Katalazın çapraz bağlı enzim agregatlarını (CLEA) oluşturma yöntemiyle immobilizasyonu ve karakterizasyonu
Preparation of cross-linked enzyme aggregates (CLEA) of catalase and its characterization
- Tez No: 266200
- Danışmanlar: PROF. DR. S. SEYHAN TÜKEL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: İmmobilizasyon, Çapraz Bağlı Enzim Agregatları, Katalaz, Glutaraldehit, Immobilization, Cross-linked enzyme aggregates, Catalase, Glutaraldehyde
- Yıl: 2010
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Çukurova Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 76
Özet
Bu çalışmada sığır karaciğer katalazı, amonyum sülfatla çöktürme ve glutaraldehitle çapraz bağlama yoluyla çapraz bağlı katalaz agregatları (CLEA-CAT) oluşturularak immobilize edilmiştir. En yüksek CLEA-CAT aktivitesinin görüldüğü; amonyum sülfat derişimi % 70 (w/v) glutaraldehit derişimi 140 mM, immobilizasyon pH'sı 7,0, immobilizasyon süresi 6 saat olarak belirlenmiştir. CLEA-CAT örneklerinin hazırlanmasında ortamdaki enzim+protein miktarının CLEA-CAT aktivitesi üzerine etkisinin incelenmesi sonucunda, en yüksek aktivite 10 mg/ml CAT + 10 mg/ ml sığır serum albumini (BSA) kullanılarak hazırlanan CLEA-CAT' dan elde edilmiştir. CLEA-CAT örneklerinin termal kararlılıkları, depolama kararlılıkları ve kesikli reaktörde kullanımları araştırılmıştır. Ayrıca, CLEA-CAT örneklerinin taramalı elektron mikroskobunda görüntüleri incelenmiştir.Serbest katalazın ve CLEA-CAT örneklerinin maksimum aktivite gösterdiği pH, tampon derişimi, sıcaklık gibi koşullar serbest katalaz ve CLEA-CAT için sırasıyla, 7,5, 50 mM, 25°C ve 7,5, 75 mM, 35°C olarak belirlenmiştir. Belirlenen optimum koşullarda serbest katalaz için Km, Vmax, kcat ve kcat/Km değerleri sırasıyla, 50 mM, 1,98x104 U/mg prot., 7,92x104 s-1 ve 1,58x106 s-1M-1, CLEA-CAT için ise sırasıyla, Km = 43 mM H2O2, Vmax=2,0x103 U/g CLEA-CAT olarak hesaplanmıştır. 50ºC' de 15 saat inkübe edilen CLEA-CAT' ın başlangıç aktivitesinin % 30' unu, serbest katalazın ise aynı koşullarda başlangıç aktivitesinin % 4' ünü koruduğu belirlenmiştir. Serbest katalaz 5°C' de 19 gün saklandığında başlangıç aktivitesinin % 11' ini korurken, CLEA-CAT örnekleri 5°C' de yaklaşık iki ay sonunda başlangıç aktivitesinin % 10' unu koruyabildiği belirlenmiştir. CLEA-CAT örneklerinin kesikli reaktörde 32 kullanım sonunda başlangıç aktivitesinin % 29'unu koruyabildiği saptanmıştır.Yapılan çalışma sonucunda CLEA-CAT' ın termal ve depolama kararlılıklarının serbest enzimden daha yüksek olduğu ve ekstrem koşullarda daha uzun süre kullanılabileceği gösterilmiştir.
Özet (Çeviri)
In this study, bovine liver catalase was immobilized as cross-linked catalase aggregates (CLEA-CAT) via precipitation with ammonium sulfate and cross-linking with glutaraldehyde. CLEA-CAT with the highest activity was obtained for the immobilization conditions as ammonium sulfate concentration % 70 (w/v), glutaraldehyde concentration 140 mM, pH 7.0 and immobilization duration 6 hours. The highest activity was obtained from CLEA-CAT prepared with 10 mg/ml CAT + 10 mg/ml Bovine serum albumin (BSA). The thermal stabilities, storage stabilities and usage in a batch type reactor of CLEA-CAT preparations were determined. Also, the images of CLEA-CAT preparations were investigated at scanning electron microscope.The conditions as pH, buffer concentration, temperature in which free catalase and CLEA-CAT preparations showed their maximum activities were determined as 7.5, 50 mM, 25°C for the free CAT and 7.5, 75 mM, 35°C for the CLEA-CAT, respectively. For free catalase at optimum defined conditions, Km, Vmax, kcat and kcat/Km values were calculated as 50 mM, 1.98x104 U/mg prot., 7.92x104 s-1 and 1.58x106 s-1M-1 and Km and Vmax values of CLEA-CAT were calculated as 43 mM and 2.0x103 U/g CLEA-CAT, respectively. It was determined that CLEA-CAT saved 30 % of its initial activity for 15 hours preincubation at 50ºC. However, free catalase saved 4 % of its initial activity at the same conditions. Free catalase was stored for 19 days at 5°C and saved 11 % of its initial activity, CLEA-CAT was stored for 2 months at 5°C and saved 10 % of its initial activity. CLEA-CAT preparations saved 29 % of their initial activities in a batch type reactor at the end of 32 usages.As a result of study, it was concluded that CLEA-CAT?s thermal and storage stabilities were higher than that of free catalase and CLEA-CAT can be used for longer at extreme conditions.
Benzer Tezler
- Determination of phenolics concentration using crosslinked phenol oxidase aggregates
Çapraz bağlanmış fenol oksidaz çökeltileriyle fenolik konsantrasyon ölçümü
BEDRİYE DURHAN ERTÜRK
Yüksek Lisans
İngilizce
2008
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiKimya Mühendisliği Bölümü
PROF. DR. UFUK BAKIR
- Tekstil atık suyunda hidrojen peroksidin enzimatik giderimi, modellenmesi ve tasarımı
Enzymatic removal of hydrogen peroxide in textile waste water, modelling and designing
GÜLÇİN ÖZEVCİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2012
BiyoteknolojiMuğla ÜniversitesiÇevre Bilimleri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAKAN AYHAN
YRD. DOÇ. DR. OĞUZ AKPOLAT
- POLYHIPE SUPPORTED SORBENT FOR SELECTIVE MERCURY REMOVAL FROM AQUEOUS SOLUTIONS
SULU ÇÖZELTİLERDEN SEÇİCİ CİVA GİDERİMİ İÇİN POLYHIPE DESTEKLİ SORBENT
HİLAL BÜLBÜL ÖNGÜL
Yüksek Lisans
İngilizce
2019
Polimer Bilim ve Teknolojisiİstanbul Teknik ÜniversitesiPolimer Bilim ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ERDEM YAVUZ
- Pankreatik lipaz enziminin kompozit taşıyıcılarda immobilizasyonu ve karakterizasyonu
Immobilization and characterization of pancreatic lipase enzyme on composite carriers
DİLEK GÜNAL
- ELISA sistemleri için yeni bir alternatif teknoloji: Tekrar kullanılabilir afinite kuyucuklar
A new alternative technology for ELISA: Reusable affinity wells
ŞEYDA BASKINCI
Yüksek Lisans
Türkçe
2012
BiyoteknolojiAnadolu Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
PROF. DR. RIDVAN SAY