Sıçan ince barsak butirilkolinesterazının saflaştırılması ve bazı özelliklerinin incelenmesi
Purification and characterization of butyrylcholinesterase from rat intestine
- Tez No: 137997
- Danışmanlar: DOÇ. DR. NEŞE ÇOKUĞRAŞ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Butirilkolinesteraz, sıçan ince barsağı, saflaştırma, substrat kinetiği, Triton X-100 etkisi, Butyrylcholinesterase, rat intestine, purification, substrat kinetics, effect of Triton X-100
- Yıl: 2003
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 57
Özet
ÖZET Yıldız Ö., Sıçan ince barsak butirilkolinesterazmm saflaştırılması ve bazı özelliklerinin incelenmesi, Hacettepe Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Biyokimya Programı Bilim Uzmanlığı Tezi, Ankara, 2003. Butirilkolinesteraz (BKE; açilkolin açilhidrolaz E.C. 3.1.1.8.) sıçan ince barsağından Prokainamid- Sepharose 4B afinite kromatografisi ile 256 kez saflaştırıldı. Poliakrilamid jel elektroforezi (PAGE) ile saflık kontrolü yapıldı.Saflaştınlan enzimin optimum pH'sı, potasyum fosfat tamponu derişiminin etkisi sıfırlandıktan sonra 7.2 olarak saptandı. 20-60°C arası sıcaklığın sıçan ince barsak BKE aktivitesine etkisi incelendi. 20, 30 ve 37°C'de enzim aktivitesinin zamana bağlı olarak arttığı; 40°C'de zamanla değişmediği; 45, 50, 55 ve 60 °C'lerde ise zamanla aktivite kaybettiği gözlendi. Enzimin farklı sıcaklıklarda zamanla aktivitesinde meydana gelen bu değişim sıfırlandıktan sonra optimum sıcaklığı 37°C olarak tespit edildi.Sıçan ince barsak BKE'ımn pozitif yüklü substratlanndan asetiltiyokolin (ATK), butiriltiyokolin (BTK) ve propiyoniltiyokoline (PTK) karşı negatif kooperativite gösterdiği bulundu. Nonlineer regresyon analizi yöntemiyle ATK için Vm=2.07 ±0.10 umol/dak/mg protein, Ks= 0.80 ± 0.12 mM; BTK için Vm=4.75 ± 0.12 umol/dak/mg protein, Ks= 0.20 ± 0.05 mM ve PTK için Vm=6.26 ± 0.21 umol/dak/mg protein, Ks= 0.42 ± 0.05 mM olarak hesaplandı. Benzoyilkolinin (BeK) enzimde substrat aktivitasyonuna neden olduğu gözlendi ve BeK için Vm=0.50 ± 0.02 umol/dak/mg protein, Ks= 20.09 ± 2.28 uM olarak saptandı.Triton X-100'ün sıçan ince barsak ve insan serum BKE'si üzerine etkisi karşılaştırıldı. 0.1 mM'dan daha yüksek derişimdeki Triton X-100'ün sıçan ince barsak BKE'sinin aktivitesinde % 30'luk, insan serum BKE'sinde ise % 15'lik aktivite kaybma neden olduğu gözlendi.
Özet (Çeviri)
VI ABSTRACT Yıldız Ö., Purification and characterization of butyrylcholinesterase from rat intestine. Hacettepe University Institute of Health Science Master of Science Thesis in Biochemistry, Ankara, 2003. Butyrylcholinesterase (BChE, acylcholine acylhydrolase E.C. 3.1.1.8) was 256 fold purified from rat intestine by Procainamide- Sepharose 4B affinity choromatografy. Purity was controlled by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Optimum pH value was determined as 7.2 after zero buffer extrapolation. The effect of temparature was investigated between 20-60 °C. At 20, 30 ve 37°C, an increase and at 45, 50, 55 and 60°C a decrease of activitiy by time was observed. At 40°C the activity did not change up to 15 minutes. After zero time extrapolation of these different effects of time on BChE activities, optimum temparature was determined as 37 °C. Rat intestine BChE showed negative cooperativity towards positively charged substrates: acetylthiocholine (ATCh), butyrylthiocholine (BTCh) and propyonylthiocholine (PTCh). Vm and K* values were estimated as 2.07 ±0.10 |jmole/dak/mg protein and 0.80 ± 0.12 mM for ATCh, 4.75 ±0.12 umole/dak/mg protein and 0.20 ± 0.05 mM for BTCh, and 6.26 ± 0.21 (j,mole/dak/mg protein and 0.42 ± 0.05 mM for PTCh, respectively by the nonlinear regression analysis. Benzoylcholine caused a substrate activation on rat intestine BChE. Vm and K* value were determined as 0.50 ± 0.02 umole/dak/mg protein and 20.09 ± 2.28 uM, respectively. Rat intestine BChE activity was decreased to % 30 and human serum BChE was decreased to % 15 of original by the iddition of Triton X-100 at concentrations higher than 0.1 mM.
Benzer Tezler
- Sıçan ince barsak iskemi reperfüzyon modelinde agmatinin etkileri
The effects of agmatine on intestinal ischemia reperfusion model in rats
İNCİ TURAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2013
FizyolojiBülent Ecevit ÜniversitesiFizyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HALE SAYAN ÖZAÇMAK
- Sıçan ince barsak iskemi/reperfüzyon hasarında ileum ve akciğer dokusunda görülen damar dışına protein kaçışının, kanabinoid 2 reseptör agonisti (am-1241) ile kontrolü
The control of microvascular protein leakage in ileum and lung tissues of rat subjected to intestinal ischemia/reperfusion injury by cannobinoid 2 receptor agonist (am 1241)
MUSTAFA HANCI
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
Tıbbi BiyolojiDüzce ÜniversitesiFarmakoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEYFULLAH OKTAY ARSLAN
- Cisplatinin sıçan ince barsak epitel tabakasına etkisinin ışık ve elektron mikroskobu düzeyinde incelenmesi
Başlık çevirisi yok
LEYLA KUNTSAL
- Kumarin ve kumarin+E vitamininin wistar albino sıçan ince barsağı üzerine etkilerinin ışık mikroskobik olarak incelenmesi
Başlık çevirisi yok
M.HANDAN BİLGİÇ
Yüksek Lisans
Türkçe
1995
BiyolojiCumhuriyet ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ÜLKÜ OZANSOY
- Sıçan ince barsağından glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enziminin saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin incelenmesi
Purification and characterization of glucose-6 phosphate dehydrogenase from rat small intestine
ALİ DANIŞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2004
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF.DR. İZZET HAMDİ ÖĞÜŞ