Termofilik Geobacillus sp. TF17 suşundan esteraz saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of esterase from a thermophilic bacterium, Geobacillus sp. TF17
- Tez No: 285396
- Danışmanlar: PROF. DR. AHMET ÇOLAK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2011
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 63
Özet
Gerçekleştirilen bu çalışmada, termofilik bir bakteri olan Geobacillus sp. TF17 suşundan esteraz enzimi iyon değişim kromatografisi kullanılarak saflaştırıldı ve karakterize edildi. Saf enzim eluatında esteraz varlığı doğal PAGE ile tek bir bant halinde ortaya konuldu. pNPB substratı varlığında, enzimin optimum pH'sı 7,5, optimum sıcaklığı ise, 50 °C olarak belirlendi. Saf enzimin, 4 °C'de pH 4,0-9,0 aralığında 72 saatlik inkübasyon süresi sonunda optimum pH değerindeki aktivitesini tamamen koruduğu gözlendi. Saf enzimin 30-80 °C arasındaki sıcaklıklarda yapılan kararlılık denemelerinde enzimin 70 ve 80 °C'de 4. saat sonunda aktivitesini tamamen kaybettiği, buna karşılık 30, 40 ve optimum sıcaklığı olan 50 °C'de aktivitesini 3. günün sonunda %100 oranında koruduğu tespit edildi. Yapılan kinetik çalışmalar sonucunda, pNPB substratı varlığında hesaplanan Km ve Vmaks değerleri sırasıyla 0,056 mM ve 19,38 U/mg protein olarak belirlendi. Bazı genel organik çözücüler varlığında enzim aktivitesinin davranışları ortaya konulmuş olup, denenen organik çözücülerden izopropanol ve asetonitrilin enzim aktivitesinin %60'dan fazlasını inhibe ettiği görüldü. Ayrıca bazı metal iyonlarının enzim aktivitesini farklı oranlarda etkilediği tespit edildi. Sonuç olarak, Geobacillus sp. TF17 esterazının oldukça pH ve ısıl kararlı olduğu gözlemlenmiş ve ayrıca Km değeri açısından literatürde bilinen esterazlardan bazı üstün özelliklere sahip olduğu, Vmaks değerinin ise literatürle uyumlu olduğu ortaya konmuştur. Elde edilen veriler dikkate alındığında enzimin endüstriyel uygulamalarda kullanılabilecek bir potansiyele sahip olduğu görülmektedir.
Özet (Çeviri)
In this study, an esterase was purified from a thermophilic bacterium, Geobacillus sp. TF17, by using a Q-Sepharose ion exchange column and characterized. The purified enzyme was observed as a single band on native polyacrylamide gel electrophoresis. In the presence of pNPB as a substrate, the optimum temperature and pH of the enzyme were found to be 7.5 and 50 °C, respectively. The purified enzyme was extremely stable, in the range of pH 4.0-9.0, in the optimum pH value after 72 hour incubation at 4°C. When the thermal stability profile of the purified enzyme was analyzed, it was determined that the enzyme was extremely stable in the range of 30-50 °C after 72 h incubation. The Km and Vmax values of the purified enzyme were calculated as 0.056 mM and 19,38 U/mg protein, respectively, from the Lineweaver-Burk plot. The enzyme was inhibited more than about 60% of activity in the presence of some organic solvents such as isopropanol and acetonitrile. Additionally, it was detected that some metal ions affect the enzyme activity at different rates. As a result, Geobacillus sp. TF17 esterase had good pH and thermal stability. In addition this esterase has superior features than known in the literature in terms of Km, the Vmax values were shown to be compatible with the literature. Considering data obtained from this study, purified esterase has advantages for industrial or biotechnological applications in terms of especially its high thermal- and pH-stability.
Benzer Tezler
- Termofilik Geobacillus sp. TF14'ten endüstriyel öneme sahip α-amilazın saflaştırılması, immobilizasyonu ve karakterizasyonu
Purification, immobilisation and characterization of indutrially important α-amylase from a thermophilic bacteria Geobacillus sp. TF14
ŞABAN KESKİN
Doktora
Türkçe
2015
BiyokimyaKaradeniz Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NAGİHAN SAĞLAM ERTUNGA
- Termofilik Geobacillus sp. TF16 suşundan fitaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve doğal bir besin kaynağındaki fitatı parçalama etkinliğinin incelenmesi
Purification and characterization of phytase from Geobacillus sp. TF16 and investigation hydrolysis of soymilk phytate
EMRE DOKUZPARMAK
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
BiyokimyaKaradeniz Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NAGİHAN SAĞLAM ERTUNGA
- Termofilik Geobacillus sp. DF20 suşundan esterazın saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of esterase from a thermophilic bacterium, Geobacillus sp. DF20
ESRA ÖZBEK
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
BiyokimyaKaradeniz Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AHMET ÇOLAK
- Termofilik geobacıllus Sp. TF16'dan ksilanazın klonlanması, ekspresyonu, immobilizasyonu, karakterizasyonu ve endüstriyel uygulamalarının incelenmesi
Cloning, expression, immobilisation, characterization of xylanase from Thermophilic geobacillus Sp. TF16 and investigation of industrial applications
ÜMMÜHAN ÇAKMAK
Doktora
Türkçe
2015
BiyokimyaKaradeniz Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NAGİHAN SAĞLAM ERTUNGA
- Termofilik Geobacillus sp. TF16 suşundan saflaştırılan fitazın farklı destek materyallerine immobilizasyonu, immobilize enzimlerin karakterizasyonu ve doğal bir besin kaynağındaki fitatı parçalama etkinliğinin incelenmesi
Immobilization of phytase purified from a thermophilic Geobacillus sp. TF16 on the different carriyng materials, characterization of immobilized enzymes and investigation of phytate degredation effect of its from a natural nutritional source
YAKUP ŞİRİN
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
BiyokimyaKaradeniz Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NAGİHAN SAĞLAM ERTUNGA