Development of recombinant vaccines composed of PLPE and OMPH from Pasteurella multocida A:3
Pasteurella multocida A:3?e ait PLPE ve OMPH?den oluşan rekombinant aşıların geliştirilmesi
- Tez No: 304959
- Danışmanlar: PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Rekombinant DNA teknolojisi, Recombinant DNA technology
- Yıl: 2011
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Bölümü
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Pasteurella multocida serotip A:3, sığırlardaki nakil humması hastalığı etmenlerinden biri olan gram-negatif bakteriyel bir patojendir. Bu çalışmada, ompH ve plpE geninin iki parçası (plpEN ve plpEC), P. multocida P-1062 (ATCC 15743, serotip A:3)'ün genomik DNA'sından kopyalanıp plpEN-ompH ve plpEC-ompH füzyonları oluşturuldu. Genlerin in vitro ekspresyonu HEK-293 hücrelerinde gösterildi. Daha sonra, plpE geninin bütünü kopyalandı ve rekombinant proteinler E. coli'de ekspres edilip saflaştırıldı. pCMV-ompH, pCMV-plpEN-ompH ve pCMV-plpEC-ompH olmak üzere 3 DNA aşısı, PlpEN-OmpH, PlpEC-OmpH, OmpH, PlpEC ve PlpE olmak üzere de 5 protein bazlı aşı üretildi. Rekombinant proteinler, alum, CpG, alum-CpG, yağ bazlı ve yağ bazlı-CpG adjuvanlarından en az biriyle formüle edildi. BALB/c fareleri bu aşı formülasyonlarıyla bağışıklandı ve serumları, antikor ve IFN-? düzeylerinin belirlenmesinde kullanıldı. Aşıların koruyuculukları, farelerin 10 LD50 P. multocida A:3'e karşı hayatta kalma deneyi ile değerlendirildi. DNA aşıları, bağışıklık yanıtlarını tetiklemesine rağmen koruyuculuk sağlamadı. Protein aşı formülasyonları antikor düzeyinde artış sağladı ve serum IFN-? titrelerindeki artış CpG içeren formülasyonlarla elde edildi. Alum adjuvanına adsorbe edilmiş 100 µg PlpEC-OmpH proteini %40 koruma sağlarken, PlpEN-OmpH proteiniyle hiç koruma elde edilemedi. Daha sonra, CpG ya da onun alum ve yağ bazlı kombinasyonlarının PlpEC-OmpH üzerine adjuvant etkisi araştırıldı. PlpEC-OmpH ve yağ bazlı-CpG adjuvanıyla hazırlanan aşı formülasyonu %100 koruma sağladı. Son olarak, fareler yağ bazlı-CpG adjuvanıyla formüle edilmiş rekombinant OmpH, PlpEC ve PlpE ile aşılandı. OmpH, PlpEC ve PlpE formülasyonları sırasıyla %50, %60 ve %100 koruma sağladı. Bu bulgular, yağ bazlı-CpG adjuvanıyla formüle edildiğinde rekombinant PlpE ve PlpEC-OmpH füzyon proteininin nakil humması hastalığına karşı hücresiz aşı formülasyonu adayı olduğunu gösterdi.
