Kalıtsal metabolizma hastalıklarının tanısında ince tabaka kromarografisinin yeri
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 165159
- Danışmanlar: PROF.DR. İSMAİL KURT
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2005
- Dil: Türkçe
- Üniversite: GATA
- Enstitü: Tıp Fakültesi
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya ve Klinik Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 89
Özet
VI- ÖZET Aminoasidopatiler, laboratuvar tanısında önce birinci basamak testleri olan, idrar spot testler, idrar/kan kağıt veya ince tabaka kromatografisi, son yıllarda ise tandem-mass spektrometri ile analiz edilmektedir. Anormal veya şüpheli sonuçlar ise kantitatif aminoasit analizleri ile onaylanmaktadır. Kan aminoasit TLC çalışmasında, filtre kağıdına emdirilerek kurutulmuş kan içeren 6 mm çapındaki diskin direkt pleyte uygulanması ile yapılan ve 2. yürütme solventinde ninhidrin içeren teknik, yenidoğan aminoasidopatilerinin (başta fenilketonüri) taranmasında rutine uygulanabilir bulundu. Bu teknik fenilalanin, tirozin, glutamin, homosistin, sistin aminoasitlerinin bireysel ayrımına olanak sağlarken lösin/izolösin, valin/metionin/triptofan, alanin/glutamik asit/treonin, serin/glisin/sitrülin, histidin/lizin/omitin/arjinin kombine spotlar halinde görüldü. Benzer şekilde tek yönlü idrar aminoasit TLC'si için 2.soIventte ninhidrin boyası içeren butanohasetik asit: su (12:3:5) solventinde iki kez ardışık yürütmenin yapıldığı teknik rutin için uygun bulundu. Tek yönlü kan veya idrar TLC'sinde ayrılmayan ve ninhidrin boyası ile boyanmayan (prolin ve hidroksiprolin) aminoasitlerdeki bireysel artışları saptayabilmek için; Tek yönlü idrar TLC'sinde ayrılmayan aminoasitler serin/glisin, histidin/lizin iki yönlü idrar aminoasit TLC'siyle ayrıldı. Farklı boyama teknikleriyle farklı renkler oluşturuldu: Ninhidrin + Erlich reaktifi ile triptofan mavi-mor, sitrüllin sarı-turuncu, Pauli reaktifi ile histidin pembe-kırmızı spotlar halinde gözlendi. 2. solvent içine İsatin + çinko asetat katılarak yapılan boyama tekniği ile prolin, mavi- yeşil; ardından Erlich reaktifi spreylenmesiyle hidroksiprolin, mavi-kahverengi spotlar halinde gözlendi. Her metod için karakteristik aminoasit yürüme (Rf) değerleri ve sağlıklı bireylerde idrar ve kan örnekleri için normal paternler tespit edildi. Kan ve idrar TLC metodları için doğrusal aralık 150-2500 umol/L, günlerarası varyasyon katsayısına %10-25 ve analitik duyarlılık (gözle farkedilebilir spot) 150 umol/L olarak saptandı. Daha önce tanı almış 5 hastanın (fenilketonüri, akçaağaçşurup hastalığı, jeneralize aminoasidüri, sistinüri, arjininosüksinik asidüri) idrar veya kan amimoasit TLC kromatogramlarında bu hastalıklara uyan aminoasitlerin aşırı artışına işaret eden karakteristik paternler gözlendi. Sonuç olarak, idrar veya filtre kağıdına emdirilmiş kan örneklerinin kullanıldığı, küçük ebadlardaki pleytlerle çalışılan TLC metodlarının, hızlı ve nisbeten ucuz olması nedeniyle, tandem-mass spektrometriye sahip olmayan laboratuvarlarda aminoasidopatilerin taranmasında uygun yöntemler olduğu değerlendirilmektedir. 81
Özet (Çeviri)
