Identification of novel genetic elements controlling transcriptional regulation of the human Na+/I- symporter (NIS) gene
İnsan Na+/I- simportır geni transkripsiyonunun düzenlenmesini kontrol eden yeni genetik elemanların belirlenmesi
- Tez No: 180618
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. UYGAR TAZEBAY
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2006
- Dil: İngilizce
- Üniversite: İhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 113
Özet
Na+/I- taşıyıcı protein (Na+/I- Symporter protein, NIS) aktivitesi anne sütüne iyottaşınması ve dolayısı ile yeni doğan bebeğin tiroid hormonları üretebilmesi için şarttır. Sütüreten meme dokusuna ek olarak, artış gösteren NIS ifadesi meme tümörlerinde de teşhisedilmiştir. Birkaç hormon ve ligandın meme hücrelerinde NIS geni işlevsel ifadesindeetkili olduğu tesbit edilmiş olsa da, bu ifadeye yol açan moleküler faktörler, veya genetikbelirleyiciler henüz tamamen belirlenmemiştir. Bu çalışmada, MCF-7 insan meme kanserihücre hattında all-trans-retinoik asit (tRA) muamelesi ile NIS geni ifadesine yol açan cis-ve trans- etkili faktörleri belirledik, ve 17-β-estradiol (E2)'ün NIS geni regülasyonuna etkimekanizmalarını inceledik. Çalışma kapsamında, önce karşılaştırmalı biyoenformatikyöntemleri kullanarak insan sıçan ve farede NIS geninde korunmuş ekzon dışı bölgeleribelirledik. Daha sonra bu bölgelerden cis-etkili faktör potansiyeli olanların lüsiferaz geniniaktive edeceği deney düzenekleri ile korunmuş bölge 3 ve 4'ün MCF-7 hücrelerinde tRAligandına yanıt verdiğini gösterdik. Ayrıca, tRA'ya yanıtı kontrol eden elemanların NISgeninin ilk intronu içerisinde olabileceğine dair veriler elde ettik. Bunlardan başka, NISgen ifadesi tRA yanıtının hücrelerdeki östrojen reseptör alfa (ERα) varlığı ile korelasyongösterdiğini ortaya koyarak, bu faktörün NIS gen ifadesini kontrol ederken girdiğimoleküler etkileşimleri gen dizisi düzeyinde belirledik. Çalışmalarımızda, RNAinterferans metodu kullanarak MCF-7 hücrelerinde ERα gen düzeyini düşürdüğümüzde,hem bazal NIS ifadesinin hem de tRA ile indüklenen NIS geni ifadesinin düştüğünügördük. Aynı zamanda, E2 ligandının NIS gen ifadesini artırıcı etkisini gösterdik. Ayrıca,ERα ifadesi olmayan MDA-MB-231 meme kanseri hücre hatlarına sonradan ERα geniverdiğimizde NIS ifadesinin E2'den bağımsız olarak arttığını görerek, bu artışa yol açankontrol mekanizmasını detaylı olarak inceledik. Bu analizlerde, NIS geni kontrolbölgesinde fare ve sıçanda da korunmuş bir ERα yanıt elemanı (Estrogen ResponseElement) olduğunu, bu ERE'nin E2'ye yanıt verdiğini, ve ERα faktörünün buraya hem invitro hem de in vivo şartlarda bağlandığını gösterdik. Bu sonuçlar, ERα ve E2'nin memekanseri hücrelerinde NIS geni transkripsiyonunu kontrol ettiğini ortaya koymuştur.iv
Özet (Çeviri)
The function of sodium iodide symporter (NIS) in mammary gland epithelial cells isessential for the accumulation of iodide in mother?s milk, which is the first source ofiodide for the synthesis of thyroid hormones in the newborn. In addition to thelactating mammary gland, NIS expression has been also detected in breast tumors.Several hormones and ligands have been implicated in the functional expression ofNIS in the mammary gland and breast cancer cell line models but the moleculardeterminants governing this expression are not yet identified. In this study we aimedto identify cis- and trans-acting elements regulating NIS expression in the breastcancer cell line MCF-7 in response to all-trans-retinoic acid (tRA), and to assess thepossible role of 17-β-estradiol (E2) in regulating the expression of NIS. Usingcomparative bioinformatics, we have identified several regions that were conservedin human, mouse and rat in the sequences flanking and including the NIS gene. Byusing luciferase reporter assays, we have established that conserved clusters 3 and 4respond to tRA in MCF-7. We have also shown that putative retinoic acid responseelements controlling tRA-induced NIS expression in MCF-7 are located in the firstintron of this gene. This tRA-responsive NIS expression was also correlated with theestrogen receptor status of mammary gland cell lines and we investigated roles ofERα in the regulation of NIS expression. We showed that the suppression ofendogenous ERα by RNA interference resulted in down-regulation of both basal andtRA-induced NIS expression in MCF-7, furthermore, we have also shown that (E2)is capable of up-regulating NIS expression in MCF-7. In the ERα negative cell lineMDA-MB-231, re-introduction of ERα resulted in NIS expression in a ligandindependent manner. The role of ERα in the regulation of NIS expression wassupported by the identification of an estrogen response element (ERE) in thepromoter of NIS, this ERE was conserved in human, mouse and rat. We have alsoshowed that this ERE could respond to E2 stimulation, and that ERα occupies theNIS promoter by binding to this novel element in vivo. These results indicate that E2and ERα contribute to the regulation of NIS in the breast cancer cell line MCF-7.iii
Benzer Tezler
- Studies on estradiol dependent transcriptional regulation of human sodium iodide symporter gene in mammary glands
Meme dokusunda sodyum iyot taşıyıcı proteinin estradiyol ile regülasyonu
NERİMAN TUBA GÜLBAĞCI
Yüksek Lisans
İngilizce
2002
Tıbbi Biyolojiİhsan Doğramacı Bilkent ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. H. UYGAR TAZEBAY
- Identification of ABE2A as a circadian amplitude enhancer with drug-like potency
Bir sirkadiyen saat genliği arttırıcısı olarak potansiyel bir ilaç adayı olan ABE2A'nın tanımlanması
BAŞAK VELİOĞLU ULUBAŞ
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
BiyokimyaKoç ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İBRAHİM HALİL KAVAKLI
- Identification of novel transcription factors that modulate BMAL1: CLOCK transactivation
CLOCK-BMAL1 transaktivasyonunu etkileyen yeni transkripsiyon faktorlerinin tanımlanması
SELMA BULUT
Doktora
İngilizce
2017
BiyokimyaKoç ÜniversitesiKimya ve Biyoloji Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İBRAHİM HALİL KAVAKLI
- Primer immün yetmezliğe sahip hastaların klinik, immünolojik ve moleküler genetik değerlendirilmesi ve yeni tanımlanan varyantlar
Clinical, immunological and genetic evaluation of patients with primary immunodeficiency, with identification of novel variants
AHMET BURAK ARSLAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2023
GenetikNecmettin Erbakan ÜniversitesiTıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MAHMUT SELMAN YILDIRIM
- Investigation of ionizing radiation resistance in glioblastoma multiforme
Glioblastoma multiforme'de radyoterapi direncinin araştırılması
NAREG PINARBAŞI
Yüksek Lisans
İngilizce
2019
Moleküler TıpKoç ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. TUĞBA BAĞCI ÖNDER