Anoxybacillus gonensis g2 çift mutant w137f/v184s ve w137f/v184t ksiloz izomerazlarının saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of w137f/v184s and w137f/v184t double mutant anoxybacillus gonensis g2 xylose isomerase
- Tez No: 315553
- Danışmanlar: PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Anoxybacillus gonensis, D-ksiloz izomeraz, mutasyon, enzim saflaştırması, enzim karakterizasyonu, Anoxybacillus gonensis, D-xylose isomerase, mutation, enzyme purification, characterization
- Yıl: 2012
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 73
Özet
Bu çalışma, Gönen Kaplıcası'ndan izole edilmiş olan termofilik A. gonensis G2 suşuna ait Ksiloz İzomeraz (KI) W137F/V184S ve KI W137F/V184T çift mutasyonlu enzimlerin saflaştırılmasını ve karakterizasyonunu kapsamaktadır. KI W137F/V184S için; Km= 91,13 ± 10,54 mM; Vmax= 31,71 ± 1,1 µmol/dk/mg protein; Kcat/Km = 1,161 olarak bulundu. KI W137F/V184T için ise; Km= 25,94 ± 3,73 mM; Vmax=7,66 ± 0,37 µmol/dk/mg protein; Kcat/Km = 0,985 olarak hesaplandı. KI W137F/V184S ve KI W137F/V184T için optimum sıcaklık 85°C, optimum pH 7,5 olarak belirlendi. KI W137F/V184S 70°C'de yarım saatten sonra aktivitesini hızlı bir şekilde kaybetmiştir. KI W137F/V184T ise aktivitesinin yarısını 80°C'de yarım saatte kaybetmiştir. KI W137F/V184S'nin en iyi pH 8'de kararlı kaldığı, KI W137F/V184T'nin ise, yüksek pH değerlerinde (pH 8 - 9,5) kararlı kaldığı görüldü. KI W137F/V184S'nin en yüksek aktivitesi 10 mM Mg+2 varlığında gözlendi. KI W137F/V184T'nin ise, en yüksek aktivitesi 10 mM Mn+2 varlığında gözlendi. Ca+2, Hg+2, Ni+2, Zn+2, Fe+2 ve Cu+2 bivalent metal iyonlarının her iki mutant KI üzerinde inhibitör etki gösterdiği belirlendi.
Özet (Çeviri)
This study includes purification and characterization of Xylose Isomerase (XI) of Anoxybacillus gonensis G2 with double mutations (W137F/V184S and W137F/V184T). For XI W137F/V184S, Km, Vmax and Kcat/Km values were calculated as Km= 91,13 ± 10,54 mM; Vmax= 31,71 ± 1,1 µmol/dk/mg protein; Kcat/Km = 1,161. Also for XI W137F/V184T, Km, Vmax and Kcat/Km values were calculated as Km= 25,94 ± 3,73 mM; Vmax=7,66 ± 0,37 µmol/dk/mg protein; Kcat/Km = 0,985. The optimum temprature and optimum pH for both mutant XI were determined as 85°C and pH 7,5 respectively. At 70°C, after 30 minutes XI W137F/V184S lost its activity rapidly. At 80°C, after 30 minutes XI W137F/V184T lost half of its activity. XI W137F/V184S was stable at pH 8, while XI W137F/V184T was stable at alkaline pH values. The maximum activity of XI W137F/V184S and XI W137F/V184T were observed in presence of 10 mM Mg+2 and 10 mM Mn+2 respectively. Ca+2, Hg+2, Ni+2, Zn+2, Fe+2 and Cu+2 were determined as inhibitors for activities of XI W137F/V184S and XI W137F/V184T.
Benzer Tezler
- Anoxybacillus gonensis G2 bakterisinin alüminyuma dirençlilik geninin belirlenmesi, ekspresyonu ve karakterizasyonu
Cloning, expression and characterization of the aluminium resistance gene of Anoxybacillus gonensis G2
FATİH ŞABAN BERİŞ
Doktora
Türkçe
2006
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ
- Termofilik Anoxybacillus genensis G2 suşunun fruktoz-1,6-bisfosfat aldolaz geninin klonlanması, ekspresyonu ve karakterizasyonu
Cloning, expression and characterization of the fructose-1,6-bisphosphate aldolase gene from thermophilic Anoxybacillus genensis G2 strain
NAGİHAN SAĞLAM ERTUNGA
- Anoxybacillus gonensis D-glukoz (D-ksiloz) izomeraz geninin klonlanması, izolasyonu ve karakterizasyonu
Cloning, isolation and characterization of D-glucose (D-Xylose) isomerase gene from Anoxybacillus gonensis
HAKAN KARAOĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2004
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. ALİ OSMAN BELDÜZ
- Anoxybacillus gonensis G2t glukoz izomerazının ısıl kararlılığının K111R-L313I-V101R-A353G/F/W VE T428E/S bölge spesifik mutasyonları ile geliştirilmesi
Improvement thermal stability of glucose isomerase from Anoxybacillus gonensis g2t by site directed mutagenesis K111R-L313I-V101R-A353G/F/W and T428E/S
SEYHAN RAKICI
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiSu Ürünleri Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ HAKAN KARAOĞLU
- Anoxybacillus gonensis G2T ksiloz izomeraz geninin klonlanması, gen ürününün saflaştırılması ve karakterizasyonu
Cloning of anoxybacillus gonensis G2T xylose isomerase gene and purification and characterization of gene product
DERYA YANMIŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2008
BiyokimyaKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