Isolation and identification of lipase producing soil fungus; Cloning, sequencing and partial characterization of its lipase
Lipaz üreten toprak kaynaklı küfün izolasyonu ve tanımlanması; Lipazın klonlanması, sekans analizinin yapılması ve kısmi karakterizasyonu
- Tez No: 276957
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. ALPER ARSLANOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2010
- Dil: İngilizce
- Üniversite: İzmir Yüksek Teknoloji Enstitüsü
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 56
Özet
Lipazlar, uzun zincirli trigliseridlerin hidrolizini katalizleyen iyi bilinen enzimlerdir. Diğer birçok enzime kıyasla, susuz ortamlarda dikkat çekici seviyelerde aktivite ve stabilite ve geniş bir substrat özgünlüğü gösterir. Bu nedenle, deterjan endüstrisi, kağıt ve gıda teknolojisinde ve organik ara ürünlerin sentezi için biyokatalistler olarak birçok endüstriyel uygulamada büyük bir potansiyele sahiptirler. Lipazlar hayvanlardan, bitkilerden ve aynı şekilde mikroorganizmalardan oldukça iyi miktarlarda elde edilebilir.Bu tezin amacı, lipaz üreten küfün izolasonu ve tanımlanması ve lipaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonudur. Bu amaçla, lipaz üreten bir küf Kula'dan toplanan toprak örneğinden izole edilmiştir. Bu küfün lipaz aktivitesi Rhodamin B ? zeytinyağı petri metodu ile hızlı bir şekilde belirlenmiştir. Lipolitik küf, 28S rRNA gen sekans analizi ile tanımlanmış ve Rhizopus stolonifer türünün bir straini olduğu belirlenmiştir. Bu lipolitik küf Kula dan toplanan toprak örneğinden izole edildiği için R. stolonifer K45 olarak adlandırılmıştır. En iyi 25°C'de büyüme göstermiş 35°C' nin üzerindeki sıcaklıklarda büyüme gözlenmemiştir. Çalışmanın ikinci kısmında, lipaz enzimi küften kısmen izole edilmiştir fakat bunun öncesinde, lipaz enziminin üretilmesi için optimum inkübasyon zamanı ve karbon kaynağı belirlenmiştir. Buna göre, optimum lipaz üretimi büyümenin 7. gününde ve karbon kaynağı olarak sadece olive oil içeren minimal besiyerinde gerçekleşmiştir. Büyüme ortamında glukoz bulunduğunda ise üretilen lipaz miktarının azaldığı görülmüştür. Lipazın saflaştırılması için aseton presipitasyonu (30%) ve ultrafiltrasyon metodları kullanılmıştır. Lipaz aktivite testi spektrofotometrik olarak gerçekleştirilmiştir. Lipazın substrat özgünlüğü belirlenmiş ve en yüksek aktiviteyi p-NP laurat için gösterdiği izlenmiştir. Aynı zamanda farklı sıcaklık ve pH değerlerinin lipaz aktivitesi üzerine etkisi analiz edilmiş ve optimum sıcaklık ve pH sırasıyla 45°C ve pH 8 olarak bulunmuştur. Bundan başka, farklı organik çözücüler ve metal iyonlarının lipaz aktivitesi üzerine etkileri test edilmiştir. Lipazın n-hexan ile inhibe edildiği görülmüştür. Bunun aksine, metanol ve DMSO nun ise lipaz aktivitesini arttırdığı tespit edilmiştir.
Özet (Çeviri)
Lipases are well known enzymes which catalyze the hydrolysis of long chain triglycerides. Contrary to many other enzymes, lipases show a wide range of substrate specificity and remarkable levels of activity and stability in non-aqueous environments. Therefore, they have a great potential in many industrial applications such as detergent industry, paper and food technology, as biocatalysts for the synthesis of organic intermediates. Lipases can be obtained from animals, plants as well as from natural and recombinant microorganisms in good yields.The aim of this thesis was isolation and identification of a lipolytic fungus and purification and characterization of its lipase enzyme. For this purpose, a lipolytic fungus was isolated from soil sample collected from Kula. Lipase activity of this fungus was detected rapidly by Rhodamin B - olive oil plate assay. The lipolytic fungus was identified by 28S rRNA gene sequence analysis and determined to be a strain of Rhizopus stolonifer. Because this lypolytic fungus was isolated from soil sample collected from Kula, it was named as R. stolonifer K45. This fungus showed best growth at 25°C and did not grow above 35°C. In the second part of the study, lipase enzyme of the fungus was partially purified but previously, optimum time and carbon source for lipase production was determined. According to this, optimum lipase production was obtained at 7th day of growth in the media including only olive oil as carbon source. Glucose when included in the growth media was observed to reduce the amount of lipase. In order to purify fungal lipase, aceton precipitation (30 %) and ultrafiltration methods were used. Lipase activity assay was performed spectrophotometrically. The chain length specificity of this lipase was detected and highest activity was observed towards p-NP laurate. The effect of different temperature and pH values on lipase activity and stability was also determined and optimum temperature and pH were found 45°C and pH 8, respectively. Furhermore, different organic solvents and metal ions were tested on lipase activity. The lypolytic enzyme was inhibited by n-hexane. However, methanol and DMSO were detected to enhance the lipase activity.
Benzer Tezler
- Isolation and identification of a lipase producing psychrotrophic bacteria from soil: Cloning and partial characterization of its lipase
Lipaz üreten psikrotrof bir bakterinin toprakdan izolasyonu ve tanimlanmasi: Lipazin klonlanmasi ve kismi karakterizasyonu
AYSUN ADAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2009
Biyolojiİzmir Yüksek Teknoloji EnstitüsüMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ALPER ARSLANOĞLU
YRD. DOÇ. DR. H.ÇAĞLAR KARAKAYA
- Organik çözücülere dirençli lipaz üreten bakterilerin topraktan izolasyonu ve enzimin karakterizasyonu
Isolation of organic solvents tolerant lipase producing microorganisms from soil and characterizaton of the enzyme
KADRİYE KOÇOĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiBiyoloji Bölümü
YRD. DOÇ. SERDAR ÜLKER
- Isolation and molecular characterization of extracellular lipase and pectinase producing bacteria from olive oil mills
Zeytinyağı işleyen fabrikalardan ekstraselüler lipaz ve pektinaz üreten bakterilerin izolasyonu ve moleküler karakterizasyonu
ASENA ALTAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2004
Biyomühendislikİzmir Yüksek Teknoloji EnstitüsüBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Y.DOÇ.DR. ALİ FAZIL YENİDÜNYA
- Lipaz üreticisi yerel Bacillus soylarının izolasyonu, nitelendirilmesi ve gen kütüphanelerinin hazırlanması
The isolation and identification of lipase producing local Bacillus strains and the preparation of their genomic library
HÜSEYİN BALCI
Yüksek Lisans
Türkçe
2004
BiyolojiGebze Yüksek Teknoloji EnstitüsüBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. FÜSUN GÜMÜŞEL
- Zeytinyağı üretim atıklarından lipaz üreten bakterilerin izolasyonu ve moleküler tanımlanması
Isolation and molecular identification of lipase producing bacteria from olive oil production wastes
SEDA NUR GELİR
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
BiyoteknolojiAydın Adnan Menderes ÜniversitesiTarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ZEHRA BURCU BAKIR