Biyolojik materyallerde porfirinlerin yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (HPLC) ile ayrımı ve klinik uygulaması
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 137974
- Danışmanlar: PROF. DR. İSMAİL KURT
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2003
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gata
- Enstitü: Tıp Fakültesi
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya ve Klinik Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
VI- ÖZET Bu çalışmada, biyolojik materyallerde (idrar, gaita) yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (HPLC) ile porfirinlerin fraksiyonasyonu metodu kurularak irdelendi ve testin porfiriyaların tanı ve ayırıcı tanısındaki değeri 12 porfiriya vakasında incelendi. Porfirin HPLC metodu aynı kolonla, hem idrar hem de gaitadaki bireysel porfirinlerin (Üro-, hepta-, heksa-, penta-, kopro- ve protoporfirin) ve izomerlerinin ( Tip-I ve Tip-Ill) ayrımına olanak sağladı. Metodun tüm bireysel porfirinler için 0-2000 nmol/L arasında doğrusal olduğu, iki ayrı konsantrasyonda hazırlanmış miks porfirin standardı kullanılarak yapılan gün içi (intra-assay precision) ve günler arası (inter-assay precision) çalışmada değişim katsayı değerleri tüm bireysel porfirinler için kabul edilebilir sınırlarda (<%15) bulundu. Ortalama (±SD) verim, idrar çalışmalarında, üroporfirin-l için % 102,3 + 3.0 ve koproporfirin-lll için ise % 101,1 ± 2.0; gaita çalışmalarında üroporfirin için % 99,6 ± 4.3, heptaporfirin için % 98,5 ± 5,2, heksaporfırin için 101,8 ± 2,2, pentaporfirin için %97,7 ± 1,7, koproporfirin için %99 + 2,5 ve mezoporfirin için %98,8 ± 1,4 olarak kabul edilebilir bulundu. Metodun analitik duyarlılığı 1,1 nmol/L olarak bulundu. Bireysel porfirinlerin doğruluk çalışması yeterli saflıkta standart temin edilemediğinden konsantrasyon bazında yapılamadı, bu nedenle sonuçlar total porfirin %'si olarak hesaplandı. Ancak yaklaşık 6 yıldır katıldığımız porfirin ekstemal kalite kontrol“RCPA-AACB Chemical Pathology Quality Assurance Program (Australia)”örneklerinin % median değerleriyle, HPLC sonuçlarımız arasında büyük oranda korelasyon bulunduğu için bu metodla yapılan porfirin fraksiyonasyonun analitik olarak doğru olduğu kabul edildi. Referans değer çalışması 19 sağlıklı birey idrarı ve 9 sağlık birey gaitası ile yapıldı. Sonuçlar genel olarak kaynaklarla uyumlu bulundu. Metodun klinik uygulama çalışmalarında daha önce diğer hastanelerde ve GATA'da tanı almış toplam 12 porfiriya hastasının donmuş idrar va gaita örneklerinin HPLC ile porfirin fraksiyon patentlerinin değerlendirilmesi sonucu, 4 adet CEP, 5 adet EPP, 2 adet VP ve 1 adet de PCT vakası saptandı. Çalışmanın dramatik sonucu daha önce diğer hastanelerde ve GATA'da PCT tanısı almış 3 vakanın tanısının CEP olarak değiştirilmesidir. Porfirin HPLC metodu daha önce idrar ve gaita porfirin fraksiyonasyonu için laboratuvarımızda kullanılan ince tabaka kromatografisine göre, kantitatif sonuç verme ve izomer ayrımına olanak sağladığından TLC metodunun yerine kullanılması daha uygun bulundu. Sonuç olarak porfiriyaların biyokimyasal tanı ve ayırıcı tanısında, diğer porfirin ve prekürsör analizlerinin yanı sıra HPLC ile porfirin ve izomerlerinin ayrımının yapılmasının şart olduğu saptandı. 61
Özet (Çeviri)
VII- SUMMARY In this study, we aimed to assess and develop method for the fractionation of porphyrins by HPLC in biological materials (urine, feces), and 12 cases with porphyria were investigated with respect to diagnosis and differential diagnosis by using this test. Porphyrin HPLC method let us the seperation individual porphyrins (uro,-, hepta-, hexa-, penta-, copra- and protoporphyrin) and their isomers (type-l and type- Ill) in both urine and fecal samples on the same column. It was found that the method was linear up to 2000 nmol/L for individual porphyrins, and intra-assay and inter-assay precisions were within reasonable limits (<15%) by using mixed porphyrin standard prepared in two different concentrations. Mean recoveries (± SD) were102,3 % ± 3.0 for urine uroporphyrin-l, 101,1 % ± 2.0 for urine coproporphyrin-lll, but 99,6 % + 4.3 for uroporphyrin, 98,5 % ± 5.2 for heptaporphyrin, 101,8 % ± 2.2 for hexaporphyrin, 99,7 % ±1.7 for pentaporphyrin, 99 % ± 2.5 for coproporphyrin and 98,8 % ± 1.4 for mesoporphyrin in fecal studies. So, analitical sensitivity of this method was 1,1 nmol/L. Precision studies of individual porphyrins could not be performed in concentration level since the standard with required purity was not obtained, and therefore, the results were calculated in % of total porphyrin. However, porphyrin fractination by this method was analitically acceptable because a significant correlation was found between our HPLC results and % median values of samples of porphyrin external quality control program (RCPA-AACB Chemical Pathology Quality Assurance Program (Australia)) which we have been participating for about 6 years. Urine samples of 19 healty subjects and faecal samples of 9 healthy individuals were included in the reference value study and results obtained were found compatible with references. In the clinical application of this method, 4 CEP cases, 5 EPP cases, 2 cases of VP and a case of PCT were according to the results of the evaluation of porphyrin fraction patterns by HPLC of frozen urine and faecal samples of 12 porphyria patients previously diagnosed in other hospitals and GMMA. The attractive results of this study was the change of diagnosis of 3 cases into CEP which had been diagnosed as PCT before in other hospitals and GMMA. When this method was compared with thin layer chromatography, it was found practical to be performed instead of TLC since this may give quantitative result and give possibility for isomer seperation. As a consequence, in biochemical diagnosis and differential diagnosis of porphyria, porphyrin and isomer seperation by HPLC should be performed in addition to analysis of porphyrin and precursors. 62
Benzer Tezler
- Kinolin grubu içeren bazı yeni porfirin bileşiklerinin sentezi ve yapılarının aydınlatılması
Synthesis and structures elucidation of some new porphyrin compounds containing quinoline group
MILAD NOROUZIDASTJERDI
- Yeni silisyum ftalosiyaninlerin sentezi ile fotokimyasal ve biyolojik özelliklerinin incelenmesi
Synthesis of new silicon phthalocyanines with the investigation of their photochemical and biological properties
CANAN USLAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2012
Kimyaİstanbul Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. B. ŞEBNEM SESALAN
- Biyolojik materyallerde B12 vitamini tayini
Determination of vitamin B12 in biological material
RABİYE ÇINAR
- Biyolojik materyallerde kuvvet deformasyon ilişkisinin grafiksel olarak belirlenmesinde kullanılacak ölçüm düzeneğinin geliştirilmesi
Using development of measure mechanism at determination graphly relation of force deformation at biological materials
TANER GÜLER
- Biyolojik materyallerde B12 vitamini bileşenlerinin ve diğer suda çözünür vitaminlerin dağılımının incelenmesi
Investigation of vitamin B12 components and other water soluble vitamins in biological materials
RABİYE ÇINAR BUDAK