Sıçan ince barsağından glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enziminin saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin incelenmesi
Purification and characterization of glucose-6 phosphate dehydrogenase from rat small intestine
- Tez No: 156856
- Danışmanlar: PROF.DR. İZZET HAMDİ ÖĞÜŞ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Sıçan ince barsağı, glukoz-6-fosfat dehidrogenaz, saflaştırma, substrat, koenzim ve inhibitor kinetiği, Rat small intestine, ghıcose-6-phosphate dehydrogenase, purification, substrat, coenzyme and inhibitor kinetics
- Yıl: 2004
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 60
Özet
ÖZET Danışan, A., Sıçan ince barsak glukoz-6-fosfat dehidrogenazmın saflaştırılması ve kinetik özelliklerinin incelenmesi, Hacettepe Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Biyokimya Programı Bilim Uzmanlığı Tezi, Ankara, 2004. Glukoz-6- fosfat dehidrogenaz (E.C. 1.1. 1.49, p-D-glukoz-6-fosfat, NADP+ oksidoredüktaz) sıçan ince barsağından, DEAE-Fast Flow iyon değiştirici ve 2', 5'-ADP Sepharose 4B aflBnite kolonu kullanılarak % 19.3 verim ve 53.8 U/mg protein'lik özgül aktivite ile saflaştınldı. Poliakrilamid jel elekroforezi (PAGE) ile saflık konrolü yapıldı. SDS-PAGE'den enzimin altbirim molekül kütlesi 45 000 dalton olarak saptandı. Saflaştınlan enzimin optimum pH'sı potasyum fosfat tamponu derişiminin etkisi ekstrapolasyonla sıfirlandıktan sonra 8.3 olarak saptandı. 25-56 °C arası sıcaklığın sıçan ince barsak G6PD aktivitesine etkisi incelendi. 25-37 °C'de enzim aktivitesinin zamana bağlı olarak arttığı; 37 °C'de zamanla değişmediği; 45 °C'den sonra ise zamanla aktivite kaybettiği gözlendi. Enzimin optimum sıcaklığı 38.5 °C olarak saptandı. Arrhenius eşitliğinden, enzimin aktivasyon entalpisi 7902 kal/mol, aktivasyon enerjisi (Ea), 8516 kal/mol, sıcaklık artma faktörü Qıo ise 1.59 olarak saptandı. Enzimin kinetik analizinden, G6P ve NADP+ için Km değerleri sırasıyla 64.5 uM ve 23.19 uM bulundu. Hill grafiklemesinden yararlanılarak enzimin G6P ve NADP+ için Hill değişmezi (nH) 0.89 ve 0.71 bulundu ve enzim koenzimi ile kooperativite gösterirken, substratı ile göstermediği saptandı. Enzim, substrat analoglan Gal-6P'ı % 7, 2-dG-6P'ı % 5.8 oranında kullanırken koenzim analoglanndan NAD+'yi ise kullanamadığı belirlendi. Enzimi, NADPH'nin NADP+ ile karışık türde, 2,3- DPGA'nin de GöP'la kompetitif olarak inhibe ettiği ve Kj'lerin sırasıyla 26 uM ve 2.84 uM olduğu saptandı.
Özet (Çeviri)
VI ABSTRACT Danışan, A., Purification and characterization of glucose-6-phosphate dehydrogenase from the rat small intestine. Hacettepe University Institute of Health Sciences, Master of Science Thesis in Biochemistry, Ankara 2004. Glucose-6-hposphate dehydrogenase (E.C.I. 1.1. 49, pVD-glucose-6-phosphate, NADP+ oxidoreductase) was purified from small intestine of the rat using DEAE- Fast Flow, 2' 5'-ADP Sepharose 4B column chromatography with 19.3 % yield and had a spesific activity of 53.8 units per milligram proteine. Purity was controlled by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). The molecular mass of subunit of G6PD was found to be 45 000 daltons from SDS- PAGE. The pH of the enzyme was 8.3. The effect of temperature on G6PD stability was investigated (between 25-56 °C). The activity of enzyme up to 37 °C increased by time. At 37 °C no change in activity was detected but after 45 °C a sharp decrease in G6PD activity was observed. The optimum temperature for rat small intestine G6PD was 38.3 °C. From Arrhenius plot, Ea, AH, and Qio were found to be 8516 cal/mole, 7902 cal/mole and 1.59, respectively. The kinetic parameters, K", values for G6P and NADP+ were 64.5 and 23 uM, respectively. The Hill constants for G6P and NADP+ were 0.89 and 0.71. These findings indicate that enzyme show cooperativity with its coenzyme, but not with its substrate. The substrate analogues Gal-6P, 2-dG6P were used as substrate with 7 and 5.8 % efficiency with respect to G6P. NAD+ was not used as a coenzyme for rat small intestine G6PD. Inhibition of rat small intestine G6PD by NADPH was mixed-type with respect to NADP+ whereas 2,3-DPGA inhibition with respect to G6P was competitive type. The Kj values for NADPH and 2,3-DPGA were 26 and 2.84 uM respectively.
Benzer Tezler
- Sıçan ince barsağından 6-fosfoglukonat dehidrogenaz enziminin saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin incelenmesi
Purification and characterization of 6-phosphogluconate dehydrogenase from the rat small intestine
DENİZ CEYHAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2004
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF.DR. İZZET HAMDİ ÖĞÜŞ
- Sıçan ince barsak butirilkolinesterazının saflaştırılması ve bazı özelliklerinin incelenmesi
Purification and characterization of butyrylcholinesterase from rat intestine
ÖZLEM YILDIZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2003
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NEŞE ÇOKUĞRAŞ
- Sıçan ince bağırsak glutatyon S-transferaz enziminin saflaştırılması ve izozimlerinin hiperisin bileşiği ile bağlanma özelliklerinin incelenmesi.
Purification of glutathione S-transferase from rat small intestine and examining the binding properties of defined isozymes with the hypericin.
GAMZE TUNA
Yüksek Lisans
Türkçe
2008
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İZZET HAMDİ ÖĞÜŞ