Involvement of SIK2 in FGF2 signal regulation via Raf-1 & generation of mutants for identification of phosphorylation sites on SIK2 by Erk
SIK2 proteininin Raf-1 proteini araciliğiyla FGF2 sinyal yönetimindeki görevi & SIK2 proteininin Erk proteini tarafindan fosforlanma motiflerinin belirlenmesi için mutant üretimi
- Tez No: 325508
- Danışmanlar: PROF. KUYAS BUGRA BİLGE
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Bilim ve Teknoloji, Biyoloji, Genetik, Science and Technology, Biology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2012
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 93
Özet
Müller hücreleri çoğalımı Ras/MAPK yolağı üzerinden FGF2 sinyaliyle hızlı ve kısa süreli ERK1/2 aktivasyonuyla indüklenmektedir. Bir serin/treonin kinaz olan tuzla indüklenebilir kinaz 2 (SIK2), bu çerçevede yeni bir düzenleyicidir. Laboratuvar sonuçlarımız göstermiştir ki, SIK2 yolak üyesi Gab1'i Ser266 üzerinden fosforile ederek FGF2 sinyal iletimini baskılamada görev almaktadır. Ayrıca SIK2 bir diğer yolak üyesi olan Raf-1`i Ser621 üzerinden fosforile etmektedir. Bu araştırmada, Raf-1'in SIK2 tarafından fosforilasyonunun Raf-1 ve aşağı yönlü elemanlarının aktivitesi üzerinde negatif etkisi bulunduğunu öne sürülmektedir. Bunun analizi için, FGF2 ile uyarılmış kontrol ve SIK2 susturulmuş Müller hücrelerinde Raf-1 `in Ser621 üzerindeki 0 ile 120 dakika arasındaki zaman diliminde fosforilasyon düzeni incelenmiştir. Ayrıca, Raf-1 aktivitesi, Raf-1 substratı olarak kinaz inaktif MEK kullanılarak in vitro kinaz tayini ile analiz edilmiştir. Verilerimiz önermektedir ki, FGF2 uyarımının 10. dakikasında Raf-1'in SIK2 tarafından Ser 621 üzerindeki fosforilasyonu en yüksek seviyedeyken; 60. dakikada en düşük seviyededir. SIK2'nin susturulmuş olduğu hücrelerde Raf-1 aktivitesi 10. dakikada en yüksek seviyededir ve 60. dakikada bazal düzeye yakındır. Bu veriler SIK2'nin aktivasyon profili ile uyumludur. Bu durumda, 10. dakikada en yüksek aktivite seviyesine ulaşan SIK2'nin Raf-1 aktivitesini Ser621'i fosforile ederek baskıladığı sonucuna varılabilir. Raf-1 fosforilasyon durumu ve aktivitesi SIK2'nin en düşük aktivite düzeyinde olduğu 60. dakikada bazal düzeye yaklaşmaktadır. Araştırmanın ikinci kısmında, SIK2 mutantları oluşturularak, ERK tarafından SIK2'nin fosforilasyonu araştırılmıştır. Önceki verilerimize göre; ERK SIK2'yi FxFP motifine birleşik (S/T)P (DED domain) olan ERK fosforilasyon motifine dayanarak belirlenen 758 ve 863 numaralı 2 aday treonin üzerinden fosforile etmektedir. Bu fosforilasyon SIK2'nin aktivasyonu ve modülasyonu ile sonuçlanmaktadır. Hedef amino asitlerin belirlenmesinde ilk adım olarak, T863A SIK2 mutantı üretilmiştir.
Özet (Çeviri)
Müller cell proliferation is induced by FGF2 signaling via Ras/MAPK pathway through rapid and transient ERK1/2 activation. Salt inducible kinase 2 (SIK2), a serine/threonine kinase, is a novel regulator in this context. Results from our laboratory implicate SIK2 in downregulation of FGF2 signaling through phosphorylation of adaptor protein, Gab1 on Ser266. SIK2 also phosphorylates another pathway element, Raf-1 on Ser621. In this study, we hypotesized that SIK2 phosphorylation of Raf-1 downregulates its activity and activation of downstream elements in FGF2 signaling. In this context modulation of Raf-1 phosphorylation on Ser621 was investigated in FGF2 treated control and SIK2 silenced Müller cells in a time course from 0 to 120 minutes. Raf-1 activity was analyzed by in vitro kinase assay using kinase inactive MEK as Raf-1 substrate. Our data revealed that Raf-1 phosphorylation on Ser621 reaches maximum level at 10 minutes and the minimum level at 60 minutes of FGF2 treatment. Raf-1 activity is the highest in SIK2 silenced cells at 10 minutes and close to basal level at 60 minutes. These data are in accordance with SIK2 activation profile. It can be concluded that SIK2 inhibits Raf-1 activity by phosphorylating it on Ser621 at 10 minutes when SIK2 has the maximum activity. Raf-1 phosphorylation status and activity approximates to basal levels at 60 minutes where SIK2 activity is at minimum level. In the second part of the study, phosphorylation of SIK2 by ERK was investigated through generation of SIK2 mutants. Our previous data shows that ERK phosphorylates SIK2 on two candidate threonines as 758 and 863 based on ERK phosphorylation motif, (S/T)P adjacent to FxFP motif (DED domain). This phosphorylation results in activation and modulation of SIK2. As a first step in identification of target residues, T863A SIK2 mutant was generated.
Benzer Tezler
- Salt Inducible Kinase (SIK2) is a potential mediator of cross-talk between Fibroblast Growth Factor (FGF) and Protein Kinase A (PKA) pathways
Tuz Indüklenebilir Kinaz (SIK2), Fibroblast Büyüme Faktörü (FGF) ve Protein Kinaz A (PKA) sinyal iletim yolaklarının entegrasyonunda olası bir aracıdır
DEMET CANDAŞ
Yüksek Lisans
İngilizce
2007
BiyolojiBoğaziçi ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. KUYAŞ BUĞRA BİLGE
- Involvement of GAB1 in müller cell proliferation
GAB1'in müller hücreleri̇ni̇n proli̇ferasyonuna etki̇si̇
HANİFE DİLVİN YILDIRIM
Yüksek Lisans
İngilizce
2019
BiyolojiBoğaziçi ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KUYAŞ BUĞRA
- SIK2 involvement in downregulation of FGF signaling through GAB1 and RAF-1
SIK2?nin GAB1 ve RAF-1 üzerinden FGF sinyal yolağının negatif regülasyonuna katılımı
YELİZ YILMAZ SERT
Yüksek Lisans
İngilizce
2011
BiyolojiBoğaziçi ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KUYAŞ BUĞRA BİLGE
- SIK3 involvement in FGF2 signaling in müller cells
SIK3'ün müller hücrelerinde FGF2 sinyal iletimine katılımı
YILDIZ KOCA
Yüksek Lisans
İngilizce
2013
BiyokimyaBoğaziçi ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KUYAŞ BUĞRA BİLGE
- The possible involvement of SIK2 in diabetic retinopathy
SIK2'nin diyabetik retinopati'deki olası rolü
BURCU ERSOY
Yüksek Lisans
İngilizce
2015
BiyolojiBoğaziçi ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. KOYAŞ BİLGE