Kreatin ve kreatinin tayinlerine yönelik enzim temelli hibrit biyosensörlerin geliştirilmesi
Enzyme based on hybrid biosensor for the development for determination of creatine and creatinine
- Tez No: 224147
- Danışmanlar: PROF.DR. ERHAH DİNÇKAYA
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Kreatinin biyosensörü, kreatin biyosensörü, kreatinin, kreatin, sarkozin, Creatinine biosensor, creatine biosensor, creatinine, creatin, sarcosine
- Yıl: 2007
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 101
Özet
Bu tezde kreatinin amidohidrolaz, kreatin amidinohidrolaz ve sarkozin oksidaz enzimlerinden yararlanıldı. Bu enzimler , oksijen tayini amacıyla kullanılan çözünmüş oksijen probu yüzeyinde, glutaraldehid yardımıyla jelatin ile çapraz bağlanarak kreatin ve kreatinin biyosensörü hazırlandı. Ölçümler kreatin ve kreatinin derişimi ile doğru orantılı olarak tüketilen oksijen düzeyinin belirlenmesi yoluyla çizilen standart grafikler yardımıyla gerçekleştirildi. Hazırlanan kreatin biyosensörü için optimum koşullar belirlendi. Kreatin biyosensörünün optimizasyon çalışmaları sonunda kreatin amidinohidrolaz miktarı , sarkozin oksidaz miktarı, jelatin miktarı ve glutaraldehid yüzdesi sırayla 0,56mg/cm2 kreatin amidinohidrolaz(16U), 0,38mg/cm2 sarkozin oksidaz(25U) , 5,90mg/cm2 jelatin ve %2,5 olarak bulundu. Yapılan optimizasyon çalışmaları sonucunda çalışma tamponu pH=8,0 , 50 mM lık fosfat Tamponu olmasına ve ölçümlerin 37 0C gerçekleşmesine karar verildi. Geliştirilen kreatin biyosensörünün karakterizasyon çalışmaları sonucunda, substrat olarak kreatin VI kullanılması durumunda 25?M-750?M doğrusal sonuçlar alınabildiği belirlendi. Tekrarlanabilirlik denemelerinde (n=10) 500?M kreatin derişimi ortalama değer =500,7 ?M standart sapma (S.S)= ± 2,21 ?M ve varyasyon katsayısı VK= %0,44 bulundu. Hazırlanan kreatinin biyosensörü için optimum koşullar belirlendi. Kreatinin biyosensörünün optimizasyon çalışmaları sonunda kreatinin amidohidrolaz, kreatin amidinohidrolaz miktarı , sarkozin oksidaz miktarı, jelatin miktarı ve glutaraldehid yüzdesi sırayla 0,016mg/cm2 kreatinin amidohidrolaz(37U), 0,56mg/cm2 kreatin amidinohidrolaz(16U), 0,38mg/cm2 sarkozin oksidaz(25U), 5,90mg/cm2 jelatin ve %2,5 olarak bulundu. Yapılan optimizasyon çalışmaları sonucunda çalışma tamponu pH=8,0 , 50 mM lık fosfat Tamponu olmasına ve ölçümlerin 37 0C gerçekleşmesine karar verildi. Geliştirilen kreatinin biyosensörünün karakterizasyon çalışmaları sonucunda, substrat olarak kreatinin kullanılması durumunda 10?M-750?M doğrusal sonuçlar alınabildiği belirlendi. Tekrarlanabilirlik denemelerinde (n=10) 500?M kreatin derişimi ortalama değer =499,8 ?M standart sapma (S.S)= ±6,957 ?M ve varyasyon katsayısı VK= %1.4 bulundu.
Özet (Çeviri)
In this thesis, enzymes were used creatinine amidohydrolase, creatine amidinohydrolase and sarcosine oxidase. These enzymes was crosslinked with gelatine by using glutaraldehyde and fixed on pretreated Teflon membrane, served as creatine biosensor and creatinine biosensor. Measurements were carried out by standart curves which were obtained by the determination of consumed oxygen level, related to creatine and creatinine concentration in the enzymatic reaction. Firstly, the optimum conditions for the creatine biosensor and the creatine biosensor were established. In the optimization studies of the creatine biosensor, creatine amidinohydrolase amount, sarcosine oxidase amount , gelatine amount and glutaraldehide ratios were determined as 0,56mg/cm2 (16U), 0,38mg/cm2 (25U), 5,90mg/cm2 gelatine and 2,5% respectively. Phosphate buffer (50mM. pH= 8 ) and 37 0C were established as providing the potimum working conditions. The characterization studies of developed the creatine biosensor proved a VIII lineratiriy in the creatine concentration range 25?M-750?M. The reproducibility experiments (n=10) revealed that for 500 ?M creatine , the average value =500,7?M , standart deviation (SD) was ± 2,21 ?M and, variation coefficient (C.V) was 0,44% . The optimum conditions for the creatinine biosensor and the creatinine biosensor were established. In the optimization studies of the creatine biosensor, creatinine amidohydrolase amount, creatine amidinohydrolase amount, sarcosine oxidase amount , gelatine amount and glutaraldehide ratios were determined as 0,016mg/cm2 (37U), 0,56mg/cm2 (16U), 0,38mg/cm2 (25U), 5,90mg/cm2 gelatine and 2,5% respectively. Phosphate buffer (50mM. pH= 8 ) and 37 0C were established as providing the potimum working conditions. The characterization studies of developed the creatinine biosensor proved a lineratiriy in the creatinine concentration range 10?M-750?M. The reproducibility experiments (n=10) revealed that for 500 ?M creatinine , the average value =499,8 ?M, standart deviation (SD) was ±6,957 ?M and, variation coefficient (C.V) was 1,4 %.
Benzer Tezler
- Akut myokard infarktüsünün erken tanısında kreatin kinaz-MB troponin-T ve myoglobinin diagnostik değeri
The Role of creatine kinase-MB, troponin-T and myoglobin in early diagnoses of acute myocard infarction
FAİZA HAJ İBRAHİM
Yüksek Lisans
Türkçe
1999
Biyokimyaİstanbul ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NİHAL SALMAYENLİ
- Ritodrin uygulanan 24-34 haftalık gebelerin preterm bebeklerinde perinatal asfiksi indikatörü olarak kord kanı PH, kan gazları, kreatin fosfokinaz ve MB izoenzimi analizi
Başlık çevirisi yok
ALİ DİNÇAY KAVAKLI
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1993
Kadın Hastalıkları ve DoğumAtatürk ÜniversitesiKadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
- Cyclamen hederifolium ekstraktlarının bazı biyolojik ve histobiyokimyasal özelliklerinin araştırılması
Cyclamen hederifolium investigation of some biological and histobiochemial properties of extracts
DİLEK SAK
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
BiyokimyaPamukkale ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. RAMAZAN MAMMADOV
- Değişik yaş gruplarında hipoglisemi insidansının araştırılması
An investigation on hypoglycemia incidence in different age groups
ERTUĞRUL YURTSEVER
- İskemik miyokardiyal korunmada oksijenlendirilmiş ve oksijenlendirilmemiş kardiyoplojilerin kreatin kinaz MB seviyeleri ile karşılaştırılması
Başlık çevirisi yok
FATİH MEHMET YORULMAZ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1989
Göğüs Kalp ve Damar CerrahisiGazi ÜniversitesiGöğüs Kalp ve Damar Cerrahisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALİ ERSÖZ