Anoxybacillus sp. Pdf1 lipaz geninin klonlanması, ekspresyonu ve karakterizasyonu
Cloning, expression and characterisation of lipase from Anoxybacillus sp. Pdf1
- Tez No: 270664
- Danışmanlar: PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Ekspresyon, Lipazlar, Expression, Lipases
- Yıl: 2010
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Lipazlar (triaçilgliserol hidrolazlar; EC.3.1.1.3) lipid-su arayüzeyinde trigliseritlerin hidrolizini katalizleyen enzimlerdir. Mikrobiyal lipazlar, deterjan, transesterifikasyon ve kiral bileşiklerin sentezlenmesi açısından endüstriyel açıdan oldukça ilgi çekmektedirler. Termofilik mikroorganizmaların lipazları sıcaklık ve kimyasal denatürasyona karşı dirençli olduklarından dolayı endüstiyel süreçlerde önemli rolleri vardır.Bu çalışma Anoxybacillus sp. PDF1 lipaz geninin klonlanmasını, gen ürününün izolasyonunu ve karakterizasyonunu konu almaktadır. PDF1 lipazını kodlayan 740 nt` lik genin baz dizilimi belirlenerek pET28a+ vektörüne klonlandı. Geni içeren vektör, E.coli BL21 hücresine aktarılarak lipaz ekspres edildi ve saflaştırıldı. Saflaştırılan lipazın maksimum aktivitesi 60ºC pH 8'de incelendi. p-nitrofenil butirat için olan 0,348 mM Km değeri ile diğer birçok lipaz enzimlerine göre daha düşük bir Km değerine sahip olduğu belirlendi. Mg+2, Li, Ca+2, K, Zn+2, ve Co+2 metal iyonlarının etkisi incelendi. PDF1 lipazının moleküler ağırlığı 28 kDa olarak tespit edildi. Elde edilen veriler ışığında, enzimin biyokimyasal özellikleri, enzimin önemli bir endüstriyel enzim olabileceğini göstermektedir.
Özet (Çeviri)
Lipases (triacylglycerol acylhydrolases; EC.3.1.1.3) catalyze the hydrolysis of triglycerides at the oil-water interface. Microbial lipases have currently received considerable attention with regard to biotechnological applications for detergents, transesterification and chiral compound synthesis. In particular, lipases from thermophiles are expected to play a significant role in industrial processes, since they are thermostable and resistant to chemical denaturation.This work describes the cloning, isolation, and characterization of lipase from Anoxybacillus sp. PDF1. A 740 nt lipase gene coding for lipase from Anoxybacillus sp. PDF1 sequenced and cloned into pET28a+ vector. Vector encoding this gene was transformed into E.coli BL21, expressed and purified. The purified lipase showed optimal activity at 60°C in pH 8. It was determined that the enzyme had a lower Km (0,348 mM) for paranitrophenylbutyrate than most of the lipases. Metal ion effects to lipase were observed with cloride salts of Mg+2, Li, Ca+2, K, Zn+2, ve Co+metal ions. The molecular mass of the lipase was determined to be 24 kDa on SDS-PAGE. In the light of all data it has been suggested that the enzyme?s biocatalytic properties proved to be one of the important industrial enzymes.
Benzer Tezler
- Anoxybacillus gonensis'ten ısılkararlı bir alfa-amilazın karakterizasyonu
Characterization of a thermostable alpha-amylase from Anoxybacillus gonensis
İBRAHİM OMAROV
Yüksek Lisans
Türkçe
2003
KimyaKaradeniz Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SAADETTİN GÜNER
- Yeni bir termofilik bakterinin, Anoxybacillus gonensis, polihidroksibutirat parçalama yeteneğinin incelenmesi
Investigation of polyhydroxybutyrate degradation capabilities of a novel bacterium, Anoxybacillus gonensis
DENİZ ŞİŞİK
Yüksek Lisans
Türkçe
2003
KimyaKaradeniz Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SADETTİN GÜNER
- Gönen, Kestanbol ve Diyadin kaplıcalarından termofilik bakterilerin izolasyonu, moleküler yöntemlerle karakterizasyonu ve tanımlanması
Isolation, characterization with molecular methods and description of thermophilic bacteria from Çönen, Kestanbol and Diyadin hot springs
SABRİYE ÇANAKÇI DÜLGER
Doktora
Türkçe
2003
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ
- Termofilik Anoxybacillus genensis G2 suşunun fruktoz-1,6-bisfosfat aldolaz geninin klonlanması, ekspresyonu ve karakterizasyonu
Cloning, expression and characterization of the fructose-1,6-bisphosphate aldolase gene from thermophilic Anoxybacillus genensis G2 strain
NAGİHAN SAĞLAM ERTUNGA
- Anoxybacillus gonensis D-glukoz (D-ksiloz) izomeraz geninin klonlanması, izolasyonu ve karakterizasyonu
Cloning, isolation and characterization of D-glucose (D-Xylose) isomerase gene from Anoxybacillus gonensis
HAKAN KARAOĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2004
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. ALİ OSMAN BELDÜZ
- Bazı termofolik bakterilerdeki katalaz aktivitesinin incelenmesi
Investigation of catalase activities from some thermophilic bacteria
BARBAROS DİNÇER