Isolation and immunologic characterization of theta class glutathione S-transferase GSTT2-2 from bovine liver
Sığır karaciğerindeki teta-sınıfı glutatyon S-transferaz: GSTT2-2`in izolasyonu ve immünolojik karakterizasyonu
- Tez No: 153354
- Danışmanlar: DOÇ. DR. NURSEN ÇORUH, PROF. DR. MESUDE İŞCAN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Glutatyon S-transferazIer, Teta sınıfı GST'ler, Saflaştırma, Western Blot, Karakterizasyon, Glutathione-S-transferases, Theta class GSTs, Purification, Western blotting, characterization
- Yıl: 2004
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Glutatyon-S-transferazlar (GST) elektrofilik yapıdaki ksenobiyotikler ve bazı endojenlerin detoksifikasyonlannda rol oynayan aym zamanda reaktif oksijen metabolitlerinin nükleofil tutan tripeptid yapısındaki glutatyona konjugasyonunu sağlayarak vücudu koruyan bir enzim grubudur. Ökaryotlarda ve prokaryotlarda, sitoplazmada, mikrozomlarda ve mitokondride bulunurlar. Sitozolik GST 1er altı grupta toplanırlar; alfa, mu, pi, sigma, zeta ve teta Diğer GST'Ierle karşılaştırıldığında, teta sınıfı GST'lerin izolasyonuy ve karakterizasyonu oldukça zordur. İnsanda; GSTTl-1 ve GSTT2-2 olmak üzere iki, siçanda rGSTTl-1, rGSTT2-2 ve 13-13 olmak üzevvre üç, ve fare de bir tane teta sınıfı GST' leri tanımlanmıştır. Bu çalışmada, 1-MS ' a karşı yüksek aktivite içeren teta sınıfı GSTT2-2 izoziminin sığır karaciğerinden %3 lük ürün ve yine 3 kat saf olarak izolasyonu ve saflaştırılması gerçekleştirilmiştir. Saflaştırma protokolü 1-MS' a karşı yüksek saflaştırılması gerçekleştirilmiştir. Saflaştırma protokolü 1-MS' a karşı yüksek aktiviteye sahip sitozolik fraksiyonun sırasıyla DEAE anyon değişim, S- hexylglutatyon afmite, Oranj A ve kromatofokuslama kolonlanna uygulanmasıyla elde edilmiş, protein miktarı ve 1-MS' a karşı enzim aktivitesi son kolondan sonra hızla düşmüştür. Saflaştınlan numune sadece 1-MS'a karşı 77 nmole/min/mg değerinde aktivite göstermiştir. Saflaştınlan sığır karaciğeri GSTT2-2 izoziminin SDS-PAGE ile molekül ağırlığı (Mr) 28,200 olarak bulunmuş bu sonuç Western Blot sonucu ile de desteklenmiştir. Saflaştınlan numune diğer kolon fraksiyonlan ile beraber anti GSTT2-2, antiGST alfa, antiGST mu ve antiGST pi antikorlan ile test edilmiştir. Enzim aktivitesleri 1-MS, CDNB ve 4-NBC substartlan kullanılarak tayin edilmiştir.
Özet (Çeviri)
The glutathione-S-transferases (GSTs) (EC.2.5.1.18) are enzymes that participate in cellular detoxification of endogenous as well as foreign electrophilic compounds, function in the cellular detoxification systems and are evolved to protect cells against reactive oxygen metabolites by conjugating the reactive molecules to the nucleophile scavenging tripeptide glutathione (GSH, y-glu-cys-gly). The GSTs are found in all eukaryotes and prokaryotic systems, in the cytoplasm, on the microsomes, and in the mitochondria Cytosolic GSTs have been grouped into seven distinct classes as: alpha (a), mu (u,), pi (7t), sigma (a), omega, theta (9) and zeta (8). In comparison with other GSTs, class theta enzymes have proven difficult to isolate and characterize. Two distinct theta GSTs have been identified in man, GSTTl-1 and GSTT2-2 three in the rat rGSTl-1, rGSTT2-2 and 13-13 and one in the mouse, this study, a class theta GST (GSTT2-2), with high activity towards 1-MS was isolated and purified from bovine liver in 3% yield with a purification factor of 3 -fold. The purification protocol included a sequential DEAE cellulose anion exchanger liquid chromatography column, S-hexylglutathione agarose affinity column, dye binding orange A and chromatofocusing columns. The enzyme activity and protein content decreased rapidly after the last step of purification. The purified GSTT2-2 showed significant activity only towards 1-MS as 77 nmole/min/mg. The GSTT2-2 purified from bovine liver had a molecular weigth (Mr) value of about 28,200 which was also confirmed by Western Blott Analysis. The purified farctions of GSTT2-2 with other kolon farctions were tested with anti GSTT2-2, antiGST alfa, antiGST mu and antiGST pi antibodies. The enzyme activities towards CDNB, 4- nitrobenzylchloride (NBC) and 1-menapthyl sulfate were measured as described by Habig and Jacoby.
Benzer Tezler
- Çeltik kabuklarının yalıtım malzemesi olarak kullanılması
Başlık çevirisi yok
B.CİHAN ÇELEBİ
Yüksek Lisans
Türkçe
1986
Makine MühendisliğiUludağ ÜniversitesiMakine Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MEHMET KIRBIYIK
- Marmara bölgesindeki kavun ve karpuz yetiştiriciliğinin bugünkü durumu, sorunları ve öneriler
The Status of melon and water melongrowing in Marmara region at present and its Problems and recommedations
MEHMET GÜLER
- Traditional vernacular houses in Anatolia: The question of evaluative criteria
Anadolu geleneksel yöresel konut mimarlığında değerlendirme ölçütleri sorunu
OKAN ÜSTÜNKÖK
Doktora
İngilizce
1987
MimarlıkOrta Doğu Teknik ÜniversitesiMimarlık Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÖNÜL TANKUT
- Bira ve alkol üretiminde kullanılan bazı enzimlerin mikrobiyal yolla eldesi
Başlık çevirisi yok
HÜSEYİN ÜSTÜNES
Yüksek Lisans
Türkçe
1985
Gıda MühendisliğiEge ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ULGAR GÜVENÇ
- Balıkesir tavukçuluk işletmelerinin yapısal özellikleri üzerinde bir inceleme
Başlık çevirisi yok
MEHMET TOSUN