Ocimum basilicum L.'den elde edilen polifenol oksidaz enziminin saflaştırılması, kinetik ve elektroforetik özelliklerinin incelenmesi
Purification and investigation of kinetic and electrophoretic properties of polyphenol oxidase enzyme obtained from Ocimum basilicum L.
- Tez No: 169050
- Danışmanlar: DOÇ.DR. MEHMET DOĞAN, Y.DOÇ.DR. SERAP DOĞAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Polyphenol oxidase, Ocimum basilicum L, purification, substrate specificity, temperature, heat inactivation, inhibition. IV
- Yıl: 2005
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Balıkesir Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 123
Özet
oz OCIMUM BASILICUM L.'DEN ELDE EDİLEN POLİFENOL OKSİDAZ ENZİMİNİN SAFLAŞTIRILMASI, KİNETİK VE ELEKTROFORETİK ÖZELLİKLERİNİN İNCELENMESİ Pınar TURAN Balıkesir Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Kimya Anabilim Dalı (Yüksek Lisans Tezi/ Tez Danışmanları: Doç.Dr. Mehmet DOĞAN- Yrd.Doc.Dr. Serap DOĞAN) Balıkesir, 2005 Bu çalışmada Ocimum basilicum L.'den ekstrakte edilen polifenol oksidazm (PFO) kısmi karakterizasyonu tanımlanmaktadır. Polifenol oksidaz, Ocimum basilicum L.'den ekstrakte edilerek amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz ve Sepharose 4B-L-tirozin-p-aminobenzoik asit afinite kolonuyla saflaştırılmıştır. Amonyum sülfat çöktürmesi ve diyaliz işlemlerinden sonra elde edilen örnekler polifenol oksidazın karakterizasyonu için kullanılmıştır. Afinite kromotografisi ile 11,5 katlık saflaştınlma sağlanmıştır. Elde edilen saf enzim, sodyumdodesilsülfat- poliakrilamidjel (SDS-PAGE) elektroforezinde tek bir bant olarak gözlenmiştir. Polifenol oksidazın molekül ağırlığı yaklaşık 54 kDa olarak belirlenmiştir. Ayrıca Ocimum basilicum L.'nin protein içeriği ve toplam fenolik madde içeriği tayin edilmiştir. Ocimum basilicum L.'nin toplam fenolik madde içeriği Folin-Ciocalteu metodu kullanılarak belirlenmiş ve 100 g taze bitki için 280 mg fenolik madde içeriği bulunmuştur. Protein içeriği Bradford metoduna göre tayin edilmiştir. Polifenol oksidaz 4-metilkatekol, katekol ve pirogallol substratlarına karşı aktivite gösterirken, tirozin substratına karşı aktivite göstermemiştir. Enzimin katalizleme gücünü gösteren Vmax/Km değerlerine göre en iyi substratın 4-metilkatekol olduğu ve bunu sırasıyla pirogallol ve katekolün izlediği bulunmuştur. 4-metilkatekol, katekol ve pirogallol substratları için sırasıyla optimum pH değerleri 6,0; 8,0 ve 9,0 olarakbulunmuştur. Optimum sıcaklık değerleri 4-metilkatekol için 20, katekol için 40 ve pirogallol substratı için ise 50 °C olarak tespit edilmiştir. Optimum sıcaklık ve pH değerlerinin çalışılan substratlara bağlı olarak değiştiği gözlenmiştir. 4-metilkatekol, katekol ve pirogallol substratları için enzim aktivitesinin, artan sıcaklık ve inaktivasyon süresi ile, ısı denaturasyonundan dolayı azaldığı bulunmuştur. ANAHTAR KELİMELER: Ocimum basilicum L.; polifenol oksidaz; saflaştırma; substrat spesifikliği; pH; sıcaklık; ısı inaktivasyonu; inhibisyon. ıı
Özet (Çeviri)
ABSTRACT PURIFICATION AND INVESTIGATION OF KINETIC AND ELECTROPHORETIC PROPERTIES OF POLYPHENOL OXIDASE ENZYME OBTAINED FROM OCIMUM BASILICUM U Pınar TURAN Balıkesir University, Institute of Science, Department of Chemistry (MSc Thesis / Supervisors: Associate Prof.Dr. Mehmet DO?AN- Assistant Prof.Dr. Serap DO?AN) Balıkesir, 2005 In this study, a partial characterization of polyphenol oxidase (PPO) extracted from Ocimum basilicum L. has been described. Polyphenol oxidase from Ocimum basilicum L. was extracted and then purified through (NH4)2S04 precipitation, dialysis and a Sepharose 4B-L-tyrosine- p-aminobenzoic acid affinity column. The samples obtained from (NH4)2S04 precipitation and dialyses were used for the characterization of PPO. At the end of purification by affinity chromatography, 1 1.5- fold purification was achieved. The purified enzyme exhibited a clear single band on sodiumdodecylsulfate-polyacrylamidegel electrophoresis (SDS-PAGE). The molecular mass of the enzyme was estimated to be about 54 kDa. The contents of total phenolic and protein of Ocimum basilicum L. extracts were determined. The total phenolic content of Ocimum basilicum L. was determined spectrophotometrically according to the Folin-Ciocalteu procedure and was found to be 280 mg/100 g on a fresh weight basis. Protein content was determined according to Bradford method. The enzyme showed activity to 4-methylcatechol, catechol and- pyrogallol substrates, but not to tyrosine. 4-methylcatecol was the best substrate due to the highest Vmax/Kra value, followed by pyrogallol and catechol. The optimum pH was at 6.0; 8.0 and 9.0 for 4-methylcatechol, catechol and pyrogallol substrates, respectively. The enzyme had an optimum temperature of 20, 40 and 50 °C for 4- 111methylcatechol, catechol and pyrogallol substrates, respectively. It was found that optimum temperature and pH were dependent on the substrates studied. The enzyme activity decreased due to heat denaturation of the enzyme with increasing temperature and inactivation time for 4-methylcatechol, catechol and pyrogallol substrates.
Benzer Tezler
- Bazı tıbbi bitkilerin antimikrobiyal aktivitelerinin incelenmesi
Investigation of antimicrobial activity of some medicinal plants
BAHTİYAR SARIBOĞA
- Tıbbi ve aromatik bitkilerden elde edilen esansiyel yağların bazı balık patojenleri üzerine antimikrobiyal etkisi
Antimicrobial effects of essential oils of medicinal and aromatic plants on some fish pathogens
SOMIA M. IBRAIK BUFRAG
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
BiyomühendislikKastamonu ÜniversitesiGenetik ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. NEJDET GÜLTEPE
- Reyhan (Ocimum basilicum L.) bitkisinde farklı sulama seviyelerinin ve humik asit uygulamalarının verim ve bazı kalite unsurlarına etkileri
The effect of different irrigation water levels and humic acid applications on yield and some quality characteristics of sweet basil (Ocimum basilicum L.)
MELİKE SAYARER
Doktora
Türkçe
2020
ZiraatEskişehir Osmangazi ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ZEHRA AYTAÇ
- Ocimum basilicum derived extracellular vesicles: Novel promising approach for type 1 diabetes mellitus
Ocimum basilicum'dan elde edilmiş ekstrasellüler veziküller: Tip 1 diabetes mellitus için umut verici yeni bir yaklaşım
MELİS RAHİME YILDIRIM
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
BiyoteknolojiYeditepe ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FİKRETTİN ŞAHİN
- Bazı uçucu yağların dermatofit ve kandida türlerine karşı antifungal aktivitesi
Başlık çevirisi yok
TÜLİN KARVAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2003
MikrobiyolojiEge ÜniversitesiMikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. RAMAZAN İNCİ