VII- SUMMARY Urine spot tests, urine/blood paper or thin layer chromatography and tandem mass spectrometry are used in the diagnosis of aminoacidopathies. Abnormal and doubtful results were verified by quantitative amino acid analysis In blood TLC study, blood was impregnated in a filter paper and dried. 6 mm of this blooded filter paper was applied to plate directly. Second run solvent contained ninhydrin. This technique was found suitable for routine applications in screening of inborn aminoacidopathies. With this technique phenylalanine, tyrosine, glutamine, homocystine, cystine could be separated as individual spots but leucine/isoleucine, valine/methionine/tryptophan, serine/glycine/citrulline, histidine/lysine/arginine were visualised as combined spots. Similarly, for one dimensional urine amino acid TLC, the use of two tandem run technique in which ninhydrin was included in the second run solvent (12:3:5 - butanol/ acetic acid/ water) has been approved for routine application. In this study for detection of increased amino acids which were not seperated or not stained by using one dimensional urine/blood amino acid TLC; a) Amino acids which were not separated by urine TLC (serine/glycine, histidine/lysine ) were separeted by two dimensional urine amino acid TLC. b) Different colours were created by using different techniques: Nynhidrine+Erlich reagent stained tryptophan blue purple and citrulline yellow-orange. Histidine stained pink-red by Pauli reagent. C) Proline was stained blue-green by the addition of isatin+zinc acetate too second run solvent. Hydroxyproline was visualised as blue-brown spots by spraying Erlich reagent. Characteristic amino acids run (Rf) values for blood/urine TLC methods and normal paterns for urine/blood samples of healthy subjects were established IMAGE J program was used for the semicantitive analyse of amino acids spot dansities. Blood and urine TLC method were lineer in range of 150-2500 umol/L, had % 10-25 variation coefficient and analytical sensitivity of 150 umol/L for spots. Urine or blood samples of formerly diagnosed 5 patients were analysed urine/blood TLC and characteristic patterns which are in accordance with the pthologies were observed. Consequently, TLC methods which use urine or blood impregnated filter papers were found fast, relatively cheap. These methods are suitable for laboratories that have not tandem mass spectrometry. 82
Benzer Tezler
- Metabolik miyopatilerin biyokimyasal incelenmesi
Biochemical investigation of metabolic myopathies
İNCİ BAYRAKTAR
- Amino asit metabolizması hastalıklarının tanısında kullanılan bazı plazma amino asitleri ve metabolitlerinin referans aralıklarının yaş grupları ve cinsiyete göre belirlenmesi
Determination of reference intervals of some plasma amino acids and their metabolites according to age groups and gender which are used in the diagnosis of amino acid metabolism disorders
TAYFUN YİĞİT
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2023
BiyokimyaMarmara ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GONCAGÜL HAKLAR
- Metabolik hastalıkların teşhisinde kapiler elektroforez
Diagnosis of metabolic diseases by capillary electrophoresis
MEHMET ŞERİF CANSEVER
Doktora
Türkçe
2010
Kimyaİstanbul Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. F. BEDİA ERİM BERKER
- Nadir metabolik hastalıklarda tüm ekzom dizileme verilerinin biyoinformatik analizleri ile fenotipten sorumlu varyantların değerlendirilmesi
Bioinformatics analysis and variant interpretation of whole exome sequencnig data in inborn errors of metabolism
CAN KOŞUKCU
Doktora
Türkçe
2024
Endokrinoloji ve Metabolizma HastalıklarıHacettepe ÜniversitesiPediatrik Temel Bilimler Ana Bilim Dalı
PROF. DR. RIZA KÖKSAL ÖZGÜL
- Kalıtsal metabolik hastalıklarda açilkarnitin ve amino asidler için eşik değer belirlenmesi
Determination of cut off values for amino acids and acylcarnitines in inherited metabolic diseases
ESRA DOĞAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2014
BiyokimyaDokuz Eylül ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. CANAN ÇOKER