Geri Dön

Salmonella Typhimurium'un MisL ototransporter proteininin in-vitro üretimi ve protein-protein etkileşimlerinin tanımlanması

In-vitro production and identification of protein-protein interactions of MisL autotransporter protein of Salmonella Typhimurium

  1. Tez No: 300822
  2. Yazar: NEFİSE AKKOÇ
  3. Danışmanlar: PROF. DR. MUSTAFA AKÇELİK
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2011
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Ankara Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 129

Özet

MisL ototransporter proteininin in vitro koşullarda üretimi, MarT regülatör proteini yapısal geninin pBADgIII/a vektörüne klonlanması ve doğal Salmonella Typhimurium LT2 suşuna aktarımı yolu ile gerçekleştirildi. Bu transformantta optimum MisL proteini üretiminin gelişme ortamına % 0.02 L-arabinoz ilavesi sonucu gerçekleştiği, ß-galaktozidaz testi (560 Miller ünitesi) ve western lekeleme yöntemi kullanılarak belirlendi. İn vitro koşullarda MisL üretimi gerçekleştiren S. Typhimurium LT2 mutantında yürütülen immüno elektron mikroskopi çalışmaları, bu proteinin hücre yüzeyine salgılandığını ve ekzopolisakkaritlerle ilişkilenerek hücrenin en dışında düzensiz bir tabaka oluşturduğunu gösterdi. MisL geninin pozitif regülatörü olan MarT proteininin ifade edildiği mutantın, doğal suş ile karşılaştırılarak yorumlanan mikrodizin analizleri, bu regülatörün; dps, yliH, wraB, flgK, osmE, manZ, cheM, cheA, motB, fliA; fliC genlerini negatif yönde, aceE, aceFi lpdA, tsf, allC, cydB, wzzB, rplP, rpsC, rplW, rplD, rplC, rmbA, misL, fidL, marT, slsA ve cpxP genlerini ise pozitif yönde regüle ettiği kanıtlandı. İn vitro koşullarda yürütülen bağlanma ve birlikte çöktürme denemeleri sonucunda ise, MisL proteininin fibronektinin heparin-II domainine (hep-II) özgül bir şekilde bağlandığı saptandı.

Özet (Çeviri)

In vitro production of MisL autotransporter protein was performed by clonning functional gene of the MarT regulator protein to pBADgIII/a vector, which was then used to transform wild type Salmonella Typhimurium LT2 strain. The optimum MisL protein production of this transformant was obtained with addition of 0.02 % L-arabinose to the growth medium, monitored by a ß-galactosidase test (560 Miller units) and western blotting analysis. Immunoelectron microscopy experiments, performed with S. Typhimurium LT2 mutants which produce the MisL protein under invitro conditions, showed MisL to be secreted at the bacterial cell surface and forming an irregular layer complexed with exopolysaccarides. Comparative microarray experiments between wild type and mutant strains expressing the marT protein, which is the positive regulator of misL gene, showed that the expression of marT downregulated the dps, yliH, wraB, flgK, osmE, manZ, cheM, cheA, motB, fliA; fliC genes and upregulated the aceE, aceFi lpdA, tsf, allC, cydB, wzzB, rplP, rpsC, rplW, rplD, rplC, rmbA, misL, fidL, marT, slsA and cpxP genes. Results of in vitro adhesion and pull-down experiments showed that there was a specific binding interaction between MisL protein and the Hep-II domain of fibronectin.

Benzer Tezler

  1. Salmonella Typhimurium'un yumurtada raf ömrü boyunca gelişimi

    Growth of Salmonella Typhimurium in chicken egg during the self life

    FATİH UÇAR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    Gıda MühendisliğiAtatürk Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MUSTAFA GÜRSES

  2. Bazı sebzelere inokule edilen Salmonella typhimurium'un limon suyu ve sirke ile inaktivasyonu

    Inactivation of Salmonella typhimurium inoculated to some vegetables by using lemon juice and vinegar

    İLKİN YÜCEL ŞENGÜN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2002

    Gıda MühendisliğiEge Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. MEHMET KARAPINAR

  3. Characterization of a new immune escape mechanism used by Salmonella Typhimurium

    Salmonella Typhımurıum tarafından kullanılan yeni bir immün kaçış mekanizmasının belirlenmesi

    NOURELIMEN HEDFI

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2024

    BiyomühendislikBahçeşehir Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ELİF EREN