Midye (Mytilus galloprovincialis lam.) manto dokusundan aspartat aminotransferazın saflaştırılması ve bazı özelliklerinin incelenmesi
Purification and some properties of aspartate aminotransferase from the mantle tissue of Mytilus galloprovincialis lam.
- Tez No: 164462
- Danışmanlar: PROF.DR. AYŞE CAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Mytilus galloprovincialis Lam, aspartat aminotransferaz, enzim saflaştırılması, transaminazlar, aspartat aminotransferazın saflaştırılması. 43, Mytilus galloprovincialis Lam, aspartate aminotransferase, enzyme purification, transaminases, purification of aspartate aminotransferase. 44
- Yıl: 2005
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 54
Özet
6. ÖZET Aspartat aminotransferaz (E.C.2.6.1.1.) hemen hemen bütün organizmalarda bulunan ve azot metabolizmasında anahtar role sahip olan piridoksal fosfata bağımlı bir enzimdir. Aspartat aminotransferaz aspartatın amino grubunu uygun bir a-keto aside aktararak glutamat oluşumunu sağlar. Aspartat aminotransferaz birçok bitkisel ve hayvansal kaynaktan saflaştırılmasına rağmen, bugüne kadar Mytilus galloprovincialis Lam. 'ın manto dokusundan saflaştırılmamıştır. Çalışmamızda Mytilus galloprovincialis Lam. midye türünün manto dokusundan aspartat aminotransferaz kısmen saflaştırıldı ve bazı kinetik özellikleri incelendi. İstanbul Boğazı Rumelikavağı kıyılarından toplanan midyelerin manto dokuları ayrıldıktan sonra, % 0.9 NaCI ile, homojenize edildi. Aspartat aminotransferaz aktivitesi gösteren homojenizatın %30-%65 amonyum sülfat kesiti elde edildi ve dializden sonra bu kesit hidroksilapatit kolona uygulandı. pH'sı 7.0 olan ve artan molaritede Na-K-fosfat tamponu ile yapılan basamaklı elüsyon sonucunda, aspartat aminotransferaz 100 mM Na-K-fosfat tamponu ile elüe edildi. Midye manto dokusu %30-%65 amonyum sülfat kesitinin hidroksilapatit kolon kromatografisine uygulanması ile elde edilen 100 mM Na- K-fosfat elüatının saflığını saptamak amacıyla yapılan poliakrilamid jel elektroforezinde gerek %30-%65 amonyum sülfat kesitinde gerekse 1 0OmM Na- K-fosfat elüatında tek bir aktivite bandı görülmesine karşın 100 mM Na-K-fosfat elüatında ikisi daha kalın olmak üzere üç protein bandı görüldü. Aspartat aminotransferaz aktivitesi üzerine sıcaklığın etkisi incelendiğinde aktivitenin 15°C ve 30°C'lerde en yüksek değerine ulaştığı ve 55°C'de tamamen kaybolduğu saptandı. Enzimin değişik pH'larda aktivitesinin incelenmesi sonucunda, en yüksek aktiviteyi, pH 7.2'de, tris-HCI tamponunda gösterdiği saptandı. Aspartat aminotransferazın aspartata ve 2-oksoglutarata karşı Km değerlerinin, sırasıyla 1.64 mM ve 2.2x1 0"2 mM, aynı substratlara karşı, Vmax değerlerinin ise 0.12 U/ml ve 0.168 U/ml olduğu saptandı.
Özet (Çeviri)
7. SUMMARY Purification and Some Properties of Aspartate Aminotransferase from the Mantle Tissue of Mytilus galloprovincialis Lam. Aspartate aminotransferase (E.C.2.6.1.1.), is a pyridoxal phosphate (PLP)-dependent enzyme that occurs in virtually all organisms and plays a key role in intermediary nitrogen metabolism. It catalyzes the interconversion of L-aspartate and L-glutamate with the corresponding a-keto acids. Although aspartate aminotransferase was purified from a variety of plant and animal sources, it has not been purified to date from mantle tissue of Mytilus galloprovincialis Lam. In the present study we have partially purified aspartate aminotransferase from the mantle tissue of Mytilus galloprovincialis Lam. and investigated some kinetic properties of the enzyme. Molluscs were collected from Rumelikavağı coasts of the Bosphorus and mantle tissues were homogenized with 0.9 % NaCI solution after dissection from the body. The fraction obtained after 30 %-65 % ammonium sulphate precipitation was dialyzed and applied to a hydroxy lapatite column. The elution performed by increasing molarities of Na-K-phosphate buffer, pH 7.0, resulted in the recovery of the aspartate aminotransferase activity in 1 00 mM phosphate buffer pool. The partially purified enzyme showed three protein and a single activity band in polyacrylamide gel electrophoresis. Effect of temperature on enzyme activity was examined and it was found that the enzyme exhibited maximum activity at 15°C and 35°C and that the activity was totally lost at 55°C. Aspartate aminotransferase activity was maximum at pH 7.2 in tris-HCI buffer. Km values for aspartate and 2-oxoglutarate were 1.64 mM and 2.2x1 0"2 mM and Vmax for the same substrates 0.12 U/ml and 0.168 U/ml, respectively.
Benzer Tezler
- Midye (Mytilus galloprovincialis Lam.) hepatopankreasından tiyoredoksin redüktaz enziminin saflaştırılması ve kinetik özelliklerinin incelenmesi
Purification of thioredoxin reductase from the hepatopancreas of the mollusc (Mytilus galloprovincialis Lam.) and investigation of its kinetic properites
ESRA ACAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
Biyokimyaİstanbul ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. NURTEN ÖZSOY
- Midye (Mytilus Galloprovincialis Lam.) hepatopankreas beta-D-galaktozidaz izoenzimlerinin kısmen saflaştırılması
Partial purification of mytilus galloprovincialis lam. hepatopancreas beta-D-galaktosidase
FATMA CEREN DİKMEN
- Midye (Mytilus galloprovincialis LAM.) hemolenfinden asetilkolinesteraz enziminin saflaştırılması ve kinetik özelliklerinin incelenmesi
Purification of acethylcholinesterase from the haemolymph of the mollusc (Mytilus galloprovincialis Lam.) and investigation of its kinetic properites
SERVET DURANAY
- Sinop yöresinde avlanan kalkan (Scophthalmus maeoticus Pallas,1811) balıklarının, bazı biyolojik özelliklerinin belirlenmesi üzerine bir araştırma
The research on the determinates of the some biological characteristics of the turbot (Scophthalmus meaoticus Palla, 1811) caught in the Sinop region
NECATİ SAMSUN
Doktora
Türkçe
2004
Su ÜrünleriOndokuz Mayıs ÜniversitesiSu Ürünleri Avlama ve İşleme Teknolojisi Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. OSMAN SAMSUN