RNAi mediated cholinesterase co-regulation in the embryonic rat retinal cell line R28 and interactions with the ERK signaling pathway
Kolinesterazların embriyonik sıçan retina hücre dizisi R28'de ortak düzenlenmelerinin RNAi ile incelenmesi ve ERK sinyal iletim yolu ile etkileşimleri
- Tez No: 194070
- Danışmanlar: PROF.DR. A. NEŞE ÇOKUĞRAŞ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biyoteknoloji, Moleküler Tıp, Biochemistry, Biotechnology, Molecular Medicine
- Anahtar Kelimeler: asetilkolinesteraz, butirilkolinesteraz, RNAi, ERK sinyal yolu, retina kültürü, Acetylcholinesterase, Butyrylcholinesterase, RNAi, ERK signaling, retinal cell culture
- Yıl: 2005
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Sinir gelişimi süresince kolinesterazlar (ChE) sıralı bir ekspresyon izlerler.Hücre çoğalmasında butirilkolinesteraz (BChE) ekspresyonu gözlenirken; farklılaşmada asetilkolinesteraz(AChE) ekspresyonu başlar. Bu sıralı ekspresyon kolinesterazlar arasında ortak birdüzenlenme olduğunu düşündürmektedir. Embriyonik sıçan retinası kökenli R28hücre dizisi kullanarak ChE ortak düzenlenmesi ve sinyal iletim yolları ile ilişkileriincelemiştir. BChE ekspresyonu, RNA girişimi (RNAi) ile BChE'ye özgü siRNAtasarlanıp kullanılarak susturulmuş ve sistemdeki değişim RT-PCR, Western Blot,enzim aktivite tayini ve immunohistokimyasal yöntemler kullanılarak molekülerdüzeyde incelenmiştir. BChE susturumu ile hem mRNA hem de proteinseviyelerinde AChE artışı gözlenmiş ve ChE'ler arası ortak düzenlenmede BChEmRNA'sı miktarının rol oynadığı bulunmuştur. Ortak düzenlenim ile ilişkili sinyaliletim yolları çalışmasında hücre çoğalması ve farklılaşmasında görev alan ProteinKinaz C (PKC) ve ERK yolları incelenmiştir. BChE susturumu α-PKC'de iki katartışa yol açarken fosfo-ERK1 ve ERK2'de değişken etkinliğe neden olmuştur.Transfeksiyon sonrası 24. saatte her iki ERK proteinin aktif formları dörtte birseviyelerine düşerken 48. saatte fosfo-ERK2'de iki kat artış gözlenmiştir. ERK2substratları fosfo-P90rsk1 ve c-fos'ta artış gözlenirken Elk-1'de bir etkigörülmemiştir. Bulgular, R28 hücre dizisinde ChE'lerin ERK, PKC yolları ile ilişkiliolup P90rsk1 ve ERK sinyal düzenlenmesinde rol aldıklarına işaret etmektedir.
Özet (Çeviri)
During neuronal development cholinesterases display sequential expressions; butyrylcholinesterase(BChE) is associated with cell proliferation and acetylcholinesterase (AChE) with differentiationdemonstrating the existence of a co-regulation. RNA interference was employed in the rat embryonicretinal cell line R28 to analyze the molecular basis for cholinesterase co-regulationand their interactions with signaling pathways. Expression studies were done by RT-PCR, Western Blot, enzymatic analysis and immunohistochemistry. Short interferingRNAs (SiRNAs) against rat BChE were designed to successfully knock down BChEexpression. This resulted in a higher expression of AChE at both mRNA and proteinlevels, showing that the amount of available BChE mRNA was involved in ChE co-regulation. To resolve cell-internal proliferation and/or differentiation relatedpathways associated with ChE co-regulation, the Protein Kinase C (PKC) and ERKsignaling pathways were investigated. BChE knockdown caused a two-fold increasein α-PKC. During knockdown, 4-fold decreases in phospho-ERK1 and ERK2 werefound at 24 hrs after transfection followed by a two-fold increase in phospho-ERK2at 48 hrs post transfection. As downstream targets of ERK2 after BChE knockdown,Western blot analyses displayed an activation of phospho-P90RSK1 and an increasein c-fos expression, but no Elk-1 involvement. These findings indicate that duringdevelopment cholinesterases are participating in an intricate cross-talk betweenERK- and PKC-dependent pathways, and that the ChE modulate transcriptionalactivator P90RSK1 and ERK signaling in the R28 cell line.
Benzer Tezler
- A plant-mediated RNAi strategy targeting ache1 and SEC23 genes to combat tomato leafminer (tuta absoluta (meyrick)) in tomato
Domateste, domates güvesiyle (tuta absoluta (meyrıck)) mücadelede ache1 ve SEC23 genlerini hedef alan bitki aracılı rnai stratejisi
MUNEEB HASSAN HASHMI
Doktora
İngilizce
2022
BiyoteknolojiNiğde Ömer Halisdemir ÜniversitesiTarımsal Genetik Mühendisliği Ana Bilim Dalı
ASSOC. DR. UFUK DEMİREL
DOÇ. DR. ALLAH BAKHSH
- RNAi aracılı gen susturma yönteminin bitki-patojen etkileşiminde kullanımı: PTTG_02001 efektör adayının fonksiyonel analizi
Use of RNAi-mediated gene silencing in plant-pathogene interaction: Functional analysis of PTTG_02001 effector candidate
NESLİHAN YILMAZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2025
GenetikTrakya ÜniversitesiBiyoteknoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEMRA HASANÇEBİ
- RNA silencing mediated resistance against plum pox virus
Şarka virüsüne (Plum pox) karşı RNA sessizleştirilmesiaracılığıyla direnç geliştirilmesi
MARYAM GHADERI SOHI
Doktora
İngilizce
2019
BiyolojiErciyes ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MİKAİL AKBULUT
DOÇ. DR. KAHRAMAN GÜRCAN
- Investigating the oncogenic function of brain specific cyp4x1 gene in glioblastoma cancer cells using RNA-i mediated gene repression strategy
Glioblastom kanser hücrelerinde beyine özgü cyp4x1 geninin onkojenik fonksiyonunun RNA-i aracılı gen susturma stratejisiyle incelenmesi
ÖZLEM DURUKAN
Doktora
İngilizce
2023
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. ORHAN ADALI
PROF. ŞEVKİ ARSLAN
- Hepatosellüler karsinomada kemik morfojenik protein 9 (BMP9)'un siRNA ile baskılanarak fonksiyonel analizi
Functional analysis of siRNA-mediated knock-down of bone morphogenetic protein 9 (BMP9) in hepatocellular carcinoma
TUĞÇE YAŞAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
GenetikTurgut Özal ÜniversitesiTıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ÖMER FARUK HATİPOĞLU