Geri Dön

Isolation and characterization of an adhesin protein from the surface of a respiratory pathogen Moraxella catarrhalis

Moraxella catarrhalis bakterisinin yüzeyinden bir adhesin proteininin izole edilmesi ve karakterizasyonu

  1. Tez No: 129349
  2. Yazar: TOLGA TURAN
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. KAMRUDDİN AHMED
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Tıbbi Biyoloji, Medical Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Moraxella catarrhalis, bağlanma, bağlanma inhibisyon deneyi, adhesin. ' &&&****, Moraxella catarrhalis, adherence, attachment inhibition asssay, adhesin. IV
  7. Yıl: 2002
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: İhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 72

Özet

ÖZET MORAXELLA CATARRHAUS BAKTERİSİNİN YÜZEYİNDEN BİR ADHESİN PROTEİNİNİN İZOLE EDİLMESİ VE KARAKTERİZASYONU TOLGA TURAN Moleküler Biyoloji ve Genetik Yüksek Lisans Tez Yöneticisi: Doç. Dr. Kamruddin Ahmed Ağustos 2002, 59 sayfa İnsan boğaz florasının bir üyesi olan Moraxella catarrhalis, 80'li yılların başından itibaren bir patojen olarak önem kazanmaya başlamıştır. M. catarrhalis çocuklarda orta kulak iltahabı ve yetişkinlerde (özellikle kronik bronşit hastalarında) alt solunum yolu enfeksiyonunda en çok karşılaşılan üçüncü bakteridir. Antibiyotik dirençli suşların son zamanlarda çok artması (bir çok yerde 100%) ve bu bakteriye karşı başardı bir aşı geliştirilememiş olması, M. catarrhalis üzerine yapılan çalışmaları arttırmıştır. Bu çalışmada molekül ağırlığı 55 kDa olan bir protein M. catarrhalis' m yüzeyinden celite kromatografisi metoduyla izole edilmiştir. Bu proteinin ısı dirençli olduğu ve 2-merkaptoethanol ve DTT tarafından etkilenmediği bulunmuştur. Proteinin immunojenik olduğu tavşan ve insanda yapılan deneyler sonucu ispatlanmıştır. Buna ek olarak proteinin amino kısmından 40 amino asitlik bölümü Edman metoduyla belirlenmiştir. Proteinin bakteride adhsin olarak görev yaptığı bağlanma inhibisyonu deneyleriyle gösterilmiştir. Bu deneylerde 55 kDa proteininin insan boğaz epitel hücreleriyle inkübe edilmesi M. catarrhalis'' m boğaz hücrelere bağlanmasını azaltmıştır. Benzer mantıkla bu proteine karşı üretilmiş monoklonal antikorun M. catarrhalis ile inkübe edilmesi bakterinin hücrelere bağlanmasını azaltmıştır. Bu proteinin boğaz epitel hücrelerine bağlandığı immunofloresans metodu ile de gösterilmiştir. 55 kDa proteini kodlayan genin klonlanması için protein sekansından elde edilen dejenere primerlerle PCR yapılmıştır. Sonuç olarak 500 bazlık bir fragman elde edilmiştir ama bu fragmanın amino asit zinciriyle homolog olmadığı görülmüştür. Buna ek olarak M. catarrhalis genomundan hazırlanan gen kütüphanesi monoklonal antikor ve radyoaktif işaretli bir oligonukleotid ile taranmıştır. Çıkan pozitif kolonilerin sekanslanması sonucu elde edilen bilgiler amino asit zinciriyle karşılaştırılmış fakat homoloji bulunamamıştır. Elde edilen pozitif klonlar sonuna kadar henüz sekanslanmamıştır.

