Bazı karbonik anhidraz izoenzimlerinin saflaştırılması için yeni bir afinite jelinin sentezi ve uygulanması
A new affinity gel synthesis for purification of some of carbonic anhydrase isozymes and applications
- Tez No: 237731
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. ÖZEN ÖZENSOY GÜLER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2008
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Balıkesir Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Bölümü
- Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 107
Özet
Afinite kromatografisi, proteinlerin saflaştırılmasında, kullanışlı ve uygun bir tekniktir. Bu teknik ile ligand olarak daha önceden orijinal olarak sentezlenmiş bir CA inhibitörü 4-izosiyonatbenzensülfonamit, çalışmada matriks olarak kullanılan Eupergit C-250L 'ye etilendiamin uzantı koluyla bağlanarak yeni bir afinite jeli sentezlenmiştir.Bu reaksiyonda, matriks ile ligand arasındaki reaksiyon mekanizması için gerekli olan ve sterik etkileşmenin kontrolü amacıyla etilendiamin kullanılmıştır. Eupergit C-250L' nin taşıdığı reaktif oksiran grupları, ligandın matrikse bağlanması için uyumlu şartları sağlamaktadır. Eupergit C-250 L- etilendiamin- 4-izosiyonatbenzenesülfonamit kimyasal yapısına sahip afinite jelinin kullanımıyla BCA (sığır eritrosit CA) ve hCA I ve hCA II (insan eritrosit CA) izoenzimlerinin her ikisi de direkt olarak hemolizattan, saflaştırılmıştır..Afinite kolonundan, saflaştırılmış CA izoenzimlerinin elüsyonu için çeşitli tampon çözeltiler kullanılmış, en uygun elüsyon çözeltilerinin, BCA ve hCA-II izoenzimleri için; 0.1 M NaCH3COO / 0.5 M NaClO4 (pH 5.6) ve hCA-I izoenzimi için; 1 M NaCl / 25 mM Na2HPO4 (pH 6.3) olarak belirlenmiştir. Saflaştırma dereceleri sırasıyla, BCA, hCA I, hCA II için 181 ve 184 kat olarak elde edilmiştir. Bu yeni afinite jelinin en uygun pH, sıcaklık ve iyonik şiddet değerleri her bir CA izoenzimleri için tesbit edilmiştir. hCA-I, hCA-II ve BCA izoenzimlerinin her biri için uygun koşulları; 150C, pH 8.5, ve 0.3 iyonik şiddeti olarak bulunmuştur.Her bir izoenzimin saflaştırılması, SDS-poliakrilamid jel elektroforezi yardımıyla kontrol edilmiştir.ANAHTAR SÖZCÜKLER: karbonik anhidraz / izoenzim / afinite kromatografi/Eupergit C-250 L
Özet (Çeviri)
Affinity chromatography is a suitable technique which is easily applicable for the rapid purification of a substance from a complex mixture of proteins, according to this advantage of this technique, this present work describes an original affinity gel synthesis was prepared using Eupergit C 250 L derivatized with 4-isocyanatobenzenesulfonamide, an inhibitor of carbonic anhydrase,which is also originally synthesized as well.In this reaction, ethylendiamin was used as a spacer arm for controlling the steric effects between the matrix and ligand. The reactive oxirane groups that Eupergit C-250 L contains, provide the binding of the ligand to the matrix in mild conditions. Both bovine erythrocyte carbonic anhydrase BCA and human erythrocyte carbonic anhydrase I,II (hCA I and hCA II) isozymes have been purified from the hemolysate, directly by using the affinity gel, which has a chemical structure of Eupergit C-250L-ethylendiamin-4-isocyanatobenzenesulfonamide.Different solution buffers were used for obtaining the purified CA isozymes from the affinity column. And 0.1 M NaCH3COO / 0.5 M NaClO4 (pH 5.6) for BCA and hCA-II isozymes and 1 M NaCl / 25 mM Na2HPO4 (pH 6.3) for hCA-I isozyme were determined as most suitable elution buffers. The greatest purification fold for BCA and hCA I, hCAII have been obtained as 181 and 184 folds, respectively. The optimum pH, temperature and ionic strength values of the new affinity gel have been determined for each isozyme of CA. Maximum binding was achieved at 150C, pH 8,5, and 0.3 ionic strength for both hCA-I, hCA-II and BCA isozymes .The purification of an each isozyme has been controlled by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis.KEY WORDS: carbonic anhydrase / isozymes / affinity chromatography / Eupergit C-250 L
Benzer Tezler
- İnsan eritrosit karbonik anhidraz I ve II izoenzimlerinin saflaştirilmasi için yeni bir afinite jelinin hazirlanmasi ve bazi fenolik asitlerinbu izoenzimler üzerindeki inhibisyon kinetiklerinin incelenmesi
Preparation of a new affinity gel from purification of carbonic anhydrase I and II isoenzymes from human erythrocytes and investigation of the inhibitory kinetics of phenolic acids on the isoenzymes
DERYANUR ERDEM
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
BiyokimyaAtatürk ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖMER İRFAN KÜFREVİOĞLU
YRD. DOÇ. DR. MURAT ŞENTÜRK
- İnsan eritrosit karbonik anhidraz I ve II izoenzimlerinin saflaştırılması için yeni afinite jellerinin hazırlanması ve yeni sentezlenen bazı sülfonamid türevlerinin bu izoenzimler üzerindeki inhibisyon kinetiklerinin incelenmesi
Preparation of new affinity gels from purification of carbonic anhydrase I and II isoenzymes from human erythrocytes and investigation of the inhibitory kinetics of newly sythetized sulfonamide derivatives on the isoenzymes
MURAT ŞENTÜRK
- Karbonik anhidraz I ve II izoenzimlerinin koyun midesinden saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı ilaçların enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi
Purification and characterization of carbonic anhydrase I and II isozymes from sheep stomach, investigation effects of some drugs on the enzyme activity
NAMIK KILINÇ
- İnsan eritrositlerinden saflaştırılan karbonik anhidraz I ve II izoenzimlerinin aktiviteleri üzerine antiülser, glukokortikoid ve ürolojik ilaçların etkilerinin incelenmesi
Investigation of antiulcer, glucocorticoids and urological drugs? effects on activity of carbonic anhydrase I and carbonic anhydrase II purified from human erytrocites
UĞUR GÜLLER
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
BiyokimyaAtatürk ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. Ö. İRFAN KÜFREVİOĞLU
- Karbonik anhidraz II ve IV izoenzimlerinin koyun böbrek dokusundan saflaştırılması karakterizasyonu ve bazı kimyasalların etkilerinin araştırılması
Purification and characterization of carbonic anhydrase isoenzymes II and IV from sheep kidney and investigation of some chemicals? effects on the enzyme activity
RAMAZAN DEMİRDAĞ
Doktora
Türkçe
2012
BiyokimyaAtatürk ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. Ö. İRFAN KÜFREVİOĞLU
YRD. DOÇ. DR. MURAT ŞENTÜRK