Reversal of multidrug resistance in MCF-7 breast adenocarcinoma cell line by silencing interleukin 6 with RNA interference
Doksorubisin dirençli MCF-7 hücre hattında interlökin-6'nın siRNA ile susturularak çoklu ilaç dirençliliğinin geri çevrilmesi
- Tez No: 341051
- Danışmanlar: PROF. UFUK GÜNDÜZ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Genetik, Onkoloji, Biology, Genetics, Oncology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2013
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 84
Özet
Kanserde çoklu ilaç dirençliliği, tek bir kemoterapötik ajanın tedavi amaçlı uzun süre uygulanmasından sonra, yapısal olarak birbirinden bağımsız birden fazla ilaca direnç gelişmesi olarak tanımlanır. Doksorubisine dirençli MCF-7 meme kanseri hücre hattında direnç gelişiminin önemli sebeplerinden biri MDR1 geni tarafından kodlanan, ATP bağlayıcı kaset taşıyıcı proteinlerinden P-glikoproteinin ifadesindeki artıştır. Interlökin 6 (IL-6) bazı kanser hücreleri de dahil çeşitli hücre tipleri üzerinde büyüme faktörü olarak etki gösteren bir sitokindir. Bu sitokinin kötü prognozla seyreden kanser hastalarının serum düzeylerinde normalden fazla bulunduğu gözlenmiştir. Ayrıca, hasta serum düzeyindeki IL-6 artışı çoklu ilaç dirençliliğinin de göstergesidir. MCF-7 hücre hattında, IL-6nın C/EBPß adlı transkipsiyon faktörünü aktive ederek MDR1 gen ifadesini arttırdığı ve Doksorubisin direncine sebep olduğu bilinmektedir. Bu çalışmanın amacı ilaç dirençli kanser hücre hatlarında IL6 genini RNAi yöntemiyle susturmak ve bunun çoklu ilaç dirençliliği üzerindeki etkisini gözlemlemektir. IL6 geninin susturulmasının IL6, MDR1 ve MRP1 genlerinin ifade düzeylerindeki etkisi qRT-PCR ile belirlenmiştir. Susturulmanın doğrulanması için hücre dışına salgılanan IL-6 miktarı hücre kültürü besi ortamından ELISA yöntemi ile ölçülmüştür. Ayrıca, hedef genin susturulmasının hücreleri yeniden Doksorubisine duyarlı hale getirip getirmediği XTT sitotoksisite analizi ile belirlenmiştir. Elde edilen sonuçlara göre IL6 geni RNAi yöntemini kullanarak başarı ile susturulmuştur. Hücre kültürü besi ortamına salgılanan IL-6 miktarı siRNA uygulamasından 24 saat sonra %36 oranında düşmüştür. Ayrıca, IL6 gen ifadesi düzeyi 24 saatte ilk değerin %50?sine düşmüştür. MDR1 mRNA düzeyi ise IL-6 sinyal yolağının bloke edilmesiyle %45 oranında azalmıştır. IL-6 sinyal yolağıyla düzenlenmeyen MRP1 geninin ifadesi ise değişme göstermemiştir. Sitotoksisite analizleri dirençli MCF-7 hücrelerinin Doxorubisin?e %65 daha duyarlı oldunu göstermiştir. Bu çalışma, IL6 geninin susturulmasının Doksorubisine dirençli MCF-7 hücrelerinde ilaç dirençliliğini önemli ölçüde geri çevirebileceğini göstermiştir.
Özet (Çeviri)
Multidrug resistance (MDR) in cancer is characterized by development of resistance to several unrelated drugs upon long time administration of a certain type of chemotherapeutic agent. In doxorubicin resistant MCF-7 cell line, resistance is developed mainly by upregulation of MDR1 gene which encodes an ABC transporter protein known as P-glycoprotein. Interleukin 6 (IL-6) is a cytokine which acts as a growth factor for certain cell types including some cancer cells. IL-6 is found at high levels in cancer patients having poor prognosis and resistance to certain chemotherapeutic agent. It is known that in MCF7 cell line, IL-6 induces overexpression of MDR1 gene by activating its transcription factor, C/EBPß and confers resistance against Doxorubicin. In this study, the aim is silencing IL6 and to see the effects on MDR. Effects of IL-6 silencing on the levels of IL6, MDR1 and MRP1 genes are determined by qRT-PCR. Further confirmation of IL6 silencing is done by checking secreted IL-6 amount in cell culture media. Drug accumulation assay is done for evaluation of IL6 silencing on P-gp function. Moreover, to show that silencing of this particular gene sensitizes cells to chemotherapeutic drug Doxorubicin, XTT cytotoxicity assay is done. Results indicate that IL6 is successfully silenced by applying RNA interference which is observed by 36% decrease in IL-6 level to cell culture media. In correlation, IL6 mRNA level decreased 0.5 fold 24 hours after treatment. In addition, MDR1gene is downregulated by 45% as a consequence of interruption of IL-6 signaling in cell. MRP1, another ABC transporter coding gene, which is not connected to IL-6 signaling pathway, is not affected by silencing showing that reversal of multidrug resistance is only dependent on decreased MDR1 expression. Cytotoxicity assays show that cells are sensitized to Doxorubicin in an extent of 65% It is demonstrated that silencing IL6 gene makes Doxorubicin resistant MCF-7 cells significantly more susceptible to drug.
Benzer Tezler
- Reversal of breast cancer resistance protein mediated multidrug resistance in MCF7 breast adenocarcinoma cell line
MCF7 meme kanseri hücre hattında meme kanseri dirençlilik proteininden kaynaklanan çoklu ilaç dirençliliğinin geri çevrilmesi
ÇAĞRI URFALI
- Reversal of multidrug resistance by small interfering RNAs (siRNA) in doxorubicin resistant MCF-7 breast cancer cells
Doksorubisine dirençli MCF-7 meme kanseri hücre hattında çoklu ilaç dirençliliğinin siRNA kullanılarak geri dönüştürülmesi
YAPRAK DÖNMEZ
- Reversal of efflux mediated drug resistance in doxorubicin resistant mammary carcinoma cell line by synthetic compounds
Doksorubisin dirençli meme kanseri hücre hattında akış aracılı ilaç direncinin sentetik bileşikler ile geri çevrilmesi
ÖYKÜ IRMAK DİKKATLİ
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
Moleküler TıpBaşkent ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖZLEM DARCANSOY İŞERİ
DR. ÖĞR. ÜYESİ YAPRAK DÖNMEZ ÇAKIL
- Reversal of paclitaxel resistance in MCF-7 cell line by a chemical modulator elacridar
MCF-7 hücre hattında paklitaksel direncinin kimyasal modülatör elakridar ile geri çevrilmesi
EMİNE ÇİĞDEM ŞENER
Yüksek Lisans
İngilizce
2012
BiyolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UFUK GÜNDÜZ
- Poly (DL-lactic-co-glycolic acid) microparticles and synthetic peptide drug conjugate for anti-cancer drug delivery
Anti-kanser ilaç taşınması için poli (laktid-ko-glikolit) mikroparçacık ve sentetik peptit-ilaç konjugasyonu
GÜLSEREN PETEK ŞEN
Yüksek Lisans
İngilizce
2009
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜNGÖR GÜNDÜZ
PROF. DR. UFUK GÜNDÜZ