Cloning and overexpression of Lactobacillus acidophilus bile salt hydrolase a gene (bshA) in Escherichia coli
Lactobacillus acidophilus'un safra tuzu hidrolaz geninin (bshA) Escherichia coli'ye aktarılması ve aşırı üretimi
- Tez No: 374633
- Danışmanlar: PROF. DR. EMİN ÖZKÖSE
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Genetik, Bioengineering, Biotechnology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Probiyotik, Lactobacillus acidophilus Ar, E. coli, Safra tuzu hidrolaz enzimi, bshA geni
- Yıl: 2014
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Kahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik ve Bilimleri Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 69
Özet
Safra tuzu hidrolaz enzimini (EC 3.5.1.24) kodlayan Safra tuzu hidrolaz geni (bshA), kolesterol düşürücü etkisi olan Lactobacillus acidophilus Ar suşu bu çalışmada kullanılmıştır. Yaklaşık olarak 800 bç. uzunluğundaki DNA parçası Lb. acidophilus Ar suşundan PZR tekniği ile çıkarılmıştır. DNA'nın işlenmesi ve klonlanması için her iki uca kesme enzimi (PstI/SacI) kodu eklenmiştir. Elde edilen DNA parçası E. coli MC1022 ekspresyon vektörü pJET1.2\blunt end ve Mekik vektör pMG36e ye yerleştirilmiştir. Elde edilen yeni recombinant plasmitlere sırasıyla pJET/bsha ve pMG36e/ bshA adı verilmiştir. Her iki recombinant molekül daha sonara kimyasal metotla E. coli MC1022 ye aktarılmıştır. Elde edilen rekombinantlar daha sonar enzim üretimi ve gen dizi analizleri için kullanılmıştır. Elde edilen sonuçlara gore gen transferi yapılan, pJET/bsha içeren E. coli MC102, bakterilerinin, pMG36e/ bshA içeren E. coli MC102, bakterilerinden ve bu geni taşımayan E. coli MC102, bakterilerinden daha fazla Safra tuzu hidrolaz enzimi ürettikleri gözlemlenmiştir. Ayrıca pMG36e/bshA içeren E. coli MC102, bakterilerinin bu geni taşımayan E. coli MC102, bakterilerinden daha fazla Safra tuzu hidrolaz enzimi ürettikleri gözlemlenmiştir. Rekombinant plasmitlerin taşıyıcı bakterilerde bir kaç generasyon kaldıkları da gözlemlenmiştir.
Özet (Çeviri)
The bile salt hydrolase gene (bshA), encoding bile salt hydrolase enzyme (EC 3.5.1.24) from probiotic isolate Lactobacillus acidophilus Ar strain which is responsible for assimilation cholesterol were studied in the present work. About 801 bp in length DNA fragment of Lb. acidophilus Ar strain was amplified by PCR techniques. Two restriction sites (PstI/SacI) were added to each end of that fragment for manipulation of DNA during cloning. Amplified fragment inserted into pJET1.2\blunt end vector and pMG36e vector respectively. pJET1.2\blunt end vector is overexpression plasmid for E. coli MC1022, and pMG36e vector is a shuttle vector which is able to replicate in both E. coli and lactic acid bacteria. The resulted constructs were named as pJET/bshA and pMG36e/bshA respectively. Both recombinants were transferred to E. coli MC1022 by chemical transformation. Obtained recombinants analyzed for expression and sequences. The results were confirmed that production of bile salt hydrolase from recombinant E. coli MC1022 pJET/bshA found to be higher while compared with E. coli MC1022 wild type and recombinant E. coli MC1022 pMG36e/bshA strain. However production of bile salt hydrolase from recombinant E. coli MC1022 pMG36e/bshA found to be higher while compared with E. coli MC1022 wild type. The recombinant plasmid also found to be stable in host organism after a few generations. Key words :Probiotic Lactobacillus acidophilus Ar, E. coli MC1022, Bile salt hydrolase, bshA genes.
Benzer Tezler
- Cloning and characterization of novel NOD like receptors as cytoplasmic immune sensors
Sitoplazmik bağışıklık alıcıları olarak yeni NOD ailesi alıcıların klonlanması ve karakterizasyonu
YETİŞ GÜLTEKİN
Yüksek Lisans
İngilizce
2011
BiyolojiBoğaziçi ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NESRİN ÖZÖREN
- Molecular cloning and recombinant production of human (EpCAM) extracellular domain
İnsan EpCAM'ın ekstrasellüler bölgesinin moleküler klonlanması ve rekombinant üretimi
ELSAYED NABIL ELSAYED HASSAN ZAABOUT
Yüksek Lisans
İngilizce
2019
BiyoteknolojiDokuz Eylül ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HÜLYA AYAR KAYALI
- Recombinant production and characterization of aquaporin protein isolated from geobacillus thermoleovorans ARTR1 and virgibacillus sp. agtr strains
Vırgıbacıllus sp. agtr, geobacıllus thermoleovorans ARTR1 suşlarından izole edilen akuaporin proteininin rekombinant üretimi ve karakterizasyonu
ŞEVVAL UYSALCAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NEVİN GÜL KARAGÜLER
DR. ÖĞR. ÜYESİ NACİYE ESRA ATEŞ GENCELİ
- Fasulyede GPAT gen ailesinin karakterizasyonu ve kuraklık stresi altında PvGPAT1 geninin transgenik yaklaşımla fonksiyonunun belirlenmesi
Characterization of the GPAT gene family in bean and determination of the function of the PvGPAT1 gene under drought stress with a transgenic approach
AYŞE GÜL KASAPOĞLU
Doktora
Türkçe
2024
BiyolojiErzurum Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. EMRE İLHAN