Laktoperoksidaz enziminin sığır ve koyun sütlerinden afinite kromatografisi tekniği ile saflaştırılması
Purification of lactoperoxidase enzyme from bovine and sheep milk by affinity chromatography technique
- Tez No: 361144
- Danışmanlar: PROF. DR. HASAN ÖZDEMİR
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2014
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 102
Özet
Sığır sütünden laktoperoksidaz (LPO E.C.1.11.1.7) enzimi CNBr ile aktive edilmiş Sepharose-4B-L-trozin-sülfanilamid afinite kromatografisi ile saflaştırıldı. LPO üzerine 2-kloro-4-sülfamoyilanilin, 5-amino-1-naftalin sülfonilamid, 4-amino-6-kloro-1,3-benzendisülfanilamid, 4-amino-3-metil ve 3-amino-4-kloro benzensülfonilamid moleküllerinin IC50 değeri sırasıyla 346,5 µM, 57,75 µM, 11,36 µM, 86,62 µM ve 49,5 µM olarak hesaplanırken, Ki değerleri ise sırasıyla 283,32 µM, 6,74 µM, 6,39 µM 55,62 µM ve 43,67 µM olarak tespit edildi. 4-Amino-3-metil benzensülfonilamid yarışmasız inhibisyon gösterirken diğer moleküller yarışmalı inhibisyon gösterdi. İnhibisyon gösteren moleküllerin her biri için afinite jelleri hazırlanarak sığır sütünden LPO enziminin saflaştırma tabloları hazırlandı. Saflaştırma basamakları sonucunda 2-kloro-4-sülfamoyilanilin kolonundan sığır sütü LPO enzimi %12 verimle 453 kat saflaştırılırken koyun sütü LPO enzimi %13 verimle 869 kat saflaştırıldı. Enzimlerin saflığı SDS-PAGE ile kontrol edildi ve tek bant bulundu (80 kDa). 2-kloro-4-sülfamoyilanilin kolonudan saflaştırılan sığır sütü LPO için optimum pH 6,0, optimum sıcaklık 42°C, KM değeri 0,13 mM ve Vmax değeri 0,55 EÜ/ml.dk iken koyun sütü LPO için optimum pH 5,5, optimum sıcaklık 60°C, KM değeri 0,74, mM ve Vmax değeri 0,05 EÜ/ml.dk olarak tespid edildi. 2-Kloro-4-sülfamoyilanilin kolunu için LPO'nun bağlanma kapasitesi 15°C'de pH:8,5 ve 0,35 M iyonik şiddet konsantrasyonunda 9,65 mg/g jel olarak belirlendi.
Özet (Çeviri)
Bovine milk Lactoperoxidase (LPO E.C.1.11.1.7 ) enzyme was purified by Sepharose 4B-L-tyrosine sulfanilamide affinity column choromatoghrophy that activated with CNBr. 2-Chloro-4-sülfamoyilanil, 5-amino-1-naphthalene sulfanilamide, 4-amino-6-chloro-1,3-benzendisülfanilamid and 3-amino-4-chloro benzensülfonilamid showed the competitive inhibition IC50 values were calculated as respectively 346,5 μm, 57,75 μm, 11,36 μm, 86,62 µM and 49,5 μm. On the other hand Ki values determined were respectively 283.32 μm, 6,74 μm, 6,39 μm, 55,62 µm and 43,67 μm. 4-amino-3-methyl benzensülfonilamid inhibitor exhibited noncompetitive inhibition, but the others exhibited competitive inhibition. Affinity gels are prepared for each: inhibitor compound and LPO enzyme purification table were prepared from the bovine and sheep milk. As a result of purification steps through a column of 2-chloro-4-sülfamoyilanil bovine milk LPO enzyme was purified 453 fold with 12% yield and sheep milk LPO enzyme was purified 869-fold with 13% yield. The purities of the purified enzymes were checked by SDS-PAGE and one band was found (80 kDa). For each enzyme bovine the milk LPO that purified from 2-chloro-4-sülfamoyilanil colon, optimum pH was 6,0, optimum temperature was 42°C, KM values was 0,13 mM and Vmax values was 0,55 EU / ml.dk while for sheep milk LPO optimum was 5,5, optimum temperature was 60ºC, KM value of 0,74 mM and Vmax values of 0,05 EU / ml.dk were determined. Binding capacity of LPO by 2-chloro-4-sülfamoyilanil column was determined 9,65 mg / g gel at 15°C pH: 8,5 and at a concentration of 0,35 M ionic strength.
Benzer Tezler
- Benzohidrazid türevleri ile laktoperoksidaz enziminin afinite tekniği kullanılarak memeli sütlerinden saflaştırılması
Purification of lactoperoxidase enzyme from mammals milk benzohydrazi̇de derivatives prepared by using affinity technique
NESLİHAN MACİT
- Sülfanilamid türevleri kullanılarak memeli sütlerinden laktoperoksidaz enziminin saflaştırılması
Purification of the lactoperoxidase enzyme with using sulfanilamide derivatives from mammalian milk
ZEYNEP KÖKSAL
- Farklı memeli sütlerinden laktoperoksidaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu, suda çözünen organik çözücülerdeki davranışı, sekonder ve tersiyer hidroperoksitleri indirgeme kinetiğinin incelenmesi
Purification and characterization of lactoperoxidase from different mammalians milk: Investigation of LPO behavior in water-misciple solvents and reduction kinetics of seconder and tertiary hydroperoxides
HALİL İBRAHİM HACIBEYOĞLU
Doktora
Türkçe
2002
KimyaAtatürk ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. Ö. İRFAN KÜFREVİOĞLU
YRD. DOÇ. DR. HAMDULLAH KILIÇ
- Laktoperoksidaz enziminin sığır sütünden saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin incelenmesi
Purification of lactoperoxdase enzyme from bovinemilk and investigation of some kinetics properties
İMDAT AYGÜL
- Sığır sütünden saflaştırılan laktoperoksidaz enziminin bazı ilaçlar ve aktif katyonlara karşı kinetik özelliklerinin belirlenmesi
Determination of kinetic properties of lactoperoxidase purified from bovine milk against active cation and some drugs
AYŞE ÖZKAN YILDIRIM