Geri Dön

Kurutulmuş nohut granüllerinden (Cicer arietinum) β-galaktosidaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

Purification and characterization of β-galactosidase enzyme from dry chick pea granules (Cicer arietinum)

PDF İndir

  1. Tez No: 372706
  2. Yazar: ERDEM KAYA
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. YONCA DUMAN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Kimya, Chemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2014
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Kocaeli Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 57

Özet

β-D-Galaktosidaz (EC 3.2.1.23, laktaz) laktozu, glikoz ve galaktoza hidrolizini katalizleyen enzimdir. Doğada yaygın olarak bulunur ve bitkisel, hayvansal ve mikrobiyal kaynaklardan izole edilir. Bu çalışmada, nohuttan β-galaktosidaz saflaştırılması üç fazlı ayırma (TPP) yöntemi kullanılarak ilk defa uygulandı. pH 6,8'de, 1:0,5 ham enzim çözeltisi:t-bütanol oranı ve %60 doygun amonyum sülfat kullanarak uygulanan TPP yöntemi sonucunda enzim, %133 verim ile 10,1 kat saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimin, SDS-PAGE analizi ile molekül ağırlıkları 48 ve 38 kDa olan iki alt birim içerdiğini gösterdi. Native-PAGE ve zimogram analizi ile enzimin molekül ağırlığı 85 kDa olarak bulundu. Saflaştırılan enzimin optimal pH ve sıcaklığı, sırasıyla 2,8 ve 50oC olarak bulundu. Arrheius aktivasyon enerjisi (Ea) 28,63 kJ/mol olarak hesaplandı. Saflaştırılan enzim, 45oC'de 30 dakika inkübasyon sonunda aktivitesinin %60'ını korurken, bununla birlikte, 60oC'de 30 dakika inkübasyon sonunda aktivitesinin %80'ini kaybettiği gözlemlendi. 37oC'de pH 2,8'de enzimin, Michaelis-Menten sabiti (Km) ve maksimum hızı sırasıyla 1,1 mM ONPG ve 0,90 U/ml/dk olarak bulundu. Saflaştırılan enzimin turnover sayısı (kcat) ve katalitik performansı (kcat/Km) sırasıyla 212,26 dk-1 ve 193 dk-1mM-1 olarak bulundu. Enzimin termodinamik parametreleri; ΔG#, 62,21 kJ/mol; Δ#E-T, -13,56 kJ/mol; Δ#E-S, 0,25 kJ/mol; ΔH#, 26,06 kJ/mol; ΔS#, -0,12 kJ/mol.K olarak hesaplandı.

Özet (Çeviri)

β-Galactosidase (Lactase, E:C 3.2.1.23) is an enzyme which catalyze the hydrolysis of lactose to glucose and galactose. The enzyme is widespread in nature and can be isolated from herbal, animal and microbial sources. In this study, the purification of β-galactosidase from chick pea (Cicer arietinum) was carried out first time by three phase partitioning method (TPP). Enzyme was 10.1 fold purified with 133% activity recovery by the method of TPP obtained by using 60% saturated ammonium sulphate and crude enzyme extract:t-butanol in 1:0.5 ratio at pH 6.8. SDS-PAGE analysis of purified enzyme showed that enzyme has consisted two subunits in 48 and 38 kDa molecular weight. The molecular weight of native enzyme was found to be 85 kDa as results of Native-PAGE and zymogram analysis. Optimal pH and temperature of purified enzyme were found to be 2.8 and 50oC, respectively. Arrhenius activation energy (Ea) was determined as 28.63 kJ/mol. Purified enzyme is retained the 60% of its activity after 30 minutes incubation at 45oC, however, 80% activity loss was observed at 60oC. Michaelis-Menten constant (Km) and maximal velocity of enzyme were found to be 1.1 mM ONPG and 0.90 U/ml/min at 37oC and pH 2.8. Turnover coefficient (kcat) and catalytic efficiency (kcat/Km) of purified enzyme were found to be 212.26 min-1 and 193 min-1mM-1 in order. Thermodynamic parameters of enzyme were calculated as ΔG#, 62.21 kJ/mol; Δ#E-T, -13.56 kJ/mol; Δ#E-S, 0.25 kj/mol; ΔH#, 26.06 kj/mol; ΔS#, -0.12 kJ/mol K.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    633555

    Kurutulmuş nohut mayasının ekmek kalitesine etkileri

    Effects of dried chickpea yeast on bread quality

    RAZİYE DURMAZ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    Gıda MühendisliğiKaramanoğlu Mehmetbey Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ABDULVAHİT SAYASLAN

  2. Tez No

    291922

    Çerezlik mısır hamuruna nohut unu, yer fıstığı unu ve kırmızı biber tohum unu eklenmesi sonucu ısıl ve reolojik özelliklerde meydana gelen değişimin incelenmesi

    The effect of chickpea flour, peanut flour and red peper seed flour on thermal and rheological properties of masa flour

    AYŞE GİZEM KOR ULUKUT

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    Gıda Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. E. ÖZGÜL EVRANUZ

    YRD. DOÇ. DR. FİLİZ ALTAY

  3. Tez No

    276325

    Nohut (Cicer arietinum L.) fasulye (Phaseolus vulgaris L.) ve soya fasulyesinden (Glycine max L.) üretilen baklagil bulgurlarının üretim metotlarının standardizasyonu ile bazı kalitatif ve besinsel özelliklerinin belirlenmesi

    The standardization of production methods and determination of some qualitative and nutritional properties of legume bulgurs made with chickpea (Cicer arietinum L.), common bean (Phaseolus vulgaris L.) and soy bean (Glycine max L.)

    NİLGÜN ERTAŞ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    Gıda MühendisliğiSelçuk Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SELMAN TÜRKER

  4. Tez No

    734768

    Siyah nohut mayası ile fermente edilen hamurlarda ekzopolisakkarit üretiminin incelenmesi

    Investigation of exopolysaccharide production in doughs fermented with black chickpea yeast

    ANIL ALPER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyoteknolojiMersin Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYLİN ALTAN METE

  5. Tez No

    200760

    Identification of irradiated food by thermoluminescence method

    Termolüminesans metodu ile ışınlanmış gıdaların belirlenmesi

    HALİL BOZKURT

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2007

    Fizik ve Fizik MühendisliğiGaziantep Üniversitesi

    Fizik Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. METİN BEDİR

Geri Dön