Halofilik arke kaynaklı lipaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of extracellular lipase from halophilic archaea
- Tez No: 382497
- Danışmanlar: DOÇ. DR. GÜL ÖZYILMAZ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biyoloji, Kimya, Biochemistry, Biology, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2013
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Mustafa Kemal Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 93
Özet
Bu çalışmada halofilik arke kaynaklı ekstraselüler lipaz enziminin izolasyonu ve karakterizasyonu gerçekleştirilmiştir. Halofilik arke suşlarının seçimi lipolitik aktivitelerine göre yapılmıştır. Seçilen suşlar, A-206 ve B-49 olarak sembolize edilmiştir. Suşlar %25 NaCl içeren SG broth besi ortamında üretilmiştir. En yüksek lipaz aktivitesi B-49 ve A-206 için sırasıyla 4 ve 5. üreme günlerinde elde edilmiştir. Ekstraselüler lipaz çözeltisi besi ortamının sırasıyla santrifüj, diyaliz ve deriştirilmesi ile elde edilmiştir. Lipaz enzimi saflaştırılmasında (NH4)2SO4 ile fraksiyonlu çöktürme, aseton ile fraksiyonlu çöktürme, Fenil-Sefaroz hidrofobik etkileşim kromatografisi ve DEAE-Sefadeks iyon değiştirici kromatografisi teknikleri kullanılarak saflaştırılmıştır. Enzimin saflığını kontrol etmek amacıyla saflaştırma aşamalarının herbirinin sonunda SDS-PAGE analizi yapılmıştır. Uygulanan teknikler kıyaslandığında, en yüksek oranda saflaştırmanın DEAE-Sefadex iyon değiştirici kromatografisi tekniği kullanıldığında B-49 suşuna ait lipaz enziminin 3,58 U/mg spesifik aktivite ile 62,81 kat; A-206 suşuna ait lipaz enziminin 4,49 U/mg spesifik aktivite ile 28,42 kat daha saf izole edildiği belirlenmiştir. Suşlara ait lipaz enziminin pNPB ve pNPA substratları için karakterizasyonu yapılmıştır. DEAE-Sefadeks iyon değiştirici ile elde edilen halofilik arke lipaz fraksiyonları pNPA ve pNPB substartları için karakterize edilmiştir. Optimal çalışma koşulları araştırılmış ve her iki kaynak ve subsrat için pH (6,0-7,5), sıcaklık (40 º) ve NaCl derişimleri (3,0-3,5 M) belirlenmiştir. Ayrıca Ea (28,3-84,7 kJ/mol.K), enzimlerin denatürasyonunun başladığı sıcaklık (40-43 ?C), Km (3,81-7,16 mM) ve Vmax (7,93-65,47 U/mg) değerleri B-49 ve A-206 ve iki substrat için hesaplanmıştır
Özet (Çeviri)
In this study, isolation and characterization of extracellular lipase of halophilic archaea was carried out. Halophilic archaeal strains are selected according to their lipolytic activities. The selected strains are symbolized as A-206 and B-49. Strains were growth in SG broth medium containing 25 % NaCl. The highest lipase activities were get after 4 and 5 day culture period for B-49 and A-206, respectively. Extracellular lipase solution was obtained after centrifugation, dialysis and concentration of growth medium, respectively. Purification of lipase was carried out by using fractional precipitation with (NH4)2SO4, fractional precipitation with acetone, DEAE-Sephadex ion exchange chromatography and Phenyl Sepharose hydrophobic interaction chromatography techniques. In order to check purifying of the enzyme, SDS-PAGE analysis was carried out at end of the each purification step. When compared with crude lipase, B-49 strain lipase was 62.81 fold pure isolated with 3.58 U / mg specific activity and A-206 strain lipase was 28.42 fold pure isolated with 4.49 U/mg specific activity by DEAE-Sefadex ion exchange chromatography. Halophilic lipases get from DEAE-Sephadex ion exchange chromatography were characterized by pNPA and pNPB substrates. The optimal working conditions were investigated and pHs (6.0-7.5), temperatures (40 ºC) and NaCl concentrations (3.0-3.5 M) were determined for both lipases and substrates. Also, Ea values (28.3-84.7 kJ/mol.K), denaturation temperatures (40-43 ºC), Km (3.81-7.16 mM) and Vmax values (7.93-65.47 U/mg) were calculated for B-49 and A-206 for two substrates.
Benzer Tezler
- Halofilik arke kaynaklı amilaz enziminin saflaştırılması
Purification of halophilic archaea origin amylase enzyme
FETHİYE GANİMGİL
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
KimyaMustafa Kemal ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. GÜL ÖZYILMAZ
- Functional significance of fructan biosynthesis in halophilic archaea and eubacteria
Halofilik arke ve öbakterilerde fruktan biyosentezinin fonksiyonel önemi
ONUR KIRTEL
Doktora
İngilizce
2021
BiyomühendislikMarmara ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EBRU TOKSOY ÖNER
PROF. DR. WİM VAN DEN ENDE
- Halofilik mikroorganizmalar tarafından fenolün biyodegradasyonu
Phenol biodegradation by halophilic microorganisms
EDA AÇIKGÖZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
BiyolojiMustafa Kemal ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BİRGÜL ÖZCAN
- Azo tekstil boyalarının renk ve toksisitesinin halofilik arkeler tarafından giderimi
Decolorization and detoxification of textile azo dyes by halophilic archaea
EVRİM YILDIZ
- Çankırı Çankaya Tuz Madeni'nden halofilik arkelerin izolasyonu ve karakterizasyonu
Isolation and characterization of halophilic archaea from Çankırı Çankaya Salt Mine
EVRİM YILDIZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2008
BiyolojiMustafa Kemal ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MAHMUT ÇALIŞKAN
YRD. DOÇ. DR. BİRGÜL ÖZCAN