Geri Dön

Isolation and immunologic characterization of theta class glutathione S-transferase GSTT2-2 from bovine liver

Sığır karaciğerindeki teta-sınıfı glutatyon S-transferaz: GSTT2-2'in izolasyonu ve immünolojik karakterizasyonu

PDF İndir

  1. Tez No: 153354
  2. Yazar: SULTAN BELGİN İŞGÖR
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. NURSEN ÇORUH, PROF. DR. MESUDE İŞCAN
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Glutatyon S-transferazIer, Teta sınıfı GST'ler, Saflaştırma, Western Blot, Karakterizasyon, Glutathione-S-transferases, Theta class GSTs, Purification, Western blotting, characterization
  7. Yıl: 2004
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 161

Özet

Glutatyon-S-transferazlar (GST) elektrofilik yapıdaki ksenobiyotikler ve bazı endojenlerin detoksifikasyonlannda rol oynayan aym zamanda reaktif oksijen metabolitlerinin nükleofil tutan tripeptid yapısındaki glutatyona konjugasyonunu sağlayarak vücudu koruyan bir enzim grubudur. Ökaryotlarda ve prokaryotlarda, sitoplazmada, mikrozomlarda ve mitokondride bulunurlar. Sitozolik GST 1er altı grupta toplanırlar; alfa, mu, pi, sigma, zeta ve teta Diğer GST'Ierle karşılaştırıldığında, teta sınıfı GST'lerin izolasyonuy ve karakterizasyonu oldukça zordur. İnsanda; GSTTl-1 ve GSTT2-2 olmak üzere iki, siçanda rGSTTl-1, rGSTT2-2 ve 13-13 olmak üzevvre üç, ve fare de bir tane teta sınıfı GST' leri tanımlanmıştır. Bu çalışmada, 1-MS ' a karşı yüksek aktivite içeren teta sınıfı GSTT2-2 izoziminin sığır karaciğerinden %3 lük ürün ve yine 3 kat saf olarak izolasyonu ve saflaştırılması gerçekleştirilmiştir. Saflaştırma protokolü 1-MS' a karşı yüksek saflaştırılması gerçekleştirilmiştir. Saflaştırma protokolü 1-MS' a karşı yüksek aktiviteye sahip sitozolik fraksiyonun sırasıyla DEAE anyon değişim, S- hexylglutatyon afmite, Oranj A ve kromatofokuslama kolonlanna uygulanmasıyla elde edilmiş, protein miktarı ve 1-MS' a karşı enzim aktivitesi son kolondan sonra hızla düşmüştür. Saflaştınlan numune sadece 1-MS'a karşı 77 nmole/min/mg değerinde aktivite göstermiştir. Saflaştınlan sığır karaciğeri GSTT2-2 izoziminin SDS-PAGE ile molekül ağırlığı (Mr) 28,200 olarak bulunmuş bu sonuç Western Blot sonucu ile de desteklenmiştir. Saflaştınlan numune diğer kolon fraksiyonlan ile beraber anti GSTT2-2, antiGST alfa, antiGST mu ve antiGST pi antikorlan ile test edilmiştir. Enzim aktivitesleri 1-MS, CDNB ve 4-NBC substartlan kullanılarak tayin edilmiştir.

Özet (Çeviri)

The glutathione-S-transferases (GSTs) (EC.2.5.1.18) are enzymes that participate in cellular detoxification of endogenous as well as foreign electrophilic compounds, function in the cellular detoxification systems and are evolved to protect cells against reactive oxygen metabolites by conjugating the reactive molecules to the nucleophile scavenging tripeptide glutathione (GSH, y-glu-cys-gly). The GSTs are found in all eukaryotes and prokaryotic systems, in the cytoplasm, on the microsomes, and in the mitochondria Cytosolic GSTs have been grouped into seven distinct classes as: alpha (a), mu (u,), pi (7t), sigma (a), omega, theta (9) and zeta (8). In comparison with other GSTs, class theta enzymes have proven difficult to isolate and characterize. Two distinct theta GSTs have been identified in man, GSTTl-1 and GSTT2-2 three in the rat rGSTl-1, rGSTT2-2 and 13-13 and one in the mouse, this study, a class theta GST (GSTT2-2), with high activity towards 1-MS was isolated and purified from bovine liver in 3% yield with a purification factor of 3 -fold. The purification protocol included a sequential DEAE cellulose anion exchanger liquid chromatography column, S-hexylglutathione agarose affinity column, dye binding orange A and chromatofocusing columns. The enzyme activity and protein content decreased rapidly after the last step of purification. The purified GSTT2-2 showed significant activity only towards 1-MS as 77 nmole/min/mg. The GSTT2-2 purified from bovine liver had a molecular weigth (Mr) value of about 28,200 which was also confirmed by Western Blott Analysis. The purified farctions of GSTT2-2 with other kolon farctions were tested with anti GSTT2-2, antiGST alfa, antiGST mu and antiGST pi antibodies. The enzyme activities towards CDNB, 4- nitrobenzylchloride (NBC) and 1-menapthyl sulfate were measured as described by Habig and Jacoby.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    806655

    Isolation and characterization of primary human brain mural cells

    Primer insan beyni mural hücrelerinin izolasyonu ve karakterizasyonu

    GÖKÇE GÖKMENOĞLU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2022

    Moleküler TıpKoç Üniversitesi

    Sağlık Bilimleri Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ATAY VURAL

  2. Tez No

    394115

    Süt dişi kaynaklı mezenkimal kök hücreler (SHHED), tam gömük yirmi yaş dişi kaynaklı mezenkimal kök hücreler (DPSCS) ve diş folikülü kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin (DFSCS) immünolojik özelliklerinin krşılaştırılması

    The comparision of immunologic properties of stem cells isolated from human exfoliated deciduous teeth, dental pulp and dental follicle

    SELİN YILDIRIM

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Allerji ve İmmünolojiMarmara Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TUNÇ AKKOÇ

  3. Tez No

    119474

    Cytochrome P4502B-type protein from feral leaping mullet (liza saliens) liver microsomes: Its isolation and biochemical and immunological characterization

    Doğal kefal balığı (marvaki) karaciğerinden sitokrom P4502B-tipi protein: Saflaştırılması, biyokimyasal ve immunolojik karakterizasyonu

    AZRA BOZCAARMUTLU

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2002

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. EMEL ARINÇ

  4. Tez No

    467635

    Koyun çiçek hastalığına karşı aşı modellerinin geliştirilmesi amacıyla antijenik peptid epitopunun sentezlenmesi ve karakterizasyonu

    Synthesi̇s and structure analysi̇s of anti̇geni̇c pepti̇de epi̇tope to the development of vaccines against sheeppox disease

    ELİF FATMA YILMAZ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    BiyomühendislikYıldız Teknik Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ZEYNEP AKDESTE

  5. Tez No

    823936

    Investigation of helicobacter pylori virulence genes and t-cell responses in pediatric gastritis patients

    Pediatrik gastrit hastalarında helikobakter pylori virülans genleri ve t-hücre cevaplarının araştırılması

    NİRAN ÖZDEMİR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    Allerji ve İmmünolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYÇA SAYI YAZGAN

    DR. ÖĞR. ÜYESİ SİNEM ÖKTEM OKULLU

Geri Dön