Özet (Çeviri)

ABSTRACT ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF AN ADHESIN PROTEIN FROM THE SURFACE OF A RESPIRATORY PATHOGEN MORAXELLA CATARRHALIS TOLGA TURAN M. S in Molecular Biology and Genetics Supervisor: Assoc. Prof. Kamruddin Ahmed August 2002, 59 pages Moraxella catarrhalis is a member of the normal flora of upper respiratory tract. Starting in the early 1980s it gained importance as an important cause of otitis media in children and lower respiratory tract infections in adults with chronic obstructive pulmonary disease. P-lactamase producing strains of M. catarrhalis has been increasing at a very fast rate. In some locations, 100% of the strains are (5- lactamase producer. The pathogenesis of infection by this bacterium is not clearly understood which hindered the development of a vaccine. In this study, a surface protein of about 55 kDa was isolated from M. catarrhalis by celite chromatography. It is a heat stable protein and is not affected by 2-mercaptoethanol or dithiothreitol treatment. The immunogenic property of the protein has been determined by immunizing rabbits with M. catarrhalis and detecting the antibody response in serum against 55 kDa protein by Western blotting. In addition, the protein is immunogenic in humans as antibody against 55 kDa protein can be detected in the sputum of patients with M. catarrhalis infection. Moreover, we determined upto 40 amino acids at the Af-terminal and also two fragments of the protein. To determine the function of the protein, attachment inhibition assays were performed and it was found that 55 kDa protein competetively inhibits attachment of M. catarrhalis to human pharyngeal epithelial cells (HPEC). Similarly, monoclonal antibody against 55 kDa (mAb) blocks the protein and inhibits the attachment of M. catarrhalis to HPEC. These two lines of evidence show that 55 kDa protein is an adhesin of M. catarrhalis which mediate attachment to HPEC. In addition, immunoflourescence experiments further verified that 55 kDa protein binds to HPEC. To sequence the gene encoding 55 kDa protein, PCR was done using degenerate primers constructed from the N~ terminal amino acid sequence. PCR amplification of the possible gene of 55 kDa protein resulted in a 500 bp fragment, but no homology can be obtained with N- terminal amino acid sequence. In addition, a genomic library of M. catarrhalis is prepared and screened with mAb and with a radiolabelled oligonucleotide probe. We isolated several positive clones; therefore in future it might be possible to sequence the gene encoding 55 kDa protein from these clones.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    79691

    Tükürük müsinleri MG1 ve MG2'nin izolasyonu ve müsin-bağlanan oral streptococ adezinlerinin tespiti ve tanımlanması

    The Identification and characterization of salivary mucin-binding adhesins from oral streptococci

    MEHMET KESİMER

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    BiyokimyaGazi Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NEDRET KILIÇ

  2. Tez No

    823936

    Investigation of helicobacter pylori virulence genes and t-cell responses in pediatric gastritis patients

    Pediatrik gastrit hastalarında helikobakter pylori virülans genleri ve t-hücre cevaplarının araştırılması

    NİRAN ÖZDEMİR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    Allerji ve İmmünolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYÇA SAYI YAZGAN

    DR. ÖĞR. ÜYESİ SİNEM ÖKTEM OKULLU

  3. Tez No

    507601

    Prevalence, molecular characterization, virulence factors and antimicrobial resistance of Cronobacter spp. in ready-to-eat foods

    Tüketime hazır gıdalarda Cronobacter spp.'nin yaygınlığı, moleküler karakterizasyonu, virülans faktörleri ve antimikrobiyal dirençliliği

    HAFİZE GİZEM ERTÜRK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    BiyolojiAbant İzzet Baysal Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SEZA ARSLAN

  4. Tez No

    711590

    Characterization of autoinflammatory manifestatioins in nemo deficiency and analysis of gene expression patterns in LRBA and CTLA-4 deficiencies

    Nemo eksikliğinde otoenflamatuvar bulguların karakterizasyonu ile LRBA ve CTLA-4 eksikliklerinde gen ekspresyonlarının analiz edilmesi

    NAZ SÜRÜCÜ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2022

    Allerji ve İmmünolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MAYDA GÜRSEL

  5. Tez No

    296019

    Staphylococcus epidermidis biyofilmlerine karşı antimikrobiyal aktivite gösteren bakteriyofajların izolasyon ve karakterizasyonu

    Isolation and characterization of bacteriophages with antimicrobial activity against S. epidermidis biofilms

    ESRA NURTEN ÇECE

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    BiyomühendislikHacettepe Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TÜLİN KUTSAL

    YRD. DOÇ. NUNO MİGUEL DİAS CERCA

Geri Dön