARAKTERİZASYON VE BAZI MODÜLATÖRLERİN ETKİLERİ Can Demirdöğen, Birsen Yüksek Lisans, Biyokimya Bölümü Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Orhan Adalı Ocak 2002, 126 sayfa Flavin-içeren monooksijenazlar (flavin-monooksijenazlar da denir ve FMO şeklinde kısaltılır; E.C.l. 14.13.8), birçok değişik nükleofilik nitrojen, sülfür, fosfor ve selenyum heteroatomu içeren kimyasallar, ilaçlar ve tarımsal ajanların, NADPH ve oksijene bağımlı oksidasy onunu katalize ederler. FMO' lar bakterilerden insanlara kadar birçok değişik organizmada bulunmuş ve bugüne kadar 5 tane memeli FMO geni belirlenmiştir; FM01-FM05. Koyun karaciğer mikrozomal FMO enzim aktivitesi, FMO enzimleri için çok spesifik bir substrat olan metimazol kullanılarak karakterize edilmiştir. Ortalama FMO spesifik aktivitesi, reaksiyon ortamında deterjan kullanılmadığında3.8 ±1.5 nmol/dak/mg protein (Ortalama ± SS, n=7), reaksiyon ortamına % 0.1 Triton X-100 eklendiğinde ise 6.1 ± 1.4 nmol/dak/mg protein (Ortalama ±1.5, n=6) olarak bulundu. Reaksiyon hızı 500 jig protein ve 27 dakika inkübasyon süresine kadar doğru orantılı arttı. En yüksek FMO enzim aktivitesi 37 °C ve pH 8.0 de tespit edildi. FMO aktivitesi üzerine Triton X-100, Kolat ve Emulgen 913 gibi deterjanların etkileri çalışıldı ve enzim aktivitesinin bu deterjanların herbirinin reaksiyon ortamına eklenmesi sonucu arttığı gözlendi. Koyun karaciğer mikrozomal FMO enzimin metimazol substratı için görünen Km ve VmaX değerleri sırasıyla 0.133 mM ve 12.3 nmol/dak/mg protein olarak bulundu. Koyun karaciğer mikrozomal FMO enziminin ısıya dayanıklılığı dört değişik ısıda çalışıldı; 24 °C, 37 °C, 50 °C ve 65 °C. Enzim aktivitesinin tamamen kaybolması için gereken inkübasyon süresi 65 °C'de 5 dakika, 50 °Cde 1.5 saat, 37 °CTde 2 gün ve 24 °CTde 20 gün olarak gözlendi. Enzim aktivitesine iki metal iyonunun, Hg+2 ve Mg+2, etkileri HgCİ2 ve MgCİ2 kullanılarak çalışıldı. Koyun karaciğer mikrozomal FMO enziminin imipramin ve klorpromazin gibi iki ilaç substratına karşı aktivitesi de ölçüldü ve sırasıyla 10.7 ve 12.3 nmol NADPH oksitlenmiş/dak/mg protein olarak tespit edildi. İmipramin, klorpromazin ve n- oktilamin'in koyun karaciğer mikrozomal FMO enziminin metimazol oksidasyon aktivitesi üzerine etkileri çalışıldı. Bu iki ilaç substratın ve n-oktilaminin FMO enzim aktivitesini yüksek konsantrasyonlarda kullanıldıkları zaman inhibe ettikleri bulundu. Western blot immünokimyasal analizi, koyun karaciğer, koyun akciğer ve dana karaciğerinde FM03 izoziminin varlığını ortaya koydu. İmünoblot analizi FM03 ekspresyonunun koyun akciğerinde koyun ve dana karaciğerine göre daha yüksek seviyede olduğunu gösterdi.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT SHEEP LIVER MICROSOMAL FLAVIN-MONOOXYGENASES: CHARACTERIZATION AND EFFECT OF SOME MODULATORS Can Demirdöğen, Birsen M.S., Department of Biochemistry Supervisor: Prof. Dr. Orhan Adah January 2002, 126 pages The flavin-containing monooxygenases (also called flavin-monooxygenases and abbreviated to FMO; E.C.I. 14.13.8) catalyze the NADPH and oxygen-dependent oxidation of a wide range of nucleophilic nitrogen-, sulfur-, phosphorus-, and selenium heteroatom-containing chemicals, drugs, and agricultural agents. FMOs have been found in various organisms from bacteria to humans and five mammalian FMO genes have been identified, FM01-FM05. Sheep