Preparation of cryogel columns for depletion of hemoglobin from human blood
İnsan kanından hemoglobin uzaklaştırılması için kriyojel kolonlarının hazırlanması
- Tez No: 346063
- Danışmanlar: PROF. DR. ADİL DENİZLİ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biyoteknoloji, Polimer Bilim ve Teknolojisi, Biochemistry, Biotechnology, Polymer Science and Technology
- Anahtar Kelimeler: Hemoglobin uzaklaştırılması, metal şelat afinite sorbentleri, PHEMA, kriyojel, IDA, Hemoglobin depletion, metal chelate affinity sorbents, PHEMA cryogel, IDA
- Yıl: 2013
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 95
Özet
Proteinler canlı organizmalar için yaşamsal öneme sahip moleküllerdir. Çok sayıda önemli fizyolojik metabolik yolakları yürütürler. Dolayısıyla her zaman yoğun bir ilgiyle çalışılmaktadırlar. Proteom terimi herhangi bir organizmanın ürettiği proteinlerin, sentezlendikten sonraki modifikasyonlar da dahil, çalışılmasını ifade etmektedir. Proteomik çalışmalarının gelişen alanlarından bir tanesi de eritrosit proteinleri içerisinde hastalıklarla ilişkili yeni olanların tanımlanmasıdır. Kan plazmasının proteomik analizinde olduğu gibi, eritrositlerdeki fazla miktarda bulunan proteinler, hemoglobin ve karbonik anhidraz gibi, az miktarda bulunan ve hastalıklarla ilişkili proteinlerin görülmesini engellemektedir. Daha önceki çalışmalarda nikel afinite kromatografisi hemoglobin uzaklaştırma etkinliği bakımından incelenmiş ve tayin edilebilir protein sayısının artması için etkili olduğu gösterilmiştir. Bu tez çalışmasında, hemoglobin uzaklaştırılması için metal şelat afinite kriyojellerin hazırlanması amaçlanmıştır. PHEMA kriyojeller, kan uyumluluğu, ozmotik, kimyasal ve mekanik kararlılığı ve birbiri ile bağlı geniş gözenek yapısı nedeniyle kan gibi viskoz sıvılarla çalışmaya uygunluğu nedeniyle seçilmiştir. PHEMA kriyojeller -12°Cde 24 saat süre ile sentezlenmiştir. Şelatlama ajanı İDA, epiklorohidrin aktivasyonunun ardından kriyojellere kovalent olarak bağlanmıştır. Daha sonra Cu2+, Ni2+, Zn2+ ve Co2+ iyonları İDA bağlı kriyojellere bağlanmıştır. Adsorbentin karakterizasyonu şişme testleri, elementel analiz, FTIR, SEM, yüzey alanı ölçümleri ve kan uyumluluğu testleri ile karaterize edilmiştir. PHEMA kriyojellere IDA bağlanması 8.27 mmol/g?dır. Kriyojellerin yüzey alanı 24.7 m2/g olarak belirlenmiştir. Şişme derecesi 8.49 g H2O/g ve makrogözeneklilik PHEMA için % 74.1, PHEMA-IDA kriyojeller için % 63.5 olarak bulunmuştur. Hemoglobin derişiminin, pH?nın ve iyonik derişimin hemoglobin bağlanmasına etkileri incelenmiştir. Hemolizattan Hb ayrılması SDS-PAGE ile gösterilmiştir. FPLC çalışmaları da hazırlanan adsorbentin diğer kan proteinlerine göre Hb için iyi bir çözünürlük değerine sahip olduğunu göstermektedir.
Özet (Çeviri)
Proteins are vital molecules for the living organisms. They carry out many important physiological metabolic pathways. Therefore they have always been the study of interest. The term proteome defines the large-scale study of proteins including the proteins produced by any organism as well as their modifications made after the synthesis. An evolving field of the proteomics is to identify disease linked novel proteins within the erythrocyte proteins. As in the all proteomic studies of the blood plasma, high abundant proteins in erythrocytes, i.e. hemoglobin and carbonic anhydrase, interfere with the analysis of low abundant and disease related proteins. Thus it is essential to remove these proteins before detailed analysis of cytosolic proteins of erythrocytes. In the previous studies nickel affinity chromatography has been investigated for its efficiency for hemoglobin depletion and shown to be effective for increasing the number of detectable proteins. In this thesis we aimed the preparation of the metal chelate affinity cryogels for the hemoglobin depletion. PHEMA cryogels are selected as base matrix because of their blood compatibility, osmotic, chemical and mechanical stability. Cryogels are also useful when working with the viscous samples such as blood, thanks to their interconnected macroporous structure. PHEMA cryogels are prepared at -12°C for 24 hours. IDA, the chelating agent, was covalently coupled to PHEMA cryogels after activation with the epichlorohydrin. Then Cu2+, Ni2+, Zn2+ and Co2+ ions were chelated to the IDA-bound cryogels. Characterization of the adsorbent was performed with swelling tests, elemental analysis, FTIR, SEM, surface area measurements and blood compatibility studies. IDA attachment was found as 8.27 mmol/g. Specific surface area of the cryogels was 24.7 m2/g. Swelling degree and porosity of the cryogel was 8.49 g H2O/g and 74.1% for PHEMA and 63.5% for PHEMA-IDA cryogels, respectively. The effect of pH, Hb concentration, and ionic strength was investigated. The depletion of the Hb from hemolysate was shown by SDS-PAGE. The FPLC studies confirmed that the prepared adsorbent has a good resolution values with respect to other blood proteins.
Benzer Tezler
- Preparation of ionic activation of cryogel monolith columns for purification of poly-L-lysine
Ɛ -poli-L-lisin saflaştırması için kriyojel monolit kolonlarının iyonik aktivasyonunun hazırlanması
YAPRAK PETEK KORALTAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
BiyoteknolojiYeditepe ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ALİ ÖZHAN AYTEKİN
- Fibronektin saflaştırılması için kriyojel monolitik kolonların hazırlanması
Preparation of cryogel monolithic columns for fibronectin purification
IŞIK PERÇİN DEMİRÇELİK
Doktora
Türkçe
2012
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ADİL DENİZLİ
PROF. DR. EROL AKSÖZ
- Çevre sularından arsenik uzaklaştırılması için süpermakro gözenekli hidrojellerin hazırlanması
Preparation of supermacroporous hydrogels for arsenic removal out of environmental sources
HATİCE BEKTAŞ
Doktora
Türkçe
2013
Çevre MühendisliğiHacettepe ÜniversitesiÇevre Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. A. CEMAL SAYDAM
PROF. DR. ADİL DENİZLİ
- Boronat afinite kromatografisi için monolitik HPLC kolonları
Preparation of monolithic HPLC columns for boronate affinity chromatography
YEŞEREN SAYLAN
- Biyoteknolojik uygulamalara yönelik kriyojellerin hazırlanması
Preparation of cryogels for biotechnological applications
MESBAHULDIN MESBAH
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyokimyaPamukkale ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ KORAY ŞARKAYA