Eritrositlerden karbonik anhidraz izoenzimlerinin saflaştırılması için yeni bir afinite jelinin sentezi ve uygulanması
Application and synthesis of a new affinity gel for the purification of carbonic anhydrase isoenzymes from the erythrocytes
- Tez No: 123511
- Danışmanlar: DOÇ.DR. OKTAY ARSLAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: karbonik anhidraz / izoenzim / afinite kromatografi / Eupergit C-250 L, Afinite kromatografisi, Eritrositler, Karbonik anhidraz, İzoenzimler, carbonic anhydrase / isozymes / affinity chromatography / Eupergit C-250 L IV, Affinity chromatography, Erythrocytes, Carbonic anhydrases, Isoenzymes
- Yıl: 2002
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Balıkesir Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
ÖZ ERİTROSİTLERDEN KARBONİK ANHİDRAZ İZOENZİMLERİNİN SAFLAŞTIRILMASI İÇİN YENİ BİR AFİNİTE JELİNİN SENTEZİ VE UYGULANMASI Özen ÖZENSOY Balıkesir Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya Anabilim Dalı (Yüksek Lisans Tezi / Tez Danışmanı : Doç. Dr. Oktay ARSLAN) Balıkesir, 2002 Karbonik anhidraz (E.C 4.2.1.1), CO2 hidratasyon ve HCO3* dehidratasyon reaksiyonlarım katalizleyen, çinko İyonu içeren bir metaloenzimdir. Bu çalışmada, karbonik anhidraz (CA) izoenzimlerinin saflaştırılması için yeni bir afinite jeli sentezlenmiştir. Afînite jeli sentezinde matriks olarak, oksiran grupları içeren metakrilamid ve N,N'-bis-metilen-(metakrilamid) monomerlerinin bir kopolimeri olan Eupergit C-250 L kullanılmıştır. Eupergit C-250 L matriksinin içerdiği oksiran grupları, ılıman şartlarda ligandın bağlanmasını sağlarken, aynı zamanda bir uzantı kolu olarak fonksiyon göstermektedir. Ligand olarak, karbonik anhidraz enziminin kompetetif bir inbibitörü olan p-aminobenzensülfonamid kullanılmıştır. Sentezlenen Eupergit C-250 L-sülfonamid kimyasal yapısına sahip afinite jeli kullanılarak, sığır eritrosit karbonik anhidraz (BCA), insan eritrosit karbonik anhidraz I ve II (HCA-I, HCA-II) izoenzimleri direkt hemolizattan saflaştırılmıştır.Afinite jetinin enzimi bağlama kapasitesi, her bir izoenzim için farklı sıcaklık, pH ve iyonik şiddetlerde belirlenmiştir. Maksimum bağlanma, 5°C, pH 7.0 ve 0.6 iyonik şiddette gerçekleştirilmiştir. Kolonda tutunan CA izoenziminin elüsyonu için, farklı çözeltiler kullanılmış ve en uygun elüsyon tamponlarının BCA ve HCA-II izoenzimleri için, 0.1 M NaCH3COO / 0.5 M NaC104 (pH 5.6), HCA-I izoenzimi için, 1 M NaCl /25 mM Na2HPC>4 (pH 6.3) olarak belirlenmiştir. BCA ve HCA izoenzimlerinin sırasıyla en yüksek saflaştınlma dereceleri, 478 ve 258 şeklinde tespit edilmiştir. Afinite jeli ile saflaştırılan izoenzimlerin saflığı, SDS-poliakrilamid jel elektroforeziyle kontrol edilmiştir.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT APPLICATION AND SYNTHESIS OF A NEW AFFINITY GEL FOR THE PURIFICATION OF CARBONIC ANHYDRASE ISOZYMES FROM THE ERYTHROCYTES Özen ÖZENSOY Balıkesir University, Institute of Science, Department of Chemistry (MSc Thesis / Supervisor : Assoc. Prof. Dr. Oktay ARSLAN) Balıkesir-Turkey, 2002 The carbonic anhydrase enzyme (E.C. 4.2.1.1), is a zinc-containing metaloenzyme that catalyses the reversible hydration of CO2 and dehydration of HCO3" reactions. In this study, a new affinity gel has been synthesized to purify carbonic anhydrase (CA) isozymes from the erythrocytes. Eupergit C-250 L, which is a copolymer of methacrylamide and N,N'-methylene-bis-(methacrylamide) monomers containing oxirane groups, has been used as a matrix in the affinity gel synthesis. The reactive oxirane groups that Eupergit C-250 L contains, provide the binding of the ligand to the matrix in mild conditions. At the same time, the oxirane groups serves as a spacer-arm. The p-aminobenzensulfonamide, which is a competetive inhibitor of carbonic anhydrase, has been used as a ligand. Bovine erythrocyte carbonic anhydrase (BCA), human erythrocyte carbonic anhydrase I and II (HCA-I and HCA-II) isozymes have been purified from the hemolysate, directly by using the affinity gel, which has a chemical structure of Eupergit C-250 L-sulfonamide.The binding capacities of the affinity gel have been determined at different temperatures, pH's, and ionic strengths for each isozyme of CA. Maximum binding was achieved at 5°C, pH 7.0, and 0.6 ionic strength. Different solutions were used for the CA elution which is adsorbed on the column and the most suitable elution buffers have been determined as, 0.1 M NaCH3COO / 0.5 M NaC104 (pH 5.6) for BCA and HCA-II isozymes and 1 M NaCl / 25 mM Na2HP04 (pH 6.3) for HCA-I isozyme. The greatest purification degree of BCA and HCA (I and II) have been obtained as 478 and 258 folds, respectively. The purification of BCA, HCA-I and HCA-II isozymes has been controlled by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis.
Benzer Tezler
- Karbonik anhidraz izoenzimlerinin saflaştırılması için yeni bir afinite jelinin sentezlenmesi
A new afftinity gel synthesis for purification of carbonic anhydrase isoenzymes
GAMZE ÖKEMLER
- Bazı kalkon ve N-Asetil pirazol türevlerinin sentezlenmesi ve biyolojik aktivitelerinin belirlenmesi
Synthesis of some chalcone and N-Acetyl pyrazole derivatives and determination of their biological activities
NURCAN ÖZTÜRK
Yüksek Lisans
Türkçe
2025
Eczacılık ve FarmakolojiSivas Cumhuriyet ÜniversitesiFarmasötik Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÜMİT MUHAMMET KOÇYİĞİT
- Yeni proton transfer bileşiklerinin antiglokom aktivitesinin incelenmesi
Examination of antiglaucoma activity on novel proton transfer compounds
BURCU ÇINAR
- Pirazol karboksilik asit türevlerinin amitleşme ürünlerinin sığır CA'sı (karbonik anhidraz enzimi) üzerindeki inhibisyon etkilerinin incelenmesi
The investigation of the inhibition effects of amide derives of pyrazole carboxylic acids bovine on carbonic anhydrase enzyme
HARİS AKBAŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2008
BiyokimyaDumlupınar ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. METİN BÜLBÜL
- Pirazol karboksilik asitlerin nitro türevlerinin sığır karbonik anhidraz enzimi üzerine etkisinin incelenmesi
The investigation of the effects of nitro derivatives of pyrazol carboxylic acids on bovine carbonic anhydrase enzyme
FATİH KARABULUT
Yüksek Lisans
Türkçe
2008
BiyokimyaDumlupınar ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. METİN BÜLBÜL