Sıçan ince barsağından 6-fosfoglukonat dehidrogenaz enziminin saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin incelenmesi
Purification and characterization of 6-phosphogluconate dehydrogenase from the rat small intestine
- Tez No: 156902
- Danışmanlar: PROF.DR. İZZET HAMDİ ÖĞÜŞ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: 6-fosfoglukonat dehidrogenaz, saflaştırma, sıçan ince barsağı, substrat, koenzim ve inhibitor kinetiği, 6-phosphogluconate dehydrogenase, purification, rat small intestine, substrat, coenzyme and inhibitor kinetics
- Yıl: 2004
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 50
Özet
ÖZET Ceyhan, D., Sıçan ince barsak 6-fosfoglukonat dehidrogenaz'ının saflaştırılması ve kinetik özelliklerinin incelenmesi, Hacettepe Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Biyokimya Programı Yüksek Lisans Tezi, Ankara, 2004. 6-fosfoglukonat dehidrogenaz (6-PGD; E.C 1.1.1.44, 6-fosfo-D-glukonat-NADP+ oksidoredüktaz) sıçan ince barsağından, Sephadex G-25 jel filtrasyonu, DEAE- Sepharose Fast Flow iyon değiştirici ve 2', 5'-ADP Sepharose 4B affinite kolonu kullanılarak % 35.8 verim ve 15.12 U/mg-protein'lik spesifik aktivite ile saflaştınldı. Poliakrilamid jel elekroforezi (PAGE) ile saflık konrolü yapıldı. SDS-PAGE'den enzimin altbirim molekül kütlesi 44000 dalton olarak saptandı. Saflaştınlan enzimin optimum pH'sı potasyum fosfat tamponu derişiminin etkisi ekstrapolasyonla sıfırlandıktan sonra 7.3 olarak saptandı. 20-58 °C arası sıcaklığın sıçan ince barsak 6- PGD aktivitesine etkisi incelendi. 20-50 °C'de enzim aktivitesinin zamana bağlı olarak arttığı; 50 °C'de zamanla değişmediği; 55 °C'den sonra ise zamanla aktivite kaybettiği gözlendi. Enzimin optimum sıcaklığı 50 °C olarak saptandı. Arrhenius eşitliğinden, enzimin aktivasyon entalpisi 6900 kal/mol, aktivasyon enerjisi (Ea), 7522 kal/mol, sıcaklık artma faktörü Qıo ise 1.49 olarak saptandı. Enzimin kinetik analizinden, 6-PG ve NADP+ için Km değerleri sırasıyla 595 ±213 uM ve 53 ± 1.99 uM bulundu. Hill grafiklemesinden yararlamlarak enzimin 6-PG ve NADP+ için Hill değişmezi (nH) 1.13 ve 0.89 bulundu ve enzimin, koenzimi ve substratı ile kooperative göstermediği saptandı. Enzimin, koenzim analoglarmdan NAD+'yi kullanamadığı belirlendi. Enzimin, NADPH ile NADP+ ye karşı kompetetif tipte inhibe olduğu ve Ki'nin 31.9 ± 1.3 uM olduğu saptandı.
Özet (Çeviri)
VI ABSTRACT Ceyhan, D., Purification and characterization of 6-phosphogluconate dehydrogenase from the rat small intestine. Hacettepe University Institute of Health Sciences, Master of Science Thesis in Biochemistry, Ankara 2004. 6-phosphogluconate dehydrogenase (6-PGD; E.C. 1.1.1.44, 6-phosphogluconate- NADP+ oxidoreductase) was purified from small intestine of the rat using Sephadex G-25 gel filtration, DEAE- Sepharose Fast Flow and 2' 5'-ADP Sepharose 4B column chromatography with 35.8 % yield and had a spesific activity of 15.12 units per milligram proteine. Purity was controlled by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). The molecular mass of subunit of 6-PGD was found to be 44000 daltons from SDS-PAGE. The pH of the enzyme was 7.3. The effect of temperature on 6- PGD stability was investigated (between 20-58 °C). The activity of enzyme up to 50 °C increased by time. At 50 °C no change in activity was detected but after 55 °C a sharp decrease in 6-PGD activity was observed. The optimum temperature for rat small intestine 6-PGD was 50 °C. From Arrhenius plot, E% AH, and Qio were found to be 7522 cal/mole, 6900 cal/mole and 1.49, respectively. The kinetic parameters, Km values for 6-PG and NADP+ were 595 ±213 uM and 53 + 1.99 uM, respectively. The Hill constants for 6-PG and NADP+ were 1.13 and 0.89 These findings indicate that enzyme did not show any cooperativity with its substrate and coenzyme NAD+ was not used as a coenzyme for rat small intestine 6-PGD. Inhibition of rat small intestine 6-PGD by NADPH was competitive-type with respect to NADP+ The K{ values for NADPH were 31.9 ± 1.3 uM.
Benzer Tezler
- Sıçan ince barsağından glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enziminin saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin incelenmesi
Purification and characterization of glucose-6 phosphate dehydrogenase from rat small intestine
ALİ DANIŞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2004
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF.DR. İZZET HAMDİ ÖĞÜŞ
- Sıçan ince barsak butirilkolinesterazının saflaştırılması ve bazı özelliklerinin incelenmesi
Purification and characterization of butyrylcholinesterase from rat intestine
ÖZLEM YILDIZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2003
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NEŞE ÇOKUĞRAŞ
- Sıçan ince bağırsak glutatyon S-transferaz enziminin saflaştırılması ve izozimlerinin hiperisin bileşiği ile bağlanma özelliklerinin incelenmesi.
Purification of glutathione S-transferase from rat small intestine and examining the binding properties of defined isozymes with the hypericin.
GAMZE TUNA
Yüksek Lisans
Türkçe
2008
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İZZET HAMDİ ÖĞÜŞ
- Değişik prezervasyon solüsyonlarının hipotermik ortamda ince barsak dokusu üzerindeki etkilerinin morfolojik açıdan değerlendirilmesi
Başlık çevirisi yok
SUSANNE ÖNER
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2000
MorfolojiMarmara ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. FERİHA ERCAN