A privileged hunter: Role of NLRP7 in immune privilege
Ayrıcalıklı bir avcı: NLRP7'nin immün ayrıcalıktaki rolü
- Tez No: 325509
- Danışmanlar: DOÇ. NESRİN ÖZÖREN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Moleküler Tıp, Molecular Medicine
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2012
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 106
Özet
NOD-Benzeri-Alıcılar (NLR) üyeleri apoptoz ve enflamasyonu regüle eden sitoplazmik alıcılar ailesidir. NLRP7, PYRIN bölgesi içeren bir NLR üyesidir ve fonksiyonları henüz bilinmemektedir. NLRP7'nin testiküler seminomada onkogenik bir rol üstlendiği ve bazı kanser türlerinde fazlaca ifade edildiği yayınlanmış birkaç ma-kalede gösterilmiştir. İlginçtir ki, NLRP7 beyin, testis ve plasenta gibi immün ayrıcalıklı dokular ile bazı başka dokularda ifade edilmektedir. Bunun yanında, NLRP7 mutasyon-larının kadınlarda ölü doğum ve düşüklerle sonuçlanan tekrarlayan hidatidiform mollere sebep olduğu bir çok farklı çalışmada gösterilmiştir. Ayrıca, NLRP7'nin IL-1ß seviye-lerini azalttığı ise bir makalede gösterilmiştir. Bu sebeple grubumuzca NLRP7'nin im-mün-baskılayıcı bir rolü olabileceği düşünülmüştür. Bu projenin amacı, NLRP7'nin im-mün ayrıcalıktaki ve enflamasyondaki olası rollerini belirlemektir. İlk olarak NLRP7 cDNA'sı konfokal hücresel lokalizasyon analizi ve immune-çöktürmeyle partner analizi için birçok vektöre klonlanmıştır (FLAG-, HA-, MYC-NLRP7 ve RFP-NLRP7, EGFP-NLRP7). Böylece NLRP7'nin HEK293FT hücrelerinde aşırı ifade edildiği koşullarda immün-çöktürme yöntemiyle etkileşim partnerleri ve lüsiferaz testiyle NF-?B yolağına olan etkileri belirlenmiştir. Bunlara ek olarak NLRP7'nin immün ayrıcalıktaki rolünü araştırmak için ölüm alıcıları ve HLA molekülleri ifadeleri, NLRP7'nin seviyelerinin stabil olarak düşürüldüğü HEC-1-A hücre hatlarında, gerçek zamanlı-PZR ve akış sitometrisi ile ölçülmüştür. RFP veya EGFP-NLRP7'nin hücresel lokalizasyonunun kon-fokal analizi sonucuna NLRP7'nin mitokondri ile minör ko-lokalizasyonu gözlemlenirken Kaspaz-1 ve/veya ASC'la çok net bir ko-lokalizasyon görülmüştür. Sonuçta, grubumuzca NLRP7'nin ASC ve Kaspaz-1'e bağlanarak bir inflamazom oluşturduğu ve IL-1ß'yı olgunlaştırdığı ve ayrıca IL-1ß'nın ekspresyonunu da regüle ettiği bulunmuştur. Ayrıca NLRP7 ifadesinin düşürülmesi sonucu TRAIL-R3, TNF-R2 ve TWEAK ve de ayrıca HLA A, B, C seviyeleri düşerken, Fas ifadesi artmıştır.
Özet (Çeviri)
NOD-like receptors (NLRs) are a family of cytoplasmic receptors with members regulating apoptosis and inflammation. NLRP7 is a novel PYRIN domain containing NLR family member and its functions are still under investigation. NLRP7 is known to possess an oncogenic role in testicular seminomas and found to be overexpressed in cer-tain cancers. Interestingly, in addition to some other tissues, NLRP7 is expressed in brain, testis and placenta which are immune privilege sites in the body. Furthermore, mutations in NLRP7 can cause recurrent hydatidiform moles leading to stillbirths and abortions. One study suggested that NLRP7 down-regulates IL-1ß and hence it is thought that NLRP7 may have an immuno-suppressive function. The aim of this project is to clarify the possible role of NLRP7 in immune privilege and also in inflammation. As a first step to the project, NLRP7 cDNA was cloned into several tagged (FLAG-, HA-, pcDNA3-MYC, RFP and EGFP) mammalian expression vectors for confocal anal-ysis for cellular localization and for detection of its interaction partners by co-immunoprecipitation. The effect of NLRP7 overexpression on NF-?B signaling regula-tion was measured by performing luciferase assay in HEK293FT cells. In order to eluci-date, in order to elucidate the possible role of NLRP7 in immune privilege, shifts in death receptor and HLA expressions were measured using real-time PCR and FACS analysis, respectively, in stable NLRP7 knock-down HEC-1-A cell line. Confocal analy-sis of RFP or EGFP fused NLRP7 reveals that NLRP7 is a cytosolic protein with minor co-localization to mitochondria. Furthermore, confocal co-localization studies show clear overlap between NLRP7 and caspase-1 and/or ASC. We also found that NLRP7 forms an inflammasome that activates IL-1ß through binding to ASC and Caspase-1. NLRP7 appears likely to regulate IL-1ß expression. Finally, NLRP7 down-regulation decreases the expression of TRAIL-R3, TNF-R2 and TWEAK and also HLA A, B, C and increases Fas expression.
Benzer Tezler
- Oils, fats, and the rise of margarine in Turkey: A historical perspective
Yağ ve Türkiye'de margarinin yükselişi: Tarihsel bir değerlendirme
FEVZİCAN ABACIOĞLU
Yüksek Lisans
İngilizce
2020
Sosyolojiİstanbul Bilgi ÜniversitesiKültürel İncelemeler Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ÖZGE SAMANCI
- Buca'da nüfusun sosyo-ekonomik özellikleri ve eğitim üzerindeki etkileri
Socio-economic features of population in Buca and its effects on education
MERYEM KÖRHASAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2005
Eğitim ve ÖğretimDokuz Eylül ÜniversitesiOrtaöğretim Sosyal Alanlar Eğitimi Ana Bilim Dalı
Y.DOÇ.DR. NEVZAT GÜMÜŞ
- Orta Anadolu erken neolitik topluluklarında insan ve bitki ilişkisi: Aşıklı Höyük'te bitki tüketimi ve tarım
People and plant interaction in central anatolian early neolithic communities: Plant consumption and agriculture at Aşikli Höyük
MÜGE ERGUN