Özet (Çeviri)
Pasteurella multocida serotype A:3 is a gram-negative bacterial pathogen which is one of the causative agents of shipping fever in cattle. In this study, ompH and two fragments of plpE gene (plpEN and plpEC) were cloned from the genomic DNA of P. multocida P-1062 (ATCC 15743, serotype A:3) and plpEN-ompH and plpEC-ompH fusions were constructed. In vitro expression of the genes was shown in HEK-293 cells. Later, full-length plpE gene was cloned and the recombinant proteins were expressed in E. coli and purified. Three DNA vaccine formulations, namely pCMV-ompH, pCMV-plpEN-ompH and pCMV-plpEC-ompH and five recombinant protein based vaccines, PlpEN-OmpH, PlpEC-OmpH, OmpH, PlpEC and PlpE were generated. Recombinant proteins were formulated with at least one of the adjuvants: alum, CpG, alum-CpG, oil based and oil based-CpG. BALB/c mice were immunized with these vaccine formulations and their sera were used for the evaluation of antibody and serum IFN-? titers. Protective capacities of the vaccines were also evaluated via challenge of mice with 10 LD50 of P. multocida A:3. DNA vaccines induced immune responses, but did not provide protection. All protein vaccine formulations increased antibody levels and CpG containing formulations enhanced serum IFN-? titers. 100 µg of PlpEC-OmpH protein adsorbed on alum adjuvant conferred 40% protection while no protection was obtained with PlpEN-OmpH. Next, the effects of CpG, or its alum and oil based combinations as adjuvants were investigated on PlpEC-OmpH mediated protection. The vaccine formulation composed of PlpEC-OmpH and oil based-CpG adjuvant conferred 100% protection. Finally, the mice were vaccinated with recombinant OmpH, PlpEC and PlpE formulated with oil based-CpG adjuvant. OmpH, PlpEC and PlpE formulations provided 50%, 60% and 100% protection, respectively. These findings implicated that recombinant PlpE and PlpEC-OmpH fusion proteins when formulated with oil based-CpG adjuvant are potent acellular vaccine formulation candidates against shipping fever.
Benzer Tezler
- Development of recombinant vaccine candidates composed of LtkA from Mannheimia haemolytica A1 and PlpEC-OmpH from Pasteurella multocida A:3 against bovine respiratory disease
Mannheimia haemolytica A1'e ait LtkA ile Pasteurella multocida A:3'e ait PlpEC ve OmpH'den oluşan rekombinant aşı adaylarının geliştirilmesi
AYÇA ÇIRÇIR
Yüksek Lisans
İngilizce
2014
BiyolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ
- Development of a combıned recombınant vaccıne formulatıon composed of mannheımıa haemolytıca- lkta epıtope, hıstophılus somnı – P31 and LppB and pasteurella multocıda - plpEC-OmpH fusıons agaınst bovıne respıratory dısease
Mannheimia haemolytica – lkta-epitopu, histophilus somni - p31 ve LppB ve pasteurella multocida - plpEC-OmpH, füzyonlarini i̇çeren kombi̇ne rekombi̇nant bi̇r aşi formülasyonunun geli̇şti̇ri̇lmesi̇
NURİDE TURAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2025
MikrobiyolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ GÜLAY ÖZCENGİZ
- Development of an experimental recombinant vaccine formulation composed of LKTA from Mannheimia haemolytica A1 and P31 and LPPB from Histophilus somni 8025 against bovine respiratory disease
Manheimia haemolitica A1'e ait LKTA ile Histophilus somni 8025'e ait P31 ve LPPB'den oluşan deneysel rekombinant aşı formülasyonlarının geliştirilmesi
NAZLI HİLAL TÜRKMEN
Yüksek Lisans
İngilizce
2020
MikrobiyolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ
- Çiftlik hayvanları için Chlamydia abortus'ların yerli suşlarından inaktif ve rekombinant temelli aday aşıların geliştirilmesi ve etkinliklerinin araştırılması
Development of inactivated and recombinant based candidate vaccines from indigenous strains of Chlamydia abortus for livestock and investigation of their efficacy
EMİNE EDA TOSLAK
- Development and efficacy assessment of two recombinant adenovirus-based vaccine candidates against crimean-congo hemorrhagic fever
Kırım-kongo kanamalı ateşine karşı iki rekombinant adenovirüs tabanlı aşı adayının geliştirilmesi ve etkinliklerinin değerlendirilmesi
SHAIKH TERKIS ISLAM PAVEL
Doktora
İngilizce
2023
MikrobiyolojiErciyes ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYKUT ÖZDARENDELİ
