Antisens oligonükleotid taşıyan sistem geliştirilmesi ve in vitro tayini
Development of a novel delivery system for antisense oligonucleotides and its in vitro investigation
- Tez No: 196102
- Danışmanlar: PROF.DR. JÜLİDE AKBUĞA
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Eczacılık ve Farmakoloji, Biotechnology, Pharmacy and Pharmacology
- Anahtar Kelimeler: Antisens oligonükleotid, Kitozan, Kompleks, Nanopartikül, n vitro, Antisense oligonucleotide, Chitosan, Complex, Nanoparticle, In vitro
- Yıl: 2007
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Marmara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Farmasötik Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 188
Özet
Antisens oligonükleotidler (AS ODN), hedef mRNA veya pre-mRNA'ya komplementer dizilise sahip olan ve selektif hibridizasyon ile gen ekspresyonunu durduran, kısa, sentetik, tek zincirli DNA molekülleri olup; kanser, AIDS gibi pekçok hastalıgın tedavisi için gelecek vaad etmektedirler. Ancak bu moleküllerin tedavide kullanılmalarında en büyük sorun; stabilitelerinin ve hücreye penetrasyonlarının düsük olması ve bu nedenle de uygun bir tasıyıcı sisteme ihtiyaç duyulmasıdır. Bu çalısmada katyonik bir polimer olan kitozanla AS ODN'lerin kompleks ve nanopartikül formları hazırlanmıs; yüzey yükü, partikül büyüklügü gibi fizikokimyasal özellikleri incelenmis ve uygun formülasyonların in vitro hücre kültüründe antisens etkinlikleri arastırılmıstır. Yaklasık 200 nm boyutunda oldukları belirlenen 1:20 ve 1:100 (AS ODN: Kitozan) kompleksler ile nanopartiküllerin antisens özellikleri, HeLa hücresinde pSV-Beta-Gal plazmidi tarafından kodlanan Beta-galaktozidaz ekspresyonunun AS ODN tasıyıcı sistemlerin verilmesinden sonraki inhibisyonu ile ölçülmüstür. Sonuçta, her iki formda da kitozan, AS ODN'leri enzimatik parçalanmadan koruyabilmistir ancak nanopartiküllerde, AS ODN ile kitozan arasında çok güçlü elektrostatik bagların olusması sonucunda AS ODN salınımı gerçeklesmemistir ve antisens özelliginin de düsük oldugu saptanmıstır. 1:100 (-/+) komplekslerinde ise özellikle pDNA'nın transfeksiyonundan 24 saat sonra hücrelere AS ODN verilmesiyle yüksek antisens etkinlik saptanmıstır. Kitozanın özellikle fosforotiyoat modifikasyonlu AS ODN için iyi bir tasıyıcı oldugu görülmüstür. Bu çalısma, gelecekte kitozan polimeri ile yapılacak antisens oligonükleotid tasıyıcı sistem arastırmaları için temel olusturmaktadır.
Özet (Çeviri)
Antisense oligonucleotides (AS ODNs) are short, single-stranded, synthetic molecules that have complementary sequences of targeted mRNA or pre-mRNA by which the selective hybridization yields the inhibition of gene expression. These molecules are promising molecules in the treatment of diseases such as cancer, AIDS, etc. However, the major problems in using such molecules in the treatment of the diseases mentioned above, are lack of stability and poor penetration into the cell, therefore; a spesific carrier is needed. In this thesis, the complex and nanoparticle forms of AS ODNs were prepared by using a cationic polymer called chitosan. Afterwards, the physicochemical properties such as zeta-potential and particle size of these formulations were measured and the antisense activity of the appropriate formulations were investigated in vitro. The antisense activity of 1:20 and 1:100 (AS ODN: Chitosan) complexes and nanoparticles which have approximately 200 nm particle size, were measured based on the inhibition of Betagalactosidase coded by pSV-Beta-Gal plasmid followed by the addition of antisense containing formulations into the HeLa cells. Eventually, both forms protected AS ODNs from potential enzymatic degredations. However, due to the strong electrostatic bonds between chitosan and AS ODN in nanoparticle formulations, AS ODN failed to be released and consequently, the antisense activity of nanoparticles were observed to be poor. In 1:100 (-/+) complex formulations, high antisense activity was observed especially in the case of adding AS ODNs after 24 hours from pDNA transfection into the cell. As a result, chitosan can be considered as a suitable carrier especially for phosphorothioate modified AS ODNs. This study can form the basis for the forthcoming studies related with carrier systems of AS ODNs that will be done with chitosan polymer.
Benzer Tezler
- Identification of long non-coding RNAs overcoming tamoxifen resistance in estrogen receptor alpha positive breast cancer
Östrojen reseptörü alfa pozitif meme kanserinde tamoksifen direncini kıran uzun kodlanmayan RNA'ların belirlenmesi
HİLAL BAL
Yüksek Lisans
İngilizce
2017
Biyolojiİhsan Doğramacı Bilkent ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. ÖZGÜR ŞAHİN
- Kanser tedavisine yönelik antisens oligonükleotid yüklü polimerik nanopartikül tasarımı ve İn vitro karakterizasyonu
Design and In vitro characterization of antisense oligonucleotide loaded polymeric nanoparticles for cancer therapy
PEZHMAN HOSSEİNİAN AHANGARNEZHAD
Yüksek Lisans
Türkçe
2012
GenetikHacettepe ÜniversitesiNanoteknoloji ve Nanotıp Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. EYLEM GÜVEN ÖZTÜRK
- Polimer/oligonükleotid komplekslerinin karakterizasyonu ve modellenmesi
Characterization and modelling of polymer/olygonucleotide complexes
ERAY DALGAKIRAN
Doktora
Türkçe
2013
BiyomühendislikYıldız Teknik ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SEVİL DİNÇER
PROF. DR. HASAN TATLIPINAR
- HIV-1 T transaktivasyonunun antisens oligonükleotid teknolojisi kullanılarak inhibe edilmesi
Inhibition of HIV-1 transactivation by antisense olignucleotide technology
ÖMER FARUK ARICI
Doktora
Türkçe
2015
Eczacılık ve FarmakolojiErciyes ÜniversitesiEczacılık Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İLHAN DEMİRHAN
- Deneysel kafa travması modelinde intraventriküler antisens oligonükleotid injeksiyonu ile aquaporin-4'ün baskılanmasının beyin ödemi üzerine etkisi
Aquaporin-4 (aqp4) plays an important role in the regulation of water balance in the brainin this study, inhibition of AqP4 synthesis and decrease in brain edema following intraventricular injection of antisense oligonucleotide after focal cortical contusioninjury in mice are investigated.
MEHDİ TOHİDİ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2013
NöroşirürjiHacettepe ÜniversitesiNöroşirürji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MELİKE MUT AŞKUN