Production, purification and characterization of thermostable protease from alkaliphilic and thermophilic Geobacillus sp.
Alkalifilik ve termofilik Geobacillus sp.?den termal kararlı proteaz enziminin üretilmesi, saflaştırılması ve karakterizasyonu
- Tez No: 299180
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. GÜLŞAH ŞANLI
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2011
- Dil: İngilizce
- Üniversite: İzmir Yüksek Teknoloji Enstitüsü
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 87
Özet
Proteazlar proteinler ve peptitlerdeki peptit bağlarının hidrolizini katalizleyen hidrolaz enzimlerdir. Proseslerde yararlı peptitleri üretmek için proteinleri spesifik bir şekilde kesmede kullanılırlar. Proteazlar büyük çeşitlilik gösteren canlı organizmalarda bulunurlar ve aynı zamanda yeryüzünde farklı fiziksel, fizikokimyasal, biyolojik, kimyasal fonksiyonlara sahiptirler. Dünya enzim skalasının %60'ını oluşturan, endüstrideki en önemli enzimlerdir.İzmir Balçova Jeotermal bölgesinden daha önce izole edilen ve Basillus sp. olarak karakterize edilen mikroorganizmalar deneylerimizde kullanıldı. Bu çalışmanın amacı, alkalifilik ve termofilik Basillus sp.'den protease enzimini üretmek, saflaştırmak ve karakterizasyon basakları ile enzimin özelliklerini belirlemektir. Görüntüleme çalışmaları ve büyüme koşulları incelendiğinde, alkalifilik ve termofilik Basillus sp.'nin ekstraselüler proteaz enzimi ürettiği anlaşılmıştır. Bu ekstraselüler proteaz enzimi amonyum sülfat çökürmesi ve iyon değiştirici kromatografi ile saflaştırılmıştır. Saflaştırma sonrası verim ve saflık katsayısı sırasıyla %33 ve 1.41'dir.Karakterizasyon çalışmalarında, sonuçlar enzimin pH 8.0 ve 55 ºC'de en yüksek aktiviteye sahip olduğunu göstermiştir. Enzim pH 4.0'te aktivitesinin %20'sini ve pH 10.0'da aktivitesinin %20'sini kaybetmiştir. 55 ºC'nin altında proteaz enzimi aktivitesinin %15'ini kaybetmiştir ve aynı zamanda 55 ºC'nin üzerinde proteaz enzimi aktivitesinin %25'ini kaybetmiştir. Proteaz enzimi farklı pH değerlerinde 3 saat ve farklı sıcaklık değerlerinde 6 saat boyunca stabildir. Substratlar kıyaslandığında, kazein daha yüksek aktivite göstermiştir. Organik çözücülerin ve yüzey aktif maddelerin proteaz aktivitesi üzerine etkisi incelenmiştir ve sonuçlar proteaz enziminin %10'luk organik çözücü ve %1'lik yüzey aktif madde varlığında stabil olduğunu göstermiştir. PMSF ve proteaz inhibitör kokteyli protease activitesini düşürmüştür.
Özet (Çeviri)
Proteases are the hydrolase enzymes that catalyze the hydrolysis of the peptide bonds in the primary structure of proteins and peptids. They are used to cleave the proteins specifically to produce useful peptides in the processes. Proteases are present in a wide variety of living organisms and they also show different physicological, physicochemical, biological, chemical functions on the earth. They are the most important enzymes in the industry, accounting for 60% of the total enzyme scales in the world.The microorganisms that were previously isolated and characterized as a Bacillus sp. from Balçova Geotermal region in İzmir were used in the experiments. The aim of this study was to produce the protease enzyme from alkaliphilic and thermophilic Bacillus sp., purify and determine the properties of the enzyme with the characterization steps. When the screening studies and growth conditions were investigated, it was understood that the alkaliphilic and thermophilic Bacillus sp. produced extracellular protease enzyme. This extracellular protease enzyme was purified by ammonium sulphate precipitation and ion exchange chromatography chromatograpy. The yield and purification fold after purification of the enzyme were 33% and 1.41, respectively.In the characterization studies, the results indicated that the protease enzyme had highest activity at pH 8.0 and 55 ºC. The protease enzyme lost 20% of its activity at pH 4.0 and it lost 10% of its activity at pH 10.0. The protease enzyme at temperatures below 55 ºC lost 15% of its activity and also the protease enzyme at temperatures above 55 ºC lost 25% of its activity. The protease enzyme was stable at different pH values during 3 hours and at different temperature values during 6 hours. When compared the substrates, casein showed higher activity. The effect of organic solvents and surfactants on protease activity was investigated and the results indicated that the protease enzyme was stable in the presence of 10% of the organic solvents and 1% of the surfactants. PMSF and the protease inhibitor coctail decrease the activity of the protease.
Benzer Tezler
- Türkiye topraklarından izole edilen Bacillus sp. suşlarından proteaz üretimi, kısmi saflaştırılması ve karakterizasyonu
Protease production, partial purification and characterization from Bacillus sp. isolated from Turkish soil.
NİHAN SEVİNÇ
- Yeni izolat Bacillus subtilis E6-5 suşundan proteaz: Üretim koşullarının optimizasyonu, kısmi saflaştırılması, karakterizasyonu ve deri endüstrisindeki potansiyel uygulamaları
Protease from new isolate Bacillus subtilis E6-5 strain: Optimization of production conditions, partial purification, characterization, potential applications in leather industry
BEHİCE ZEREN
- Expression, purification and characterization of high-fidelity DNA polymerase
Yüksek-duyarlı DNA polimeraz enziminin üretilmesi, saflaştırılması ve karakterizasyonu
KÜBRA TÜRK
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY
- Bacillus mojavensis ve Bacillus vallismortis'ten alfa-amilaz üretimi, saflaştırılması ve karakterizasyonu
Alpha amylase production, purification and characterization of Bacillus mojavensis and Bacillus vallismortis
ADEM KARAKAYA
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
BiyolojiSiirt ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SADİN ÖZDEMİR
YRD. DOÇ. DR. ERDAL ÖĞÜN
- Kitinaz üreten bacillus izolasyonu, enzimin kısmi saflaştırılması ve karakterizasyonu
Isolation of bacillus producing chitinase, partial purification and characterization of enzyme
SEÇİL BERNA KUZU
Yüksek Lisans
Türkçe
2008
BiyolojiÇukurova ÜniversitesiBiyoteknoloji Bölümü
DOÇ. DR. HATİCE KORKMAZ GÜVENMEZ