Isolation and immunologic characterization of theta class glutathione S-transferase GSTT2-2 from bovine liver
Sığır karaciğerindeki teta-sınıfı glutatyon S-transferaz: GSTT2-2'in izolasyonu ve immünolojik karakterizasyonu
- Tez No: 153354
- Danışmanlar: DOÇ. DR. NURSEN ÇORUH, PROF. DR. MESUDE İŞCAN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Glutatyon S-transferazIer, Teta sınıfı GST'ler, Saflaştırma, Western Blot, Karakterizasyon, Glutathione-S-transferases, Theta class GSTs, Purification, Western blotting, characterization
- Yıl: 2004
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 161
Özet
Glutatyon-S-transferazlar (GST) elektrofilik yapıdaki ksenobiyotikler ve bazı endojenlerin detoksifikasyonlannda rol oynayan aym zamanda reaktif oksijen metabolitlerinin nükleofil tutan tripeptid yapısındaki glutatyona konjugasyonunu sağlayarak vücudu koruyan bir enzim grubudur. Ökaryotlarda ve prokaryotlarda, sitoplazmada, mikrozomlarda ve mitokondride bulunurlar. Sitozolik GST 1er altı grupta toplanırlar; alfa, mu, pi, sigma, zeta ve teta Diğer GST'Ierle karşılaştırıldığında, teta sınıfı GST'lerin izolasyonuy ve karakterizasyonu oldukça zordur. İnsanda; GSTTl-1 ve GSTT2-2 olmak üzere iki, siçanda rGSTTl-1, rGSTT2-2 ve 13-13 olmak üzevvre üç, ve fare de bir tane teta sınıfı GST' leri tanımlanmıştır. Bu çalışmada, 1-MS ' a karşı yüksek aktivite içeren teta sınıfı GSTT2-2 izoziminin sığır karaciğerinden %3 lük ürün ve yine 3 kat saf olarak izolasyonu ve saflaştırılması gerçekleştirilmiştir. Saflaştırma protokolü 1-MS' a karşı yüksek saflaştırılması gerçekleştirilmiştir. Saflaştırma protokolü 1-MS' a karşı yüksek aktiviteye sahip sitozolik fraksiyonun sırasıyla DEAE anyon değişim, S- hexylglutatyon afmite, Oranj A ve kromatofokuslama kolonlanna uygulanmasıyla elde edilmiş, protein miktarı ve 1-MS' a karşı enzim aktivitesi son kolondan sonra hızla düşmüştür. Saflaştınlan numune sadece 1-MS'a karşı 77 nmole/min/mg değerinde aktivite göstermiştir. Saflaştınlan sığır karaciğeri GSTT2-2 izoziminin SDS-PAGE ile molekül ağırlığı (Mr) 28,200 olarak bulunmuş bu sonuç Western Blot sonucu ile de desteklenmiştir. Saflaştınlan numune diğer kolon fraksiyonlan ile beraber anti GSTT2-2, antiGST alfa, antiGST mu ve antiGST pi antikorlan ile test edilmiştir. Enzim aktivitesleri 1-MS, CDNB ve 4-NBC substartlan kullanılarak tayin edilmiştir.
Özet (Çeviri)
The glutathione-S-transferases (GSTs) (EC.2.5.1.18) are enzymes that participate in cellular detoxification of endogenous as well as foreign electrophilic compounds, function in the cellular detoxification systems and are evolved to protect cells against reactive oxygen metabolites by conjugating the reactive molecules to the nucleophile scavenging tripeptide glutathione (GSH, y-glu-cys-gly). The GSTs are found in all eukaryotes and prokaryotic systems, in the cytoplasm, on the microsomes, and in the mitochondria Cytosolic GSTs have been grouped into seven distinct classes as: alpha (a), mu (u,), pi (7t), sigma (a), omega, theta (9) and zeta (8). In comparison with other GSTs, class theta enzymes have proven difficult to isolate and characterize. Two distinct theta GSTs have been identified in man, GSTTl-1 and GSTT2-2 three in the rat rGSTl-1, rGSTT2-2 and 13-13 and one in the mouse, this study, a class theta GST (GSTT2-2), with high activity towards 1-MS was isolated and purified from bovine liver in 3% yield with a purification factor of 3 -fold. The purification protocol included a sequential DEAE cellulose anion exchanger liquid chromatography column, S-hexylglutathione agarose affinity column, dye binding orange A and chromatofocusing columns. The enzyme activity and protein content decreased rapidly after the last step of purification. The purified GSTT2-2 showed significant activity only towards 1-MS as 77 nmole/min/mg. The GSTT2-2 purified from bovine liver had a molecular weigth (Mr) value of about 28,200 which was also confirmed by Western Blott Analysis. The purified farctions of GSTT2-2 with other kolon farctions were tested with anti GSTT2-2, antiGST alfa, antiGST mu and antiGST pi antibodies. The enzyme activities towards CDNB, 4- nitrobenzylchloride (NBC) and 1-menapthyl sulfate were measured as described by Habig and Jacoby.
Benzer Tezler
- Isolation and characterization of primary human brain mural cells
Primer insan beyni mural hücrelerinin izolasyonu ve karakterizasyonu
GÖKÇE GÖKMENOĞLU
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
Moleküler TıpKoç ÜniversitesiSağlık Bilimleri Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ATAY VURAL
- Süt dişi kaynaklı mezenkimal kök hücreler (SHHED), tam gömük yirmi yaş dişi kaynaklı mezenkimal kök hücreler (DPSCS) ve diş folikülü kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin (DFSCS) immünolojik özelliklerinin krşılaştırılması
The comparision of immunologic properties of stem cells isolated from human exfoliated deciduous teeth, dental pulp and dental follicle
SELİN YILDIRIM
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
Allerji ve İmmünolojiMarmara ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TUNÇ AKKOÇ
- Cytochrome P4502B-type protein from feral leaping mullet (liza saliens) liver microsomes: Its isolation and biochemical and immunological characterization
Doğal kefal balığı (marvaki) karaciğerinden sitokrom P4502B-tipi protein: Saflaştırılması, biyokimyasal ve immunolojik karakterizasyonu
AZRA BOZCAARMUTLU
Doktora
İngilizce
2002
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF.DR. EMEL ARINÇ
- Koyun çiçek hastalığına karşı aşı modellerinin geliştirilmesi amacıyla antijenik peptid epitopunun sentezlenmesi ve karakterizasyonu
Synthesi̇s and structure analysi̇s of anti̇geni̇c pepti̇de epi̇tope to the development of vaccines against sheeppox disease
ELİF FATMA YILMAZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
BiyomühendislikYıldız Teknik ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ZEYNEP AKDESTE
- Investigation of helicobacter pylori virulence genes and t-cell responses in pediatric gastritis patients
Pediatrik gastrit hastalarında helikobakter pylori virülans genleri ve t-hücre cevaplarının araştırılması
NİRAN ÖZDEMİR
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
Allerji ve İmmünolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYÇA SAYI YAZGAN
DR. ÖĞR. ÜYESİ SİNEM ÖKTEM OKULLU