liver microsomal FMO enzyme activity was characterized using methimazole as substrate, which is a highly specific substrate for FMO enzymes. The average specific activity of sheep liver microsomal FMO was found to be 3.8 ±1.5 nmol/min/mg protein (Mean ± SE, n=7) when no detergent was added to the reaction 111medium, and 6.1 + 1.4 nmol/min/mg protein (Mean ± SE, n=6) in the presence of 0.1 % Triton X-100 in the reaction mixture. The rate of reaction was linear up to 500 |j.g of sheep liver microsomal protein and for 27 minutes of incubation period. The maximum FMO enzyme activity was detected at 37 °C, at pH 8.0. Effects of detergents; Triton X-100, Cholate, and Emulgen 913, on FMO activity were determined and found that enzyme activity increased by the addition of either detergent at all concentrations. The apparent Vmax and Km values of sheep liver microsomal FMO for methimazole substrate were found as 12.3 nmol/min/mg protein and 0.133 mM, respectively. Thermostability of sheep liver FMO was studied at four different temperatures; 24 °C, 37 °C, 50 °C, and 65 °C. The incubation time required for the complete loss of enzyme activity was 5 minutes at 65 °C, 1.5 hours at 50 ° C, 2 days at 37 °C, and 20 days at 24 ° C. Effects of two metal ions, Hg+2 and Mg+2, on sheep liver FMO activity was studied using HgCh and MgCİ2. Sheep liver microsomal FMO activity towards two drug substrates, imipramine and chlorpromazine, was also determined and found to be 10.7 and 12.3 nmol NADPH oxidized/min/mg protein, respectively. Effects of imipramine, chlorpromazine, and n-octylamine on methimazole oxidation activity of sheep liver microsomal FMO was studied and found that the two drug substrates and n-octylamine inhibited FMO-catalyzed methimazole oxidation activity when they are used at high concentrations. Western blot-immunochemical analysis revealed the presence of FMO 3 in sheep liver, sheep lung, and bovine liver microsomes. The immunoblot analysis suggested that FM03 expression is higher in sheep lung, compared to sheep and bovine liver.
Benzer Tezler
- Koyun karaciğer mikrozomlarından PON1 enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı radyonüklid ilaçların enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi
Purification of PON1 from sheep liver microsomes, caracterization and investigation effects of some radionuclides drugs on the enzyme
BÜŞRA KONCUK
- Effects of aescin from aesculus hippocastanum extracts on microzomal lipid peroxidation
Aesculus hippo castanum özütlerinden aescinin mikrozomal lipid peroksidasyonu üzerindeki etkileri
ADVİYE GÜLÇİN SAĞDIÇOĞLU
Yüksek Lisans
İngilizce
2000
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NURSEN ÇORUH
- Isolation of esculetin from Aesculus hippocastanum L. and its antioxidant effects on microsomal lipid peroxidation
Eskületin'in Aesculus hippocastanum L.'den izolasyonu ve mikrozomal lipid peroksidasyonu üzerindeki antioksidan etkileri
ERKİN AYDIN
Yüksek Lisans
İngilizce
2002
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NURSEN ÇORUH
- Biochemical and immunological characterization of beef liver NADPH-cytochrome P450 reductase
Sığır karaciğer NADPH-sitokrom P450 redüktaz enziminin biyokimyasal ve immünolojik karakterizasyonu
HAYDAR ÇELİK
Yüksek Lisans
İngilizce
2002
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EMEL ARINÇ
