Sarkozin oksidaz enziminin afinite kromatografisi ile saflaştırılması
Purification of sarcosine oxidase enzyme by affinity chromatography
- Tez No: 392199
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. SERPİL ÖZKARA YAVUZ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2015
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Anadolu Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 81
Özet
Bu çalışmada, monomerik sarkozin oksidaz (MSOX) enziminin saflaştırılmasına yönelik sarkozin bağlı kriyojel kolonlar geliştirilmiş ve bu kolonların MSOX saflaştırılmasındaki etkinliği araştırılmıştır. Sarkozin bağlı makro gözenekli kriyojellerin hazırlanmasında serbest radikal polimerizasyon yöntemi kullanılmıştır. Bu amaçla çalışmanın ilk aşamasında metakrilamidohistidin (MAH) fonksiyonel monomeri ve ardından nano MAH Sarkozin ligandı sentezlenerek FT-IR ile karakterize edilmiştir. Daha sonra, MAH Sarkozin, hidroksi etilmetakrilat (HEMA) monomeri ile çapraz bağlayıcı N,N' metilenbisakrilamit (MBA) varlığında polimerleştirilerek kriyojel kolonlar hazırlanmıştır. Hazırlanan kriyojel kolonların karakterizasyonu şişme testi, BET, SEM ve FT-IR analizleri ile gerçekleştirilmiştir. Çalışmanın son aşamasında, sentezlenen kriyojel ayırma kolonları kullanılarak Bacillus cereus bakteri suşlarından elde edilen ham ekstrakttan MSOX saflaştırılmıştır. Saflaştırılan MSOX' un Bradford yöntemi ile protein içeriği, UV spektrofotometrik ölçümleri ile enzim aktivitesi belirlenmiş ve enzim için kinetik çalışmalar gerçekleştirilmiştir. Ayrıca; saflaştırılan enzimin SDS PAGE analizi ile molekül ağırlığı ve saflık derecesi belirlenmiştir.
Özet (Çeviri)
In this study, sarcosine bound cryogel columns have