Geri Dön

RNAi mediated cholinesterase co-regulation in the embryonic rat retinal cell line R28 and interactions with the ERK signaling pathway

Kolinesterazların embriyonik sıçan retina hücre dizisi R28'de ortak düzenlenmelerinin RNAi ile incelenmesi ve ERK sinyal iletim yolu ile etkileşimleri

PDF İndir

  1. Tez No: 194070
  2. Yazar: EBRU BODUR
  3. Danışmanlar: PROF.DR. A. NEŞE ÇOKUĞRAŞ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biyoteknoloji, Moleküler Tıp, Biochemistry, Biotechnology, Molecular Medicine
  6. Anahtar Kelimeler: asetilkolinesteraz, butirilkolinesteraz, RNAi, ERK sinyal yolu, retina kültürü, Acetylcholinesterase, Butyrylcholinesterase, RNAi, ERK signaling, retinal cell culture
  7. Yıl: 2005
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 149

Özet

Sinir gelişimi süresince kolinesterazlar (ChE) sıralı bir ekspresyon izlerler.Hücre çoğalmasında butirilkolinesteraz (BChE) ekspresyonu gözlenirken; farklılaşmada asetilkolinesteraz(AChE) ekspresyonu başlar. Bu sıralı ekspresyon kolinesterazlar arasında ortak birdüzenlenme olduğunu düşündürmektedir. Embriyonik sıçan retinası kökenli R28hücre dizisi kullanarak ChE ortak düzenlenmesi ve sinyal iletim yolları ile ilişkileriincelemiştir. BChE ekspresyonu, RNA girişimi (RNAi) ile BChE'ye özgü siRNAtasarlanıp kullanılarak susturulmuş ve sistemdeki değişim RT-PCR, Western Blot,enzim aktivite tayini ve immunohistokimyasal yöntemler kullanılarak molekülerdüzeyde incelenmiştir. BChE susturumu ile hem mRNA hem de proteinseviyelerinde AChE artışı gözlenmiş ve ChE'ler arası ortak düzenlenmede BChEmRNA'sı miktarının rol oynadığı bulunmuştur. Ortak düzenlenim ile ilişkili sinyaliletim yolları çalışmasında hücre çoğalması ve farklılaşmasında görev alan ProteinKinaz C (PKC) ve ERK yolları incelenmiştir. BChE susturumu α-PKC'de iki katartışa yol açarken fosfo-ERK1 ve ERK2'de değişken etkinliğe neden olmuştur.Transfeksiyon sonrası 24. saatte her iki ERK proteinin aktif formları dörtte birseviyelerine düşerken 48. saatte fosfo-ERK2'de iki kat artış gözlenmiştir. ERK2substratları fosfo-P90rsk1 ve c-fos'ta artış gözlenirken Elk-1'de bir etkigörülmemiştir. Bulgular, R28 hücre dizisinde ChE'lerin ERK, PKC yolları ile ilişkiliolup P90rsk1 ve ERK sinyal düzenlenmesinde rol aldıklarına işaret etmektedir.

Özet (Çeviri)

During neuronal development cholinesterases display sequential expressions; butyrylcholinesterase(BChE) is associated with cell proliferation and acetylcholinesterase (AChE) with differentiationdemonstrating the existence of a co-regulation. RNA interference was employed in the rat embryonicretinal cell line R28 to analyze the molecular basis for cholinesterase co-regulationand their interactions with signaling pathways. Expression studies were done by RT-PCR, Western Blot, enzymatic analysis and immunohistochemistry. Short interferingRNAs (SiRNAs) against rat BChE were designed to successfully knock down BChEexpression. This resulted in a higher expression of AChE at both mRNA and proteinlevels, showing that the amount of available BChE mRNA was involved in ChE co-regulation. To resolve cell-internal proliferation and/or differentiation relatedpathways associated with ChE co-regulation, the Protein Kinase C (PKC) and ERKsignaling pathways were investigated. BChE knockdown caused a two-fold increasein α-PKC. During knockdown, 4-fold decreases in phospho-ERK1 and ERK2 werefound at 24 hrs after transfection followed by a two-fold increase in phospho-ERK2at 48 hrs post transfection. As downstream targets of ERK2 after BChE knockdown,Western blot analyses displayed an activation of phospho-P90RSK1 and an increasein c-fos expression, but no Elk-1 involvement. These findings indicate that duringdevelopment cholinesterases are participating in an intricate cross-talk betweenERK- and PKC-dependent pathways, and that the ChE modulate transcriptionalactivator P90RSK1 and ERK signaling in the R28 cell line.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    401192

    Genetic analysis of stoned B/stonin 2 function in vivo

    Başlık çevirisi yok

    MUHAMMED KASIM DİRİL

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2005

    Tıbbi BiyolojiGeorg-August-Universität Göttingen

    PROF. DR. VOLKER HAUCKE

  2. Tez No

    739772

    Nesprin-1 is required to maintain genomic stability and preventtumorigenesis

    Başlık çevirisi yok

    İLKNUR SUR

    Doktora

    Almanca

    Almanca

    2013

    BiyokimyaUniversität zu Köln

    PROF. DR. ANGELİKA A. NOEGEL

    PROF. DR. SİEGFRİED ROTH

  3. Tez No

    886076

    Marul mozaik virüsü, marul nekrotik bodurluk virüsü ve marul nekrotik sarılık virüsü'nü hedefleyen miRNA'ların in siliko yaklaşımlarla belirlenmesi

    Determination of miRNAs targeting lettuce mosaic virus, lettuce necrotic stunt virus and lettuce necrotic yellows virus using in silico approaches

    EDA ÖZKESER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Bilim ve TeknolojiYıldız Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SEVGİ MARAKLI

  4. Tez No

    844951

    Investigating the role of CYP2W1 in cancer progression

    CYP2W1'in kanser ilerlemesindeki rolünün incelenmesi

    MERVE AKKULAK

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ORHAN ADALI

    DR. EMRE EVİN

  5. Tez No

    332197

    Cellular role of a protocadherin family member in mammalian cells

    Protocadherin aile üyesinin memeli hücrelerindeki hücresel rolü

    SELDA BÜLBÜL

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2013

    GenetikKoç Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. NURHAN ÖZLÜ

Geri Dön