Endotel hücrelerinde 17beta-estradiol'un akut etki mekanizmasının araştırılması
Investigation of the mechanisms of the acute effect of 17beta-estradiol on endothelial cells
- Tez No: 138033
- Danışmanlar: PROF. DR. KAYA EMERK
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2003
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Marmara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 62
Özet
I.OZET Deneysel ve klinik çalışmalar estrojenin damar yapısı ve fonsiyonları üzerinde olumlu etkileri olduğunu göstermektedir. Estrojenlerin gen transkripsiyonunu modüle ederek uzun sürede etki gösterdikleri bilinmesine karşın, son yıllardaki çalışmalar E2' nin hızlı ve nongenomik etkileri de olduğunu ortaya çıkarmıştır. Estrojenin bu etkilerini membranda varlığı henüz kanıtlanmamış estrojen reseptörü aracılığı ile hücre içi sinyal ileti yolaklarının aktivasyonu vasıtasıyla gerçekleştirdiği ileri sürülmekle beraber bu etki mekanizması tam olarak bilinmemektedir. Bu çalışmada, endotel hücrelerde estrojenin hızlı sinyal ileti mekanizmasına ışık tutmak amacıyla, 17 p-estradiol' ün (E2) tirozin kinaz yolu aktivasyonu üzerindeki etkisi araştırılmıştır. Akut E2' nin tirozin fosforilasyonu üzerindeki etkisi, insan göbek kordon ven endotel hücre (HUVEC) kültürlerinin E2, genistein veya tamoksifen ile inkübasyonundan sonra elde edilen hücre lizatlannda immünblotting yöntemi ile araştırıldı. İlaveten E2' nin fosfolipaz C gama (PLC y)' nin tirozin fosforilasyonu üzerindeki etkisi, hücre lizatının anti-fosfotirozin antikor ile immunpresipite edilmesinden sonra anti- PLC y antikoru kullanılarak incelendi. E2' nin MAPK a kti vitesi üzerindeki etkisi ise anti -aktif MAPK antikoru kullanılarak tespit edildi. Bulgularımızda 5 dakika 100 nM E2 ile inkübe edilmiş endotel hücre kültürlerinde, genomik etki ile bağdaşmayan bir hızda -120 ve 65 kDaMuk proteinlerin tirozin fosforilasyonunun arttığı bu etkinin tirozin kinaz inhibitörü genistein veya estrojen reseptör antagonisti tamoksifen ile azaldığı görülmektedir. Bulgularımız aynı zamanda estrojenin PLC y' nin tirozin fosforilasyonunu artırmadığını göstermektedir. MAPK (ERK1,2) aktivitesi üzerindeki çalışmalarda ise E2 ve EGF'nin MAPK fosforilasyonunu artırdığı genistein ve tamoksifen bu artışı bloke ettiği saptanmıştır. Sonuçlarımızdan E2 ile akut olarak uyarılmış endotelde tirozin fosforilasyonu artan proteinlerin sinyal ileti yoluna ait proteinler olabileceği söylenebilir. Bununla birlikte PLC y' nin aktivasyonunun E2' nin akut sinyal ileti yolunda rolü olmadığı görülmektedir. HUVEC te E2' nin akut etkisi ile tirozin fosforilasyonu artan bu proteinlerin saflaştırılması ve karakterizasyonu endotel hücrelerde estrojenin akut etkisinde aktive olan sinyal ileti yolunun açıklanmasına ışık tutabilir.
Özet (Çeviri)
II. SUMMARY INVESTIGATION OF THE MECHANISMS OF THE ACUTE EFFECT OF 17p- ESTRADIOL ON ENDOTHELIAL CELLS Many experimental and clinical studies have demonstrated significant effects of estrogens on vascular structure and function. Estrogens are known to show long term effects by modifying the transcription of certain genes. However there is accumulating evidence that estrogens also have rapid and nongenomic effects which are mediated by putative membrane receptors that are coupled to cytosolic signal transduction proteins. The mechanism of rapid signalling is not completely clear and the aim of this study is to investigate the mechanism of rapid signalling of E2 on endothelial cells. In this study, confluent human umbilical vein endothelial cells were incubated with 17p-Estradiol (E2), genistein or tamoxifen and the cells were lysed. Tyrosine phosphorylated proteins in lysed cells were detected with monoclonal anti-phosphotyrosine antibody by immunoblotting. In addition the role of E2 on tyrosine phosphorylation of phospholipase C gamma (PLC y) was investigated by immunoblotting with anti-phospholipase C gama antibody after immunoprecipitation with anti-phosphotyrosine antibody. Effect of E2 on MAPK activity was investigated by immunoblotting with anti-activated MAPK antibody. Immunoblotting with anti-phosphotyrosine antibody demonstated that 5 min incubation with lOOnM E2 increases the tyrosine phosphorylation proteins of around 120 kDa and 65 kDa Mr. In the presence of the tyrosine kinase inhibitor genistein and the estrogen receptor antagonist tamoxifen the level of tyrosine phosphorylation under these conditions was reduced by 71% and 59% respectively. Our data also demonstrates that E2 treatment does not increase the phosphorylation of phospholipase C-y. Western blot analysis demonstrates that E2 and EGF increases MAP kinase (ERKİ, 2) activity while genistein and tamoxifen blocks the activation of MAPK. It can be concluded that the proteins whose tyrosine phosphorylation was increased may be involved in the signal transduction pathway stimulated by E2 in HUVEC. Our results also demonstrated that PLC y activation is not involved in this pathway. Purification and characterization of these proteins may help to shed light on the E2 induced signalling pathway in endothelial cells.
Benzer Tezler
- 17beta-estradiolün endotel hücre kültürlerindeki asimetrik dimetilarginin (AOMA) düzeylerine etkisinin incelenmesi
Başlık çevirisi yok
ÖZLEM UNAY
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2003
BiyokimyaMarmara ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SERPİL BİLSEL
- 17(Beta)-estradiol'ün endotel hücrelerinde etkili olduğu genlerin ekspresyon düzeyleri
The Expression levels of the levels of the genes which are acted on by the 17(Beta)-estradiol at the endothelial cells
BOĞAÇ KAYNAK
Yüksek Lisans
Türkçe
1999
Tıbbi BiyolojiMarmara ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYŞE ÖZER
- 17 Beta-estradiolün endotel hücre kültüründe endotelin-1 gen expresyonu üzerindeki etkisi
17 beta-estradiol moduletse endothelin-1 expression and release from cultured human umblical vein endothelial cells (HUVEC)
ERKAN TETİK
Yüksek Lisans
Türkçe
1998
Tıbbi BiyolojiMarmara ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYŞE ÖZER
- Behçet hastalarında serum follistatin-like protein 1 düzeyi ile hastalık aktivitesi arasındaki ilişkinin araştırılması
Investigation of the relationship between serum follistatin-like protein 1 level and disease activity in behçet patients
MESUT DEMİR
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2020
Fiziksel Tıp ve RehabilitasyonDicle ÜniversitesiFiziksel Tıp ve Rehabilitasyon Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. İBRAHİM BATMAZ
- Kornea endotel hücrelerinde TGF-β ve inhibitörlerinin hücre proliferasyonu ve hücre yaşlanması üzerine etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of TGF- β and TGF- β inhibitors on cell proliferation and senescence in human corneal endothelial cells
EBRU AVCI ÖZEN
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
FizyolojiPamukkale ÜniversitesiFizyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. EMİNE KILIÇ TOPRAK
DOÇ. DR. AYŞEGÜL ÇÖRT DÖNMEZ