Fare embriyonik kök hücre koloni parçalarının açık çekilmiş payet yöntemi ile dondurulması
Freezing of mouse embryonic stem cell colony fragments by open pulled straw method
- Tez No: 247497
- Danışmanlar: PROF. DR. SEMA BİRLER
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2009
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Fare embriyonik kök hücre hatları; terapötik amaçlı, insan hastalık modeli fare oluşturulması, kimyasal maddelerin toksik etkilerinin ve hücre içi sinyal mekanizmalarının araştırılması çalışmalarında kullanılmaktadır. Fare embriyonik kök hücreleri yavaş dondurma veya vitrifikasyon yöntemleri ile dondurulduğunda sırasıyla kristal oluşumu veya yüksek kriyoprotektan maddelerin toksik etkileri nedeniyle hasara uğramaktadır. Bu nedenle hücrelerin pluripotent yapısını ve canlılık oranını koruyan dondurma yöntemlerinin geliştirilmesine ihtiyaç vardır. Çalışmamızda, fare embriyonik kök hücre hatlarının saklanabilmesi için güvenilir ve kolay uygulanabilir bir dondurma yönteminin geliştirilmesi amaçlanmıştır. ?Açık Çekilmiş Payet? tekniği kullanılarak; 50 mM Taurin içeren veya Taurin içermeyen vitrifikasyon medyumu (%20 DMSO, %20 EG ve 0,5 M Trehaloz) ile embriyonik kök hücreler dondurulmuş, eritme sonrası sırasıyla %53,9 ve %55,6 canlılık oranı elde edilmiştir. Eritilen koloniler toplam altı pasaj ilerletildikten sonra embriyonik kök hücre belirteci olan Oct-4 ve Nanog transkripisyon faktörlerini eksprese ettiği ve 40-XY kromozomal yapıya sahip olduğu gösterilmiştir. Antioksidan etkili Taurin maddesinin hücrelerin eritme sonrası canlılık oranları ve transkripsiyon faktörlerinin salgısı üzerine etkili olmadığı bulunmuştur. Sadece DMSO ve EG oranları yarıya düşürülerek (%10 DMSO, %10 EG ve 0,5 M Trehaloz) vitrifikasyon yapılan gruplarda ise, eritme sonrası sırasıyla %28,45 ve %34,55 canlılık oranına ulaşılmasına karşın hücreler ilk pasaj sonrası canlılığını kaybetmiştir.Sunulan çalışmada fare embriyonik kök hücreleri yüksek oranda kriyoprotektan (%20 DMSO, %20 EG) içeren medyum içerisinde, açık çekilmiş payet yöntemiyle dondurularak başarıyla saklanabilmiştir.
Özet (Çeviri)
Mouse embryonic stem cell lines; can be used in studies for therapeutic purposes, to form human disease model mice, to investigate the toxic effects of chemicals and intra cellular signal mechanisms. Mouse embryonic stem cells can be deteriorated during freezing or vitrification as a result of crystal formation and high toxicity of cryoprotectans. It is necessary to develop new freezing methods keeping the pluripotent structure and survival rate of cells. In our study it was aimed to develop a reliable and appliable freezing method to store mouse embryonic stem cell lines.Embryonic stem cells were frozen by using ?Open Pulled Straw? method in vitrification medium (20% DMSO, 20% EG and 0,5 M trehalose) with or without 50 mM taurin. Post-thaw vitality rate was 53,9% and 55,6%, respectively. Thawed colonies were passaged 6 times and Oct-4 and Nanog transcription factors were shown to express and have 40-XY chromosomal structure. Taurin had no effect on post-thaw survival rate and secretion of transcription factors of cells. Only by halving DMSO and EG amounts (10% DMSO, 10% EG and 0,5 M trehalose), 28,45% and 34,55% post-thaw survival rates were reached in vitrification groups respectively. However, cells lost their vitality after the first passage.In conclusion, mouse stem cells could be frozen and stored successfully in high cryoprotectant (20% DMSO, 20% EG) bearing medium by open pulled straw method.
Benzer Tezler
- Bağırsak hasar modellerinde kemik iliği mezenkimal kök hücre ve bağırsak mezenkimal kök hücrelerin rejeneratif ve immün modülatuvar etkilerinin karşılaştırılması
Comparison of regenerative and immune modulatory effecets of bone marrow and intestinal mesenchymal stem cells i intestinal damage models
BURCU PERVİN
Doktora
İngilizce
2025
BiyolojiHacettepe ÜniversitesiKök Hücre Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FATİMA AERTS KAYA
- Fare embriyonik kök hücrelerinin NWPF disklerde üretilmesi ve kültürasyonu
Cultivation of mause embryonic stemn cells on NWPF discs
GAYE ÇETİNKAYA
- Investigation of NFİB function and regulation of its putative target genes in human neural stem cell and SH-SY5Y neuroblastoma cell lines
İnsan sinir kök hücre ve SH-SY5Y nöroblastom hücre hatlarında NFIB işlevinin ve potansiyel hedef genlerinin regülasyonunun incelenmesi
BETÜL ULUCA
Doktora
İngilizce
2023
Genetikİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
DR. ÖĞR. ÜYESİ ASLI KUMBASAR
- Raphanus sativus toprak altı kök kısımlarından elde edilen özütün in vitro sitogenetik etkileri
In vitro cytogenetic effects of extract from Raphanus sativus roottuber
SEVGİ TEKREÇ
- Fare kuyruğunda oluşturulan sekonder lenfödem modelinde embriyonik kök hücre ve kemik iliği mezenkimal kök hücrelerinin lenfanjiyogenez üzerine etkisi
Embryoni̇c stem cells and bone marrow-deri̇ved mesenchymal stem cells effect of lymphangi̇ogenesi̇s on the created secondary lymphedema mi̇ce model
HASAN GÜÇ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2014
Plastik ve Rekonstrüktif CerrahiDokuz Eylül ÜniversitesiCerrahi Tıp Bilimleri Bölümü
DOÇ. DR. CENK DEMİRDÖVER