Sıçan ince barsağından 6-fosfoglukonat dehidrogenaz enziminin saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin incelenmesi
Purification and characterization of 6-phosphogluconate dehydrogenase from the rat small intestine
- Tez No: 156902
- Danışmanlar: PROF.DR. İZZET HAMDİ ÖĞÜŞ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: 6-fosfoglukonat dehidrogenaz, saflaştırma, sıçan ince barsağı, substrat, koenzim ve inhibitor kinetiği, 6-phosphogluconate dehydrogenase, purification, rat small intestine, substrat, coenzyme and inhibitor kinetics
- Yıl: 2004
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
ÖZET Ceyhan, D., Sıçan ince barsak 6-fosfoglukonat dehidrogenaz'ının saflaştırılması ve kinetik özelliklerinin incelenmesi, Hacettepe Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Biyokimya Programı Yüksek Lisans Tezi, Ankara, 2004. 6-fosfoglukonat dehidrogenaz (6-PGD; E.C 1.1.1.44, 6-fosfo-D-glukonat-NADP+ oksidoredüktaz) sıçan ince barsağından, Sephadex G-25 jel filtrasyonu, DEAE- Sepharose Fast Flow iyon değiştirici ve 2', 5'-ADP Sepharose 4B affinite kolonu kullanılarak % 35.8 verim ve 15.12 U/mg-protein'lik spesifik aktivite ile saflaştınldı. Poliakrilamid jel elekroforezi (PAGE) ile saflık konrolü yapıldı. SDS-PAGE'den enzimin altbirim molekül kütlesi 44000 dalton olarak saptandı. Saflaştınlan enzimin optimum pH'sı potasyum fosfat tamponu derişiminin etkisi ekstrapolasyonla sıfırlandıktan sonra 7.3 olarak saptandı. 20-58 °C arası sıcaklığın sıçan ince barsak 6- PGD aktivitesine etkisi incelendi. 20-50 °C'de enzim aktivitesinin zamana bağlı olarak arttığı; 50 °C'de zamanla değişmediği; 55 °C'den sonra ise zamanla aktivite kaybettiği gözlendi. Enzimin optimum sıcaklığı 50 °C olarak saptandı. Arrhenius eşitliğinden, enzimin aktivasyon entalpisi 6900 kal/mol, aktivasyon enerjisi (Ea), 7522 kal/mol, sıcaklık artma faktörü Qıo ise 1.49 olarak saptandı. Enzimin kinetik analizinden, 6-PG ve NADP+ için Km değerleri sırasıyla 595 ±213 uM ve 53 ± 1.99 uM bulundu. Hill grafiklemesinden yararlamlarak enzimin 6-PG ve NADP+ için Hill değişmezi (nH) 1.13 ve 0.89 bulundu ve enzimin, koenzimi ve substratı ile kooperative göstermediği saptandı. Enzimin, koenzim analoglarmdan NAD+'yi kullanamadığı belirlendi. Enzimin, NADPH ile NADP+ ye karşı kompetetif tipte inhibe olduğu ve Ki'nin 31.9 ± 1.3 uM olduğu saptandı.
Özet (Çeviri)
VI ABSTRACT Ceyhan, D., Purification and characterization of 6-phosphogluconate dehydrogenase from the rat small intestine. Hacettepe University Institute of Health Sciences, Master of Science Thesis in Biochemistry, Ankara 2004. 6-phosphogluconate dehydrogenase (6-PGD; E.C. 1.1.1.44, 6-phosphogluconate- NADP+ oxidoreductase) was purified from small intestine of the rat using Sephadex G-25 gel filtration, DEAE- Sepharose Fast Flow and 2' 5'-ADP Sepharose 4B column chromatography with 35.8 % yield and had a spesific activity of 15.12 units per milligram proteine. Purity was controlled by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). The molecular mass of subunit of 6-PGD was found to be 44000 daltons from SDS-PAGE. The pH of the enzyme was 7.3. The effect of temperature on 6- PGD stability was investigated (between 20-58 °C). The activity of enzyme up to 50 °C increased by time. At 50 °C no change in activity was detected but after 55 °C a sharp decrease in 6-PGD activity was observed. The optimum temperature for rat small intestine 6-PGD was 50 °C. From Arrhenius plot, E% AH, and Qio were found to be 7522 cal/mole, 6900 cal/mole and 1.49, respectively. The kinetic parameters, Km values for 6-PG and NADP+ were 595 ±213 uM and 53 + 1.99 uM, respectively. The Hill constants for 6-PG and NADP+ were 1.13 and 0.89 These findings indicate that enzyme did not show any cooperativity with its substrate and coenzyme NAD+ was not used as a coenzyme for rat small intestine 6-PGD. Inhibition of rat small intestine 6-PGD by NADPH was competitive-type with respect to NADP+ The K{ values for NADPH were 31.9 ± 1.3 uM.
Benzer Tezler
- Sıçan ince barsağından glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enziminin saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin incelenmesi
Purification and characterization of glucose-6 phosphate dehydrogenase from rat small intestine
ALİ DANIŞAN
- Sıçan ince barsak butirilkolinesterazının saflaştırılması ve bazı özelliklerinin incelenmesi
Purification and characterization of butyrylcholinesterase from rat intestine
ÖZLEM YILDIZ
- Sıçan ince bağırsak glutatyon S-transferaz enziminin saflaştırılması ve izozimlerinin hiperisin bileşiği ile bağlanma özelliklerinin incelenmesi.
Purification of glutathione S-transferase from rat small intestine and examining the binding properties of defined isozymes with the hypericin.
GAMZE TUNA
