Geri Dön

Candida albicans suşunun fare modelinde kan ve çeşitli organlarda PCR (polimeraz zincir reaksiyonu) ile gösterilmesi

Detection of Candida albicans in blood and several organs by PCR (polymerase chain reaction) in a mice animal model

PDF İndir

  1. Tez No: 192135
  2. Yazar: MUSTAFA ALTAY ATALAY
  3. Danışmanlar: PROF.DR. A. NEDRET KOÇ
  4. Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
  5. Konular: Mikrobiyoloji, Microbiology
  6. Anahtar Kelimeler: Candida albicans, Sistemik kandidiyazis, PCR, Nötropenik fare modeli, Candida albicans, Systemic candidiasis, PCR, Neutropenicmice model
  7. Yıl: 2006
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Erciyes Üniversitesi
  10. Enstitü: Tıp Fakültesi
  11. Ana Bilim Dalı: Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 61

Özet

2.6. ÖZETAmaç: nvazif kandidoz tanısında, direkt mikroskopik inceleme ve kültürhalen ?altın standart? yöntemlerdir. Ancak bu hastalarda erken tanı çok önemliolduğu halde kültürün sonuçlanması en az 2 gün sürmektedir. Bu nedenle buçalışmada çok daha kısa zamanda sonuç verebilen PCR yönteminin invazif kandidoztanısında kullanılabilirliği ve duyarlılığı fare modelinde kültür ile karşılaştırılarakaraştırılmıştır.Gereç ve yöntem: Nötropeniye sokulan 21 adet spesifik-patojeniçermeyen 11-13 haftalık dişi BALB/c ırkı fareye 200 L 5x104 C.albicans hücresiverilerek infekte edildi. Her bir zaman noktasında 4 fare olmak üzere (bir tanesinegatif kontrol), fareler 1., 6., 24., 48., 72., 96. ve 144. saatlerde öldürüldü. Her birkan örneğinden 100 L direkt olarak Sabouraud dektroz agara (SDA) ekildi ve37 ºC'de 5 gün inkübe edildi. Geri kalanı DNA ekstraksiyonunda kullanıldı. Ayrıca oher bir farenin akciğer, karaciğer, böbrek ve dalak dokuları da çıkarılıp 1 mL PBSiçinde homojenize edildikten sonra koloni sayımı için homojenatın 100 L'siSDA'ya ekildi. Geri kalanı DNA ekstraksiyonunda kullanıldı.PCR yönteminde, kan ve dokulardaki Candida hücrelerinin DNA'sıHeliosis® (Metis Biyoteknoloji Ltd. Türkiye) ekstraksiyon kiti ile ekstrakte edildi.ITS1, 5.8S rRNA geni ve ITS2'den oluşan fungal ITS bölgesi, ITS 1 ve ITS 4üniversal primerleri kullanılarak amplifiye edildiBulgular: Farelerden alınan 21 kan örneğinin 4'ünde (%19.0), karaciğerörneklerinin 18'sinde (%85.7), dalak örneklerinin 17'sinde (%80.9), böbrekörneklerinin 19'unda (%90.4), akciğer örneklerinin 18'inde (%85.7) kültürlerindeüreme saptandı. En yüksek CFU değerleri böbrekten elde edildi. Toplam olaraküreme olan 75 örneğin 47'si PCR ile pozitif bulunmuştur. En az bir veya daha fazlavisseral organından C.albicans izole edilen, kan kültürü negatif 17 farenin 4'ündePCR yöntemi ile pozitiflik saptanmıştır. Kültür ile karşılaştırıldığında PCRyönteminin duyarlılığı %64.0, özgüllüğü %86.2, pozitif prediktif değeri %92.3 venegatif prediktif değeri % 48.1 olarak bulundu.Sonuç: PCR yönteminin kültüre göre çok daha hızlı sonuç vermesi veözgül olması nedeniyle fungal infeksiyonların tanısında kültür ile birliktekullanılabilecek bir yöntem olduğu sonucuna varılmıştır

Özet (Çeviri)

