Geri Dön

Pankreas adacık beta hücrelerinin flow sitometrik ve immünomanyetik izolasyonu

Flow cytmetric and immunomagnetic isolation of pancreatic islet beta cell

  1. Tez No: 157231
  2. Yazar: BERRİN OĞUZHAN
  3. Danışmanlar: PROF.DR. TEMEL YILMAZ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Allerji ve İmmünoloji, Allergy and Immunology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2004
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: İstanbul Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: İmmünoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 96

Özet

6. ÖZET Pankreas adacık p hücrelerinin insülin sentez ve sekresyon fonksiyonlarının, intrensek özelliklerinin incelenmesi ve Diabetes Mellitus'un küratif tedavisini sağlayan p hücre transplantasyonunda karşılaşılan teknik, metabolik ve immünolojik sorunların ortadan kaldırılması için pürifiye P hücrelerinin izolasyonu gerekmektedir. Çalışmada p ve non-p hücrelerinin izolasyonunda FACS ve MACS sistemleri kullanılmıştır. Wistar Albino sıçanların adacık izolasyonu kollagenaz metodu ile yapılmıştır. FACS ile separasyon öncesi hücrelerine ayrılması için adacıklara Earle's-HEPES solüsyonu içinde süspansiyon haline getirilerek Tripsin ve DNAse I ile enzimatik sindirim uygulanmıştır. Percoll ile 2 kez santrifüj sonrası elde edilen canlı hücreler yeniden süspansiyon haline getirilmiştir. Hücreler Fluo-3 AM ile 40 dakika inkübe edilerek yüklenmiş ve 2 kez yıkama yapılarak inkübasyon medyumunun temizlenmesinden sonra hücre ayırımı FACSTAR PLUS flow sitometride yapılmıştır. MACS ile separasyon öncesi Earle's-HEPES solüsyonu içinde süspansiyon haline getirilen adacıklar pipet içine alıp boşaltılarak parçalanmaları kolaylaştırılmıştır. Hücre süspansiyonuna nötral proteinaz (dispase) eklenerek mekanik parçalama işlemine devam edilmiştir. Bütünlüğü bozulmamış adacık kalmadığı anda Percoll ile santrifügasyon ile canlı hücreler ayrılarak PBS içinde süspansiyon haline getirilmiştir. Hücreler R2D6 monoklonal antikor ile 30 dakika inkübe edilmiş, yıkanmış ve PBS ile süspansiyon haline getirilerek MACS rat anti-mouse lg M microbead eklenmiştir. 30 dakika inkübasyon ve santrifüjü takiben hücre süspansiyonu Mini MACS separatörün manyetik alanına yerleştilen MS+ kolondan geçirilerek 64non-p hücreler toplanmış, kolonun manyetik alandan ayrılmasından sonra PBS ile yıkanması ile de p hücreleri elde edilmiştir. Elde edilen p ve non-p hücrelerinin viabiliteleri, insulin, glukagon içerikleri ve eşleştirilmiş insülin/glukagon molar oranları incelenmiştir. İstatistiksel değerlendirmeler Student-t testi ile yapılmıştır. Adacıkların hücrelerine parçalanmasında nötral proteinaz kullanımı ve mekanik parçalama işleminin arttırılmasının elde edilen hücre sayısını Tripsin ve DNAse I ile parçalama işlemine göre istatistiksel olarak anlamlı derecede arttırdığı saptanmıştır ( p

Özet (Çeviri)

7. SUMMARY FLOW CYTOMETRIC AND IMMUNOMAGNETIC ISOLATION OF PURIFIED PANCREATIC BETA CELLS The isolation of the purified p cells is necessary for the investigation of insulin synthesis, secretory functions and intrinsect properties and to overcome the technical, metabolic and immunological problems in p cell transplantation for the curative treatment of Diabetes Mellitus. In this study FACS and MACS systems were used for the isolation of the P and non-P cells. The islet isolation of Wistar albino rats were done with collagenase method. Before the purification by FACS islets cells were suspended in Earle's- HEPES solution and dispersed by enzymatic digestion with Tripsine and DNAse I. After 2 consecutif centrifugations with Percoll viable dispersed islet cells were recovered and resuspended. Dispersed islet cells were loaded by the incubation for 40 minutes with Fluo-3 AM and washed two times for the removal of the incubation medium. Cell sorting was made on a FACSTAR PLUS flow cytometer. Before the purification by MACS islets cells were suspended in Earle's- HEPES solution and cell dispersion was initiated mechanicly with Gibson pipette movements. Than the islet cells were dispered by the addition of neutral proteinase to the cell suspension, followed-up by the mechanical dispersion. When a II of t he islets were dispersed cell suspension was centrifugated with Percoll and resuspended in PBS. Recovered dispersed cells were incubated for 30 minutes in the presence of R2D6 monoclonal antibody, washed and resuspended in PBS mixed with MACS rat anti-mouse Ig M microbeads. After 30 minutes incubation and centrifugation, cell suspension was applied onto a 66MS+ column placed in the magnetic field of a Mini MACS separator. The non~p cells passed through and were collected. After the removal of the column from the magnet, the p cells were flushed out with PBS. The viability of the obtained p and non-p cells, their insulin and glucagon content, and the matched insulin/glucagon molar ratio were investigated. Statistical analysis was carried out with Student-t test. The use of neutral proteinase and increased use of mechanic procedure for the dispersion of the islets cells has been found to significantly increase the number of obtained dispersed cells compared to the procedure using Trypsin and DNAase I (p

Benzer Tezler

  1. Tez No

    342077

    NK-17/NK-1 ile IL-17/IFN-Gama miktar ve oranlarının diyabet süreciyle ilişkisinin araştırılması

    Investigation of relationship of NK-17/NK-1 and IL-17/IFN-Gamma numbers and ratios with diabetes process

    ÇAĞDAŞ UĞUR ADAŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    Endokrinoloji ve Metabolizma Hastalıklarıİstanbul Üniversitesi

    İmmünoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ALİ OSMAN GÜROL

  2. Tez No

    328997

    İn-vitro langerhans adacık hücre canlılığına bazı hücre ve hormon uygulamalarının etkileri

    Some of in-vitro cell viability of islet of langerhans cell and hormone effects

    MELTEM ATEŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    Histoloji ve EmbriyolojiGazi Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. GÜLNUR TAKE KAPLANOĞLU

  3. Tez No

    330044

    Diyabetik farelerde Punica granatumun (Nar)metabolik durum ve pankreas adacık beta hücreleri üzerine etkisi

    The effect of punica granatum (Pomegranate) on metabolic status and pancreatic islet beta cell in diabetic mice

    ZEHRA DİYAR TAMBURACI USLU

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıAkdeniz Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SEMA AKÇURİN

  4. Tez No

    389745

    Mezenkimal kök hücrelerden pankreas adacık beta hücrelerine benzer insülin salgılayan hücrelerin rekombinant DNA teknolojisi ile eldesi

    The production of pancreatic islet beta like insulin producing cells from mesenchymal stem cells by recombinant DNA technology

    AYŞEGÜL BAĞLAR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    BiyolojiKocaeli Üniversitesi

    Kök Hücre Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. GÖKHAN DURUKSU

  5. Tez No

    242068

    Tip 1 diyabet tedavisinde kullanılmak üzere adenovirüs aracılı TRAIL gen tedavi metodlarının geliştirilmesi ve etkinliklerinin diyabetik hayvan modellerinde test edilmesi

    Testing the treatment efficacy of adenovirus mediated TRAIL gene therapy approach in type 1 diabetic animal models

    ERCÜMENT DİRİCE

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    Endokrinoloji ve Metabolizma HastalıklarıAkdeniz Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SALİH ŞANLIOĞLU

Geri Dön