Geri Dön

Development of recombinant vaccines composed of PLPE and OMPH from Pasteurella multocida A:3

Pasteurella multocida A:3?e ait PLPE ve OMPH?den oluşan rekombinant aşıların geliştirilmesi

PDF İndir

  1. Tez No: 304959
  2. Yazar: SEZER OKAY
  3. Danışmanlar: PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2011
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Bölümü
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 138

Özet

Pasteurella multocida serotip A:3, sığırlardaki nakil humması hastalığı etmenlerinden biri olan gram-negatif bakteriyel bir patojendir. Bu çalışmada, ompH ve plpE geninin iki parçası (plpEN ve plpEC), P. multocida P-1062 (ATCC 15743, serotip A:3)'ün genomik DNA'sından kopyalanıp plpEN-ompH ve plpEC-ompH füzyonları oluşturuldu. Genlerin in vitro ekspresyonu HEK-293 hücrelerinde gösterildi. Daha sonra, plpE geninin bütünü kopyalandı ve rekombinant proteinler E. coli'de ekspres edilip saflaştırıldı. pCMV-ompH, pCMV-plpEN-ompH ve pCMV-plpEC-ompH olmak üzere 3 DNA aşısı, PlpEN-OmpH, PlpEC-OmpH, OmpH, PlpEC ve PlpE olmak üzere de 5 protein bazlı aşı üretildi. Rekombinant proteinler, alum, CpG, alum-CpG, yağ bazlı ve yağ bazlı-CpG adjuvanlarından en az biriyle formüle edildi. BALB/c fareleri bu aşı formülasyonlarıyla bağışıklandı ve serumları, antikor ve IFN-? düzeylerinin belirlenmesinde kullanıldı. Aşıların koruyuculukları, farelerin 10 LD50 P. multocida A:3'e karşı hayatta kalma deneyi ile değerlendirildi. DNA aşıları, bağışıklık yanıtlarını tetiklemesine rağmen koruyuculuk sağlamadı. Protein aşı formülasyonları antikor düzeyinde artış sağladı ve serum IFN-? titrelerindeki artış CpG içeren formülasyonlarla elde edildi. Alum adjuvanına adsorbe edilmiş 100 µg PlpEC-OmpH proteini %40 koruma sağlarken, PlpEN-OmpH proteiniyle hiç koruma elde edilemedi. Daha sonra, CpG ya da onun alum ve yağ bazlı kombinasyonlarının PlpEC-OmpH üzerine adjuvant etkisi araştırıldı. PlpEC-OmpH ve yağ bazlı-CpG adjuvanıyla hazırlanan aşı formülasyonu %100 koruma sağladı. Son olarak, fareler yağ bazlı-CpG adjuvanıyla formüle edilmiş rekombinant OmpH, PlpEC ve PlpE ile aşılandı. OmpH, PlpEC ve PlpE formülasyonları sırasıyla %50, %60 ve %100 koruma sağladı. Bu bulgular, yağ bazlı-CpG adjuvanıyla formüle edildiğinde rekombinant PlpE ve PlpEC-OmpH füzyon proteininin nakil humması hastalığına karşı hücresiz aşı formülasyonu adayı olduğunu gösterdi.

Özet (Çeviri)

Pasteurella multocida serotype A:3 is a gram-negative bacterial pathogen which is one of the causative agents of shipping fever in cattle. In this study, ompH and two fragments of plpE gene (plpEN and plpEC) were cloned from the genomic DNA of P. multocida P-1062 (ATCC 15743, serotype A:3) and plpEN-ompH and plpEC-ompH fusions were constructed. In vitro expression of the genes was shown in HEK-293 cells. Later, full-length plpE gene was cloned and the recombinant proteins were expressed in E. coli and purified. Three DNA vaccine formulations, namely pCMV-ompH, pCMV-plpEN-ompH and pCMV-plpEC-ompH and five recombinant protein based vaccines, PlpEN-OmpH, PlpEC-OmpH, OmpH, PlpEC and PlpE were generated. Recombinant proteins were formulated with at least one of the adjuvants: alum, CpG, alum-CpG, oil based and oil based-CpG. BALB/c mice were immunized with these vaccine formulations and their sera were used for the evaluation of antibody and serum IFN-? titers. Protective capacities of the vaccines were also evaluated via challenge of mice with 10 LD50 of P. multocida A:3. DNA vaccines induced immune responses, but did not provide protection. All protein vaccine formulations increased antibody levels and CpG containing formulations enhanced serum IFN-? titers. 100 µg of PlpEC-OmpH protein adsorbed on alum adjuvant conferred 40% protection while no protection was obtained with PlpEN-OmpH. Next, the effects of CpG, or its alum and oil based combinations as adjuvants were investigated on PlpEC-OmpH mediated protection. The vaccine formulation composed of PlpEC-OmpH and oil based-CpG adjuvant conferred 100% protection. Finally, the mice were vaccinated with recombinant OmpH, PlpEC and PlpE formulated with oil based-CpG adjuvant. OmpH, PlpEC and PlpE formulations provided 50%, 60% and 100% protection, respectively. These findings implicated that recombinant PlpE and PlpEC-OmpH fusion proteins when formulated with oil based-CpG adjuvant are potent acellular vaccine formulation candidates against shipping fever.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    383304

    Development of recombinant vaccine candidates composed of LtkA from Mannheimia haemolytica A1 and PlpEC-OmpH from Pasteurella multocida A:3 against bovine respiratory disease

    Mannheimia haemolytica A1'e ait LtkA ile Pasteurella multocida A:3'e ait PlpEC ve OmpH'den oluşan rekombinant aşı adaylarının geliştirilmesi

    AYÇA ÇIRÇIR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2014

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ

  2. Tez No

    641121

    Development of an experimental recombinant vaccine formulation composed of LKTA from Mannheimia haemolytica A1 and P31 and LPPB from Histophilus somni 8025 against bovine respiratory disease

    Manheimia haemolitica A1'e ait LKTA ile Histophilus somni 8025'e ait P31 ve LPPB'den oluşan deneysel rekombinant aşı formülasyonlarının geliştirilmesi

    NAZLI HİLAL TÜRKMEN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2020

    MikrobiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ

  3. Tez No

    768932

    Toksoplazmozise karşı rekombinant protein antijenleri içeren yeni bir adjuvant sistemi ile aşı geliştirilmesi

    Development of a vaccine against toxoplasmosis containing recombinant protein antigens incorporated with a new adjuvant system

    SELİN PARMAKSIZ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Eczacılık ve FarmakolojiHacettepe Üniversitesi

    Farmasötik Teknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SEVDA ŞENEL

  4. Tez No

    835549

    Development and effıcacy assessment of two recombınant adenovırus-based vaccıne candıdates agaınst crımean-congo hemorrhagıc fever

    Kirim-kongo kanamali ateşi̇ne karşi iki rekombinant adenovirüs tabanli aşi adayinin geliştirilmesi ve etkinliklerinin değerlendirilmesi

    SHAIKH TERKIS ISLAM PAVEL

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    MikrobiyolojiErciyes Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYKUT ÖZDARENDELİ

  5. Tez No

    482308

    Rekombinant Mycobacterium tuberculosis OmpA proteininin antijenik etkisinin araştırılması

    Investigation of antigenic properties of recombinant OmpA protein from Mycobacterium tuberculosis

    FATİH KARABULUT

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    BiyolojiÇankırı Karatekin Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SEZER OKAY

Geri Dön