2.7. ABSTRACTAim: In the diagnosis of invazive candidiasis direct microscopy andculture are still the ?gold standart? methods. Though the early diagnosis is veryimportant for these patients, the resulting of the culture takes at least two days. Forthis reason, we investigated the usability and sensitivity of the PCR methodology,which results much earlier, in the diagnosis of systemic candidiasis in comparisionwith culture in mouse model in this study.21 specific-pathogen-free 11-13 week old,Materials and methods:female BALB/c induced neutropenia mice were infected by inoculation of 200 L of.5x104 CFU of C. albicans per mL in the tail vein. The animals were sacrificed at 1.,6., 24., 48., 72., 96. and 144 h after inoculation using four mice ( one of themnegative control) for each time point. Of each blood sample, 100 L was directlycultured on Sabouraud dextrose agar (SDA) plates and incubated for 5 days at 37 ºC.Another blood samples was used for DNA extraction. In addition whole lungs, liver,spleen and kidneys were homogenized in one mL of PBS and 100 L of homogenatewas cultured on SDA plates to determine the clony forming units (CFU). Other tissuesamples was used for the DNA extraction.For PCR method, DNA from Candida cells present in blood and tissuesamples was extracted by using Heliosis® (Metis Biyotechnology Ltd. Türkiye)extraction kit. The fungal ITS region, comprising ITS1, the 5.8S rRNA gene andITS2 was amplified with universal primers ITS1 and ITS4.Results: Of the 21 blood samples of mice analyzed by culture only 4 werepositive (%19.0). C.albicans were isolated from the liver of 18 mice (%85.7), spleenof 17 mice (%80.9), kidneys of 19 mice (%90.4) and lung of 18 (%85.7) mice byculture. The highest CFU counts were obtained from kidney. In total, of the 75culture-positive samples, 47 samples were positive by PCR method. Of interest wasthe observation that 4 of the 17 blood culture-negative mice who had C.albicansisolated from one or more visceral organs, yielded positive PCR results with bloodspecimens. Compare with the culture, the sensitivity, specificity, positive andnegative predictive value of PCR methods were % 64.0, %86.2, %92.3 and %48.07respectively.Conclusion: It is concluded that, because of higher specificity and givingmore rapid results than culture, PCR method is a diagnostic tool along with culture inthe diagnosis of fungal infections.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    587015

    Mayaların antimikrobiyel madde üretimine farklı karbon kaynakları ve sıcaklıklarının etkisinin belirlenmesi

    Determination of changes in antimicrobial production of yeasts under various carbon source and growth temperatures

    TUBA BÜYÜKSIRIT BEDİR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    Gıda MühendisliğiSüleyman Demirel Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HAKAN KULEAŞAN

  2. Tez No

    352672

    Atılım pompalarını fazla eksprese eden flukanazol dirençli/doza bağımlı duyarlı candida albicans suşlarında bu genlerin transkripsiyon faktörlerindeki mutasyonların araştırılması

    Investigation of mutations in transcription factors of the efflux pump genes in efflux pump overexpressing fluconazole resistant/dose dependent susceptible candida albicans strains

    KEMAL TURAN KALKANDELEN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    MikrobiyolojiDokuz Eylül Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MİNE DOLUCA DERELİ

  3. Tez No

    267167

    Oral antiseptik ajanların Candıda Albıcans'ın fosfolipaz ve proteinaz enzimleri üzerine etkisi

    Effect of oral antiseptic agents on phospholipase and proteinase enzyms of Candida Albicans

    BANU UYGUN CAN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    Diş HekimliğiMarmara Üniversitesi

    Farmasötik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TANJU KADİR

  4. Tez No

    609721

    Candida albicans'ın eşey tipi gen bölgesi karakterizasyonunun belirlenmesi

    Investigation characterization of the sexual reproduction of candida albicans

    MÜGE ARIBAL ÇELİK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    Eczacılık ve FarmakolojiMersin Üniversitesi

    Farmasötik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYLİN DÖĞEN

  5. Tez No

    390143

    Klinik örneklerden izole edilen Candida albicans türlerinde virulans faktörlerinin fenotipik ve genotipik olarak araştırılması

    Investigation of virulence factors of Candida albicans species isolated from clinical specimens phenotypically and genotypically

    DENİZ TURAN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    Mikrobiyolojiİstanbul Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NURİ KİRAZ

Geri Dön