Geri Dön

Gökkuşağı alabalığı (Oncorhynchus mykiss) karaciğer dokusundan mitokondriyal tiyoredoksin redüktaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı metal iyonlarının enzim aktivitesi üzerine in vitro etkilerinin incelenmesi

Purification and characterization of mitochondrial thioredoxin reductase enzyme from rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) liver tissue and investigation the effect of some metal ions on enzyme activity on in vitro

  1. Tez No: 361142
  2. Yazar: İLKNUR ÖZGENÇLİ
  3. Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET ÇİFTCİ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2014
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Atatürk Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 100

Özet

Tiyoredoksin redüktaz (E.C 1.6.4.5. ; TrxR) enzimi piridin nükleotid-disülfid oksidoredüktazların flavoprotein ailesine bağlı bir enzimdir. Bu tez kapsamında mitokondriyal TrxR enzimi gökkuşağı alabalığı karaciğerinden saflaştırıldı. Saflaştırma işlemi; homojenatın hazırlanması ve 2',5'-ADP Sepharose 4B afinite kromatografisi olmak üzere 2 aşamada gerçekleştirildi. Enzim 11,9 EÜ/mg protein spesifik aktiviteyle, %2,38 verimle ve 672 kat saflaştırıldı. Enzimin saflığı SDS-PAGE ile kontrol edilerek alt biriminin molekül kütlesi yaklaşık 70 kDa olarak hesaplandı. Enzim için optimum pH fosfat tamponunda pH: 7,5; stabil pH, fosfat tamponunda pH: 8,0; optimum sıcaklık 0°C ve optimum iyonik şiddet 0,5 M fosfat tamponunda pH: 7,5 olarak belirlendi. Enzimin doğal molekül kütlesi jel filtrasyon kromatografisi metoduyla 151 kDa olarak bulundu. Ayrıca NADPH substratı için KM sabiti 12,65 µM ve Vmax değeri 0,51 EÜ/ml; DTNB substratı için KM sabiti 0,83 µM ve Vmax değeri 0,079 EÜ/ml olarak belirlendi. Gökkuşağı alabalığı karaciğerinden saflaştırılan mitokondriyal TrxR enzim aktivitesi üzerine Se+4, Cu+2, Co+2, Ni+2, Fe+3 ve Al+3 metal iyonlarının inhibisyon etkisi in vitro olarak araştırıldı. Se+4 iyonu enzim aktivitesini arttırırken metal iyonlarının tamamı inhibisyon etkisi gösterdi. İnhibisyon etkisi gösteren diğer metal iyonlarının Lineweaver-Burk grafikleri yardımıyla Ki sabitleri ve inhibisyon türleri belirlendi. Ki sabitleri sırayla Al+3 için 0,14±0,026 mM, Co+2 için 0,17±0,033 mM, Fe+3 için 0,34±0,025 mM, Cu+2 için 0,85±0,045 mM ve Ni+2 için 1,60±0,285 mM olarak hesaplandı. Ayrıca DTNB için özgüllük sabiti (V0) 44×103 dk-1 µM-1 ve turnover sayısı (kcat ) değeri 36,2×103 dk-1 olarak bulundu.

Özet (Çeviri)

Thioredoxin reductase (E.C 1.6.4.5.; TrxR) is an enzyme belonging to flavoprotein family of pyridine nucleotide-disulphide oxidoreductases. In this thesis, mitochondrial TrxR enzyme was purified from rainbow trout liver. The purification of the enzyme was performed by two steps procedure as preparation of homogenate and 2',5'-ADP Sepharose 4B affinity chromatography. Enzyme was obtained having a spesific activity of 11.9 EU/ml proteins with a yield of 2,38% and 672 of purification fold. The purity of the enzyme was controlled and molecular weight of its subunits were calculated as 70 kDa by SDS-PAGE. Optimal pH, optimal ionic strenght, optimal temperature, stable pH for enzyme were determined as pH 7.5 at 500 mM phosphate buffer, 0°C and pH 8.0 at phosphate buffer, respectively. The native moleculer mass of the enzyme was found to be approximately 151 kDa by gel filtration chromatography. Besides, KM constants and Vmax values for both substrates, DTNB and NADPH, were calculated as 0.828 µM and 0.079 EU/ml and 12.65 µM and 0.513 EU/ml. Respectively in vitro effects of Al3+, Co2+, Fe3+, Cu2+, Ni2+ and Se4+ metal ions on the enzyme activity were examined. Ki constants for metal ions inhibiting enzyme were determined as 0.14±0.026 mM, 0.17±0.033mM, 0.34±0.025mM, 0.85±0.045mM and 1.60±0.285 mM. V0 values and turnover number (Kcat) for DTNB were calculated as 44×103 min-1 µM-1 and 36.2× 103 min-1

Benzer Tezler

  1. Gökkuşağı alabalıklarında (oncorhynchus mykiss) büyüme genlerinin (GH, IGF-1, IGF-2) ekspresyonu ile serum kortizol düzeyleri üzerine yaş ve mevsimsel değişimlerin etkisi

    The effect of age and seasonal changes on serum cortisol levels with expression of growth genes (GH, IGF-1, IGF-2) in rainbow trout (oncorhynchus mykiss).

    HAKAN TEKELİ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    BiyokimyaAydın Adnan Menderes Üniversitesi

    Biyokimya (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYŞEGÜL BİLDİK

  2. Linuron'un Gökkuşağı alabalığı (Oncorhynchus mykiss)solungaç ve karaciğer dokuları üzerinde histopatolojik ve biyokimyasal etkilerinin araştırılması

    Investigation of histopathological and biochemical effects of gill and liver tissues of the linuron rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)

    ARZU GERGİT

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    Su ÜrünleriAtatürk Üniversitesi

    Su Ürünleri Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. AHMET TOPAL

  3. Gökkuşağı alabalığı (Oncorhynchus mykiss, W. 1792) yavru yemlerinde mikroalg (Schizochytrium sp.) yağı kullanımının büyüme performansı üzerine etkilerinin incelenmesi

    Effects of microalgae (Schizochytrium sp.) oil supplemented grow-out feeds on growth performance of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, w. 1792)

    MUSTAFA HACİSA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Su ÜrünleriMuğla Sıtkı Koçman Üniversitesi

    Su Ürünleri Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ERTAN ERCAN

  4. Astaksantin uygulamasının gökkuşağı alabalığı (Oncorhynchus mykiss) oksidan, antioksidan ve yağ asitleri düzeyleri üzerine etkisi

    Effect of astaxanthin supplement on rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) oxidant, antioxidant and fatty acids levels

    AYRİS GÖKÇEOĞLU

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyokimyaOndokuz Mayıs Üniversitesi

    Veteriner Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SENA ÇENESİZ

  5. Yemleme sıklığının gökkuşağı alabalığı (Oncorhynchus mykiss) yavrularında GH-I, IGF-I, ve IGF-II genlerinin mRNA ekspresyon seviyeleri üzerine etkisi

    The feed of the feedback rainbow (Oncorhynchus mykiss) mRNA expression of GH-I, IGF-I, and IGF-II genes in puppies the effect on levels

    ESRA BALKİS

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    Su ÜrünleriAtatürk Üniversitesi

    Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ABDULKADİR ÇİLTAŞ