İnsan serum paraoksonaz enziminin kitosan üzerine immobilizasyonu ve karakterizasyonu
Immobilization of human serum paraoxonase on chitosan and characterization of immobilized paraoxonase
- Tez No: 299343
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. NAHİT GENÇER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2011
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Balıkesir Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 92
Özet
Paraoksonaz enziminin saflaştırılması için hidrofobik etkileşim kromatografisi jeli, CNBr ile aktive edilmiş Sepharose-4B'ye uzantı kolu olarak L-tirozin bağlandıktan sonra ligand olarak hidrofobik bir molekül olan 9-Aminofenantren'in L-tirozine kenetlenmesi reaksiyonu ile sentezlenmiştir.Hidrofobik etkileşim kromatografisi ve amonyum sülfat çöktürmesi yöntemleri ile paraoksonaz enzimi saflaştırılmıştır. Saflaştırılan paraoksonaz enzimi SDS poliakrilamid jel elektroforezine uygulanarak yaklaşık 65 kDa molekül ağırlığına sahip tek bant elde edilmiştir.Saflaştırılan paraoksonaz enzimi hidrofobik taşıyıcı olan Kitosan`na immobilize edilerek immobilize enzimin bağlanma yüzdesi % 68 ve katalatik etkinliği 3,2229 olarak bulunmuştur. Paraoksonaz saf ve immobilize formlarının paraokson substratına karşı Km ve Vmax değerleri Lineweaver-Burk yöntemi ile sırasıyla saf enzim için, 1,067 mM ve 125 U/mldakika olarak immobilize enzim için, 1,755 mM and 181 U/mldakika değerleri elde edilmiştir.Immobilize paraoksonaz enziminin enzimatik davranışları serbest enzim ile karşılaştırılmıştır. Serbest ve immobilize paraoksonaz benzer optimum sıcaklıklar (25-45 ºC) ve pH (7.0) değerleri göstermesine rağmen immobilize paraoksonazın daha uzun süre etki gösterdiği tespit edilmiştir. Ayrıca immobilize enzimin termal inaktivasyonu serbest enzime göre daha yavaş olduğu gözlemlenmiştir.
Özet (Çeviri)
Because of purification of paraoxonase, hydrophobic interaction chromatography gel was synthesized with Sepharose-4B-L-tyrosine and 9-Aminofenantren as a hydrophobic ligand. Sepharose-4B was activated with CNBr and than L-tyrosine was added as an extension arm.Paraoxonase was purified with ammonium sulfate precipitation and hydrophobic interaction chromatography. SDS-polyacyrilamide gel electrophoresis showed a single band with 65 kDa.Purified paraoxonase was immobilized to Chitosan using as hydrophobic carrier and after immobilization, the yield of bound enzyme was found around % 68 and the catalytic efficiency was approximately 3,2229. The Km and Vmax values were determined of soluble and immobilized enzyme by the method of Lineweaver-Burk plots, using paraoxon as a substrate. The Km and Vmax of soluble enzyme was 1,067 mM and 125 U/mlmin. respectively, immobilized enzyme?s Km and Vmax was 1,755 mM and 181 U/mlmin, respectively.The enzymatic properties of immobilized paraoxonase were compared with those of the soluble enzyme. Soluble and immobilized paraoxonase showed similar optimum temperature (25?45 ºC) and pH (7.0) values, but the duration of activitiy of the immobilized paraoxonase was longer. On thermal inactivation of immobilized paraoxonase was slower than the soluble enzyme.
Benzer Tezler
- İnsan PON1 enziminin saflaştırılması, manyetik kitosan nanopartikülleri üzerine immobilize edilmesi, metal hibrit nano yapılarının hazırlanması ve bazı ilaçların enzim sistemleri üzerine etkilerinin in vitro olarak araştırılması
Purification of PON1 enzyme, immobilization of pon1 enzyme on magnetic chitosan nanoparticles, preparation of metal hybrid nano structures and investigation of effects of some drugs on enzyme systems as in vitro
FARZAD GHEBLEH
Doktora
Türkçe
2017
Mühendislik BilimleriAtatürk ÜniversitesiNanobilim ve Nanomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAYRUNNİSA NADAROĞLU
- İnsan serum paraoksonaz enziminin saflaştırılması ve bazı ilaçların enzim aktivitesi üzerine etkilerinin araştırılması
Purification of human serum paraoxonase, investigation of inhibition or activation effect of some drugs on the enzyme
MEHMET MUSTAFA İŞGÖR
- İnsan serum paraoksonaz enziminin saflaştırılarak kinetik özellikleri, endojen substratları ve antioksidan özelliklerinin araştırılması
Purification, determination of kinetic properties, physiological substrates and mechanism of antioxidant actions of human serum paraoxonase
AHMET BAYRAK
- Yeni bir antimikrobiyal tedavi yaklaşımı olarak insan serum paraoksonaz 1 enziminin kullanılması
Newly antimicrobial therapy by using human serum paraoxonase 1
AYNUR AYBEY
- İnsan serum paraoksonaz (PON1) enziminin yeni bir yöntemle saflaştırılması ve bazı antibiyotiklerin enzim üzerindeki etkilerinin araştırılması
The purification of human serum paraoxonase (PON1) by newly method and effects of some antibiotics on this enzyme
SELMA SİNAN