Glutatyon redüktaz enziminin hindi karaciğerinden saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of glutathione reductase enzyme from Turkey liver
- Tez No: 269312
- Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET ÇİFTCİ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2010
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 86
Özet
Glutatyon redüktaz (Glutatyon: NADP+, oksidoredüktaz, E.C 1.8.1.7.; GR) enzimi hindi karaciğerinden saflaştırıldı. Saflaştırma işlemi homojenatın hazırlanması ve 2',5'-ADP Sepharose 4B afinite kromatografisi olmak üzere 2 basamakta gerçekleştirildi. 606,67 EÜ/mg protein spesifik aktivitesine sahip olan GR enzimi %10,75 verimle, 2476 kat saflaştırıldı. Enzim aktivitesi spektrofotometrik olarak 340 nm'de Beutler metoduna göre ölçüldü. Enzimin mol kütlesi jel filtrasyon kromatografisi ile 131 kDa, alt biriminin mol kütlesi ise SDS-PAGE ile 65 kDa olarak bulundu. Enzim için optimum pH, optimum iyonik şiddet, optimum sıcaklık, stabil pH, sırasıyla 7,5, 100 mM, 8,5, 40ºC olarak bulundu. Ayrıca NADPH için KM değeri 0,170 mM ve Vmax değeri 0,55 EÜ/ml olarak; GSSG için ise, KM değeri 0,03 mM ve Vmax değeri 0,228 EÜ/ml olarak tespit edildi. Buna ilaveten hindi karaciğeri GR enzimi üzerine NADP+ ve GSH `ın inhibisyon etkileri incelendi. NADP+ ve GSH için Lineweaver-Burk grafikleri yardımıyla Ki sabitleri sırasıyla 0,37±0,055 ve 29,08±14,9 mM olarak bulundu.
Özet (Çeviri)
Glutathione reductase (Glutathione: NADP+ oxidoreductase, E.C 1.8.1.7; GR) was purified from turkey liver. The purification consisted of two steps, preparation of homogenate, and 2',5'-ADP Sepharose 4B afinity chromatography. GR enzyme was obtained having a specific activity of 606,67 EU/ml proteins, with a yield 10,75% and 2476,2 fold. Enzymatic activity was spectrofotometrically measured according to Beutler method at 340 nm. Molecular weight of enzyme was determined by gelfiltration chromatography as 131 kDa and molecular weight of subunits were determined by SDS-PAGE as 65 kDa. Optimal pH, optimal ionic intensity, stable pH, optimal temperature were determined as 7,5,100 mM, 8,5, 40°C respectively. Also KM and Vmax values were determined for NADPH as 0,170 mM and 0,55 EÜ/ml; and for GSSG substrates 0,03 mM and 0,228 EÜ/ml respectively. In addition, Ki values were determined by means of Lineweaver-Burk graphs obtained as 0,37±0,05 and 29,08±14,93 mM, NADP+ and GSH respectively.
Benzer Tezler
- Glutatyon redüktaz enziminin sıçan böbreğinden saflaştırılması, substrat ve inhibitör kinetiğinin incelenmesi
Purification of glutathione reductase from rat kidney and investigation of substrate and inhibitor kinetics
BETÜL CAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2010
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NAZMİ ÖZER
ÖĞR. GÖR. GÜLNİHAL KULAKSIZ ERKMEN
- Glutatyon redüktaz enziminin koyun kalp dokusundan saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of glutathione reductase enzyme from sheep heart tissue
CANSU BULAK
- Glutatyon redüktaz enziminin koyun dalak dokusundan saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı antibiyotiklerin enzim aktivitesi üzerine etkilerinin araştırılması
Purification, characterization of glutathion reductase enzyme from sheep splen tissue and investigation of the effects of some chemical substances on enzyme activity
ÇİĞDEM ÇOBAN
- Glutatyon redüktaz enziminin insan eritrositlerinden saflaştırılması ve bazı ilaçların enzim aktivitesi üzerine etkilerinin araştırılması
Purification of human erythrocytes glutathione reductase, investigation effect of some drugs on this enzyme
MURAT ŞENTÜRK
Yüksek Lisans
Türkçe
2006
KimyaAtatürk ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖMER İRFAN KÜFREVİOĞLU
- Purification and characterization of glutathione reductase from japanese quail (Coturnix coturnix Japonica) liver
Glutatyon redüktaz enziminin bıldırcın (Coturnix coturnix Japonica) karaciğerinden saflaştırılması ve karakterizasyonu
SARKAT SALIM MOHAMMED TAHER MOHAMMED TAHER
