Pseudomonas spp.'de lipaz enzimi üzerine çalışmalar
Studies on lipase enzymes from Pseudomonas spp.
- Tez No: 179524
- Danışmanlar: DOÇ. DR. AYSEL UĞUR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Mikrobiyoloji, Biology, Biotechnology, Microbiology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2008
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Muğla Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 147
Özet
Bu çalışmada; Pseudomonas CFC Agar kullanılarak bozulmakta olan çiğ ve pastörize süt örneklerinden 85 izolat elde edilmiştir. Bütün izolatların lipolitik aktiviteleri Tribütirin Agar ve Rhodamin B Agar'da kalitatif olarak belirlenmiştir.İzolatlara Gram boyama yapılmış ve Gram negatif izolatlar seçilmiştir. Ayrıca izolatlara katalaz ve oksidaz testleri, Mac Conkey Agarda gelişme durumları ve O/F testleri yapılmıştır. Gram negatif, katalaz ve oksidaz pozitif, laktoz negatif ve oksidatif metabolizma gösteren izolatlar API 20NE identifikasyon testi aracılığı ile tür seviyesinde identifiye edilmiştir. Toplam 37 izolat karakterize edilmiş ve 36 tanesi (97.30%) P. fluorescens, 1 (2.70%) P. putida olarak identifiye edilmiştir. Lipaz aktivitesi substrat olarak p-nitrofenil palmitatın kullanılmasıyla spektrofotometre ile kantitatif olarak ölçülmüştür. Suşların tamamı lipaz aktivitesi göstermiştir. Bu suşların lipaz aktivitesinin 10.03 U/ml ve 22.16 U/ml aralığında olduğu bulunmuş ve en yüksek lipaz aktivitesinin P. fluorescens RB02?3 suşuna ait olduğu belirlenmiştir. P. fluorescens RB02?3'ün zamana bağlı enzim üretimi bazal mediumda gözlenmiş ve maksimum aktiviteyi 40 saat sonra geç logaritmik fazda üretmiştir ve durağan faza ulaşınca azalmıştır. P. fluorescens RB02?3 suşunun ekstraselüler lipazı amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz ve Sephadex G?100'ün kullanıldığı jel filtrasyon kolon kromatografisi kombinasyonu kullanılarak homojen olarak saflaştırılmıştır. P. fluorescens RB02?3 suşundan ekstraselüler lipaz % 20.3 verim ile 2.97 kat saflaştırılmıştır. Saf enzimin moleküler ağırlığı SDS-PAGE ile yaklaşık 57 kDa olarak belirlenmiştir.Ardından, bu enzim karakterize edilmiş ve maksimum aktiviteyi pH 7.0 ve 50 ºC `de göstermiştir. Hekzan, etil asetat ve butanol gibi çeşitli organik solventlerin varlığında yüksek stabilite sergilemiş, izopropanol ve etanol lipaz aktivitesini arttırmıştır. Bu lipaz MnCl2, FeCl3, ZnCl2, CoCl2, CuCl2, NiCl2 ve EDTA varlığında biraz inhibe olmuştur fakat SDS ve Tween 80 aktiviteyi etkilememiştir.
Özet (Çeviri)
In this study; 85 isolates from spoilage raw milk and pasteurized milk samples were obtained by using Pseudomonas CFC Agar. The lipolytic activities of all the isolates were qualitatively determined in Tributyrin Agar and Rhodamine B Agar.These isolates were tested for Gram stain and selected Gram negative isolates. Additionally, catalase and oxidase tests, growth on Mac Conkey Agar and O/F tests were employed. Isolates determined as Gram-negative, catalase and oxidase positive, lactose negative and oxidative metabolism were identified at species level by means of API 20NE identification test. A total 37 isolates characterized and 36 (97.30%) of the isolates were identified as P. fluorescens, 1 (2.70%) was identified as P. putida. Lipase activity was quantitatively measured through a spectrophotometer using p-nitrophenyl palmitate as substrate. All strains displayed lipase activity. This strains of lipase activity between 10.03 U/ml and 22.16 U/ml was found and P. fluorescens RB02?3 was determined to give the highest lipase activity. Time course of enzyme production by P. fluorescens RB02?3 was obserwed in basal medium and maximum activity was produced in the late logarithmic phase after 40h and levels increased once the stationary phase was reached. The extracellular lipase of P. fluorescens RB02?3 strain was homogeneously purified using a combination of ammonium sulfate precipitation, dialyze and gel filtration column chromatography with Sephadex G?100. An extracellular lipase from P. fluorescens RB02?3 strain was purified 2.97 fold with 20.3% recovery. The molecular mass of the purified enzyme was determined to be approximately 57 kDa by SDS-PAGE.After that, the enzyme was characterized and enzyme exhibited maximum activity at pH 7.0 and 50 ºC, respectively. The enzyme exhibited the highest stability in the presence of various organic solvents such as hexane, ethyl acetate and butanol, but isopropanol and ethanol enhanced lipase activity. The lipase was slightly inhibited in the presence of MnCl2, FeCl3, ZnCl2, CoCl2, CuCl2, NiCl2 and EDTA whereas SDS and Tween 80 had no effect on its activity.
Benzer Tezler
- Patlıcanda fungal solgunluk hastalığına karşı bitki gelişimini uyaran kök bakterileri ile Trichoderma türlerinin birlikte kullanım olanaklarının araştırılması
Investigation on the combined use of plant growth promoting rhizobacteria and Trichoderma species against wilt disease of eggplant
MELİS BİLGİNTURAN
Doktora
Türkçe
2021
ZiraatIsparta Uygulamalı Bilimler ÜniversitesiBitki Koruma Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜRSEL KARACA
- Brassicaceae familyasına ait bazı ticari bitki tohumlarında bakteriyel hastalık etmenlerinin tanılanması
Identification of bacterial disease agents on commercial seeds of same plants belongs to Brassicaceae family
FATMA SELÇUK
- Hematolojik maligniteli hastalarda febril nötropenik ataklardaki kan kültür üremelerinin değerlendirilmesi
Research of blood culture results in febrle neutropenic attacks in patients with hematological malignity
NACİYE BETÜL BAYSAL
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2022
Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyolojiİstanbul Medeniyet ÜniversitesiEnfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. YASEMİN ÇAĞ
UZMAN ÖZLEM AYDIN
- Bazı mikrobiyolojik metabolitlerin çipura (Sparus aurata)'daki bozucu mikroorganizmalar üzerine etkisi ve soğukta depolama aşamasında kullanılma potansiyeli
Effect of some microbiological metabolites on specific spoilage microorganisms in gilthead sea bream (Sparus aurata), and their usage potential in cold storage
HATİCE HASANHOCAOĞLU YAPICI
Doktora
Türkçe
2020
Gıda MühendisliğiMuğla Sıtkı Koçman ÜniversitesiSu Ürünleri Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. LATİF TAŞKAYA
DOÇ. DR. ÖZGÜR CEYLAN
- Febril nötropenik hastalarda gelişen kan dolaşımı enfeksiyonlarının epidemiyolojisi ve mortalite üzerine etkili prognostik faktörler
Epidemiology of bloodstream infections in patients febrile neutropenic and prognostic factors affecting mortality
RIDVAN KARAALİ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2012
Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyolojiİstanbul ÜniversitesiEnfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NEŞE SALTOĞLU