Cryptosporidium parvum'da transient transformasyon
Transient transformation of Cryptosporidium parvum
- Tez No: 212539
- Danışmanlar: PROF. DR. SADIK DİNÇER
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Parazitoloji, Moleküler Tıp, Biology, Parasitology, Molecular Medicine
- Anahtar Kelimeler: Cryptosporidium, Hücre Kültürü, Elektroporasyon, Lipofektamin, Real time PCR, Cryptosporidium, Cell culture, Electroporation, Lipofectamine, Real time PCR
- Yıl: 2007
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Çukurova Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu çalışmanın amacı Cryptosporidium parvum için genetik transformasyon sistemini (transient transformasyon) kurmaktır. Genetik transformasyon gen fonksiyonlarını analiz etmek için gerekli olup, C. parvum genleri ile henüz böyle bir analiz gerçekleştirilmemiştir. Bu amaç doğrultusunda C. parvum'un ribosomal protein genlerini ( BX538351 segment 2/4 L11 protein genleri üzerinde 84361- 85501 baz dizisi) taşıyan Crypto-construct GFP plazmidinin, C. parvum sporozoitlerine transformasyonu elektroporasyon ve lipofektamin yöntemleri kullanılarak yapılmıştır. Hücre kültürlerinde elde edilen transformantlar invert floresan mikroskop ve revers- transkriptaz PCR ile doğrulanmıştır. Transformasyon ve elektroporasyon koşullarını optimize etmek için Crypto construct GFP vektörün yanı sıra pCMV-DsRed, pEYFP-Mem ekspresyon vektörleri de kullanılmıştır. C. parvum sporozoitlerini açığa çıkarmak için kullanılan eksistasyon koşulları içinde ookistlerin % 80 oranında Taurocholic acid /cytomix:RPMI-1640 (1:1) besi ortamında existe olduğu gözlenmiştir. Bu ortam içerisinde bir elektrik akımı verilerek elektropore edilen sporozoitlerin HCT-8 hücre kültürlerini daha iyi infekte ettiği belirlenmiştir. Hem elektroporasyon hem de lipofektamin yöntemiyle pCMV-DsRed ve pEYFP-Mem vektörlerinin HCT-8 hücre kültürlerine transfeksiyonu sağlanmıştır. Elektroporatörün 180 V, kapasitans 250 ?F, resistans yok şeklinde ayarlandığı koşullar altında pCMV-DsRed ve pEYFP-Mem vektörlerinin HCT-8 hücre kültürlerindeki ekspresyonları floresan mikroskop altında gözlenirken, elektroporatörün 1000 V, 50 ?F, 50 ? şeklinde ayarlandığı koşullarda bu vektörlerin HCT-8 hücre kültürlerindeki ekspresyonları floresan mikroskop altında gözlenememiştir. Her iki elektroporasyon koşulları altında Crypto construct GFP Vektörün transfeksiyonu sonucunda floresan mikroskop altında gözle görülebilir ekspresyon elde edilememiştir. Yapılan RT-PCR ve Nested PCR ile az olan GFP mRNA ekspresyonu gözlenmiştir.
Özet (Çeviri)
The goal of the present research is to develop a genetic transformation system for Cryptosporidium parvum. Genetic transformation is an essential tool for analyizing gene function and regulation, but it is not avaliable for C. parvum. Establish a transient transformasyon system for C. parvum, electroporetic transformation of sporozoites with plasmids carrying C. parvum intergenic regions flanking a reporter ( Prot L11 on BX538351 segment 2/4, between 84361- 85501 bp ); detection of transformants in cell culture by fluorescent microscopy or reverse transcription PCR. In this study, transformation efficiency was optimized by testing different plasmid constructs (pCMV-DsRed and pEYFP-Mem expression vectors) and electroporation conditions It was showed that all of the using excystation condition, TA/cytomix:RPMI-1640media (1:1) was the best condition and determined 80% of excystation rate. Electroporated sporozoites giving 1 pulse infected HCT-8 cell culture much more efficiently than the other pulse. pCMV-DsRed and pEYFP-Mem Vectors were transfected into HCT-8 cell line by using both electroporation and lipofectamine methods. Transfected pCMV-DsRed and pEYFP-Mem Vectors expressions at 80 voltage, 50 capacitance, none resistance of electroporation condition observed by fluorescent microscopy. However when giving 1000 voltage, 50 capacitance, 50 resistance in electroporator, transfected pCMV-DsRed Vector and pEYFP-Mem Vector and Crypto-construct GFP Vector expressions could not be observed visually by fluorescent microscopy. There was no visually C. parvum (Crypto-construct GFP Vector) expression in both of elektroporation condition by fluorescent microscopy. In order to show incase of avaliable a little GFP mRNA expression of C. parvum vector in transfected HCT-8 cells by two electroporation conditions was used RT-PCR, Nested PCR.
Benzer Tezler
- Cryptosporidium parvum genotiplerinin ishalli çocuklarda çeşitli yöntemlerle tanımlanması
Identification of cryptosporidium parvum genotypes in children with diarrhea by using various techniques
HANDE ŞİMŞİR
- Cryptosporidium parvum ile deneysel enfekte buzağılarda serum demir, bakır ve çinko konsantrasyonlarının incelenmesi
Interpretation of serum iron, copper and zinc concentrations in experimentally induced cryptosporidium parvum infection among calves
DORUK BABAÇ
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
Veteriner HekimliğiAdnan Menderes Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BÜLENT ULUTAŞ
- Klinoptilolit içeren polimer nanopartiküllerin cryptosporidium parvum üzerine in vitro etkinliğinin araştırılması
Investigation of in vitro effectiveness of polymeric nanoparticles containing clinoptilolit on cryptosporidium parvum
GAMZE KARAOĞLAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
Veteriner HekimliğiAdnan Menderes ÜniversitesiVeterinerlik İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BÜLENT ULUTAŞ
- Endoskopi endikasyonu konan asemptomatik bireylerde cryptosporidium parvum araştırılması
Study of cryptosporidium parvum in endoscopic indicated asymptomatic individuals
EMEL TÜREGÜN ÖZDEMİR
Yüksek Lisans
Türkçe
2000
MikrobiyolojiGazi ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. SEMRA KUŞTİMUR
- Deneysel olarak cryptosporidium parvum ile enfekte edilen farelerin ginsenosid RH2 ile tedavisinin değerlendirilmesi
Evaluation of experimental cryptosporidium parvum infected mice treatment with ginsenoside RH 2
ESENGÜL YILDIRIM
Doktora
Türkçe
2024
Veteriner HekimliğiFırat ÜniversitesiVeterinerlik İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ENGİN BALIKCI