Yanık yaralarının tedavisinde değişik epidermal büyüme faktörü (EGF) formülasyonlarının etkisinin incelenmesi
Investigation of the effects of different epidermal growth factor (EGF) formulations on the treatment of burn wounds
- Tez No: 124005
- Danışmanlar: Y.DOÇ.DR. ZELİHAGÜL DEĞİM
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Eczacılık ve Farmakoloji, Pharmacy and Pharmacology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2003
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gazi Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Farmasötik Teknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 171
Özet
148- G. ÖZET Yanık yaralan günlük hayatımızda sıklıkla karşılaştığımız başlıca sorunlardandır. Yanık yaraları derinliğine ve kapladıkları yüzey alanına göre ciddi problemlerin oluşmasına sebep olabilmektedir. Günümüzde ikinci derece yanık yaralarına uygulanan tedavi yaranın enfekte olmasına engel olmaya ve antiseptik etkili maddelerin kullanımına yöneliktir. Bu çalışmada, polipeptit yapılı bir madde olan Epidermal Büyüme Faktörü (EGF)'nün lipozom kitozan jel ve kitozan jel içinde lipozom formülasyonlarının geliştirilerek ikinci derece yüzeyel yanık yaralarının iyileşmesi üzerindeki etkilerinin incelenmesi amaçlanmıştır. Kitozan jeli, % 2 oranında kitozan (Daichitosan H), % 0.5 oranında asetik asit ve distile su kullanılarak hazırlandı. Kitozan jel formülasyonunun fiziksel görünüşü, viskozitesi, pH'sı gibi fiziksel özelllikleri farklı sıcaklık ve nem koşulunda (4°C - ortam nemi, 25°C - % 60 bağıl nem, 40°C - % 75 bağıl nem) 12 ay boyunca bekletilerek ölçüldü. Yanık yaralarına uygulanacak olan preparatm steril olması gerektiği gözönünde bulundurularak kitozan jel formülasyonuna ait mikrobiyolojik çalışmalar yapıldı. Sterilize edilmemiş kitozan jeli, 5 kGy, 10 kGy ve 25 kGy'lik dozlarda gama radyasyonuyla sterilize edilmiş kitozan jelleri farklı besiyerlerine inoküle edilerek üreme olup olmadığı araştırıldı. Bunun yanında sterilize edilmemiş kitozan jelinde herhangi bir üreme olmadığı görüldükten sonra aynı jel buzdolabında bir yıl boyunca saklandı ve bu bir yıllık sürenin sonunda aynı besiyerlerine tekrardan inoküle edildi. Mikrobiyolojik üremenin olup olmadığı araştırıldı. EGF'nün kitozan jel formülasyonu içindeki stabilitesi iki farklı saklama koşulunda (25°C ve 4°C) 150 veya 180 gün süreyle araştırıldı. EGF'nün kantitat'rf analizleri spektroflorimetre kullanılarak gerçekleştirildi. EGF'nün kitozan jel formülasyohunda in vitro salım deneyi Franz difüzyon hücresi kullanılarak pH 5.8 ve pH 7.4 fosfat tamponlarında 32 ± 0.5°C'de yapıldı. EGF'nün çok tabakalı lipozom formu lasyon lan film oluşturma metodu ile DPPC, kolesterol, kloroform ve metanol kullanılarak hazırlandı. Hazırlanan lipozomların karakterize edilmesi amacıyla, partikül büyüklüğü ve dağılımı, şekli, lipozom içinde hapsedilen EGF miktarı incelendi. Işık mikroskobu ve i nverted mikroskop ile hazırlanan lipozomların fotoğrafları çekilerek tipleri belirlendi.149- Hazırlanan lipozomların partikül büyüklüğünün zamanla değişip değişmediğini incelemek amacıyla 4°C ve 25°C'de saklanan lipozomların yedi ay boyunca partikül büyüklükleri laser diffraction partide sizer kullanılarak ölçüldü. Lipozom içinde hapsedilen EGF miktarı hesaplandı. EGF'nün lipozom içindeki stabilitesi iki farklı saklama koşulunda (25°C ve 4°C) 150 veya 180 gün süreyle araştırıldı. EGF'nün kantitatif analizleri spektroflorimetre kullanılarak gerçekleştirildi. EGF'nün lipozom formülasyonunda in vitro salım deneyi Franz difüzyon hücresi kullanılarak pH 5.8 ve pH 7.4 fosfat tamponlarında 32 ± 0.5°C'de yapıldı. In vivo deneyler, 250 ±10 gram ağırlığındaki dişi Sprague Dawley sıçanlar kullanılarak gerçekleştirildi. Sıçanların sırt bölgeleri traş edildikten sonra anestezi altında, 3.14 cm2'lik taban alanına sahip silindirik kalıplar hayvanların sırtına yerleştirildi ve kalıbın içine 94 ± 1°C sıcaklıktaki su konularak hayvanların sırtında 15 saniye süreyle temas etmesi sağlandı. Bu şekilde ikinci derece yüzeyel yanık yaraları oluşturulduktan sonra 0.160 ug/cm2 dozda EGF formülasyonları 14 gün boyunca uygulandı. 3., 7. ve 14. günlerde hasarlı bölgelerden doku örnekleri alınarak histolojik, immünohistokimyasal ve histokimyasal olarak iyileşmeleri değerlendirildi. Sonuçlar, 4°C'de saklanan jellerin pH değerlerinde 180. günden sonra anlamlı bir artış olduğunu (p0.05), 25°C'de saklanan lipozomların partikül büyüklerinde ise 3. aydan itibaren anlamlı bir artış olduğu görüldü (p0.05). LP, J ve diğer kontrol gruplarında (S ve Y grupları) ise, hücre çoğalmasının çok az olduğu görüldü. EGF içeren gruplarda anlamlı bir hücre çoğalması artışı olduğu görüldü (p0.05).-151 Histokimyasal sonuçlara bakıldığında, epidermis kalınlığındaki en fazla artışı ELJ grubunun gösterdiği bulundu. Fibroblast çekirdek alanları değerlendirildiğinde, 7. günde ELJ, ELP ve EJ gruplarındaki iyileşmenin birbirine yakın olduğu, en fazla iyileşmenin ELJ, sonra ELP ve daha sonra EJ grubunda meydana geldiği görüldü. 14. günde jel içinde EGF içeren lipozom formülasyonu ile tedavi edilmiş grupta (ELJ grup) ve EGF çözeltisi ile tedavi edilmiş grupta (ES grup) en fazla iyileşmenin olduğu görüldü. Ticari bir preparat olan Silverdin® merhemiyle fibroblastik hücreler üzerinde bir etki gözlenmesine rağmen, ciddi yanık yaralarında gümüş sülfadiazin içeren preparatların kullanılması önerilmez, çünkü, gümüş molekülleri hasarlı deri hücrelerinden yüksek oranda penetre olur, gümüşün toksik etkisi göz önünde bulundurulmalıdır. Histolojik sonuçlara bakıldığında da en fazla iyileşmenin ELJ grupta olduğu görüldü. ELJ grubunun ardından en fazla iyileşmenin sırasıyla ELP ve EJ gruplarında meydana geldiği görüldü. SİL grubunda, epidermis içinde genişlemiş hücreler arası aralıklarda iltihabi hücre infiltrasyonu ve dermişte de düzensizleşme gözlendi. Tam bir iyileşmenin olmadığı görüldü. Sonuçlar genel olarak değerlendirildiğinde, yanık yaralarının tedavisinde EGF içeren jel ve lipozom formülasyonlarm oldukça etkili olduğu sonucuna varılmıştır. Yanık tedavisinde önemli bir rol oynayan büyüme faktörlerinin (EGF) formülasyonlarının geliştirilmesi ve ileride bu çalışmaların artması, insan sağlığı açısından ümit verici olarak düşünülmektedir.
Özet (Çeviri)
-152- H. SUMMARY Burn wounds are one of the main problems which has been met during daily life. Burn wounds can cause serious problems according to their depth and surface area. Nowadays, the therapy for the second degree burn wounds mainly focused on the prevention of wound from infections and application of antiseptic drugs. In this study, it was aimed to develop liposome, chitosan gel and liposome in chitosan gel formulations containing epidermal growth factor (EGF) and to determine their effects on the healing of second degree burn wounds. All results were compared with Silverdin® ointment (SIL) applied group, liposome with and without EGF (ELP, LP) applied group, chitosan gel with and without EGF (EJ, J) applied group, EGF containing liposomes in chitosan gel (ELJ) applied group, EGF solution (ES) applied group and untreated control groups (Unburned (S) and untreated (Y) rats). Chitosan gel was prepared using chitosan (% 2), glacial acetic acid (% 0.5) and distilled water. The physical properties and any changes of chitosan gels such as physical appearance, viscosity and pH, were investigated during 12 months at different temperatures and humidity conditions (4°C - ambient humidity, 25°C - 60 % relative humidity, 40°C - 75 % relative humidity). Considering the preparations applied to bum wounds have to be sterilized, the microbiological quality of the chitosan gel formulations were also followed up. Non-sterilized chitosan gel and sterilized gels by 5 kGy, 1 0 kGy and 25 kGy doses of gamma-radiation were inoculated into the different media and any growth was checked and noted. It was seen that there had not been any growth of microorganisms in the media after the inoculation of non-sterilized chitosan gel. The same non-sterilized gel was kept for a year at 4°C and at the end, the gel was inoculated into the same media and again the m icribiological g rowth was observed. The stability of EGF in chitosan gel formulations were investigated at two different conditions (25°C and 4°C) for 150 or 180 days. The quantitative analyses of EGF were performed by using spectroflourimetry. The in vitro release experiments of EGF from chitosan gel formulations were done using Franz diffusion cells to the pH 5.8 and pH 7.4 phosphate buffers at 32 ± 0.5°C.-153- The multilamellar vesicle type liposomes of EGF were prepared according to the procedure of film formation method using DPPC, cholesterol, chloroform and methanol. In order to characterize the liposomes, particle size, shape and amount of encapsulated EGF in the liposome were determined. The liposomes were then framed under light and inverted microscopes. The particle size of the liposomes, both kept in 25°C and 4°C, were measured during seven months by laser diffraction particle sizer. The encapsulation efficiency of EGF in the liposomes were then calculated. The stability of EGF i n I iposome formulations were i nvestigated i n two different conditions (25°C and 4°C) for 150 or 180 days. The quantitative analyses of EGF were performed by spectroflourimetry. The in vitro release experiments of EGF form liposome formulations were done using Franz diffusion cells to the pH 5.8 and pH 7.4 phosphate buffers at 32 ± 0.5°C. The in vivo experiments were done on female Sprague Dawley rats weighing 250 ±10 grams. After shaving the backs of rats under anesthesia, a cylindrical shaped bar was placed on the back of the rats and then water, heated up to 94 ± 1°C was poured into this bar and waited for 15 minutes. After the formation of second degree bum wounds, the EGF formulations were repeatedly a pplied on the burned areas with the dose of 0.160 ug/mL for 1 4 days. Skin biopsies were collected at the 3rd, 7th and 14th days after the wound formation and the degree of healing of the wounds were evaluated histologically, immunohistochemically and histochemically. The results showed that, the pH values of gels which were kept at 4°C, increased significantly after 180 days (p0.05), however, the particle sizes of the liposomes when it was kept at 25°C increased significantly since the 3rd month (p0.05). It was also observed that the cell proliferation in LP, J and other control groups (S and Y groups), were extremely low. There were significant increases of cell proliferation observed in EGF containing groups (p0.05). When ELP group and ELJ group was compared, the healing and the rate of healing was found to be increased. The histochemical results showed that, the increase in epidermis thickness in ELJ group was the fastest one. When the fibroblast nuclei areas were evaluated, at the 7th d ay, the healing rate in ELJ, ELP and EJ groups were close to each other, and the healing rate in ELJ group was found to be the fastest. The healing rates were found to be with the following sequence: ELJ, ELP and EJ groups. At the 14th day, in ELJ and ES group, the healing was found to be the fastest. Although an effect on the fibroblastic cells was observed, with the use of commercially available S ilverdin® o intment, it h as n ot b een s uggested to use silver sulfadiazine containing preparations for the treatment of severe burn wounds, because, silver molecules can penetrate through damaged skin cells in high extent and the toxic effect of silver should be considered. The histological results indicated that, the healing in ELJ group was better comparing with other groups. ELJ group healed rapidly then ELP and EJ groups. When the results were evaluated altogether, it can be concluded that EGF containing formulations are effective in wound healing process. Growth factor formulations, which play an important role in burn wound treatment, are thought to be promising in human health.
Benzer Tezler
- Çocuklarda ikinci derece yanıkların tedavisinde beş farklı yara örtüsünün etkinliklerinin histopatolojik olarak değerlendirilmesi
Histological evaluation of five different wound closure materials in the treatment of second degree burn wounds of children
BİRSEN HARMA
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2011
Çocuk Cerrahisiİnönü ÜniversitesiÇocuk Cerrahisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET DEMİRCAN
- 2H-1-benzopiran-2-on türevi ftalosiyanin bileşiklerinin sentezi ve yapılarının aydınlatılması
Synthesis and structural characterization of 2H-1-benzopyran-2-on derivatives of phthalo-cyanine compound
MEHMET PİŞKİN
- Aplastik anemi tedavisinde jurkat hücre dizisi kullanılarak hazırlanmış antitimosit globulin preparatı ile fetal timositlere veya lenfositlere karşı hazırlanmış preparatların karşılaştırılması
The comparison of the different antithymocyte globulin preparations in the aplastic anemia treament
TUĞRUL PÜRNAK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2007
HematolojiHacettepe Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. YAHYA BÜYÜKAŞIK
- Mikrobiyal biyopolimer üretimi ve antimikrobiyal yüzey olarak kullanımının araştırılması
Production of microbial biopolymer and research on using as antimicrobial surface
GÖZDE KOŞARSOY AĞÇELİ
- Evaluation of interactions between SKOV3 cells and HER2 targeted monoclonal antibody with quartz crystal microbalance with dissipation as a novel approach
Disipasyonlu kuvars kristal mikroterazi ile SKOV3 hücreleri ve HER2 hedefli monoklonal antikor arasındaki etkileşimlerin değerlendirilmesi
HATİCE EKER
Yüksek Lisans
İngilizce
2020
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FATMA NEŞE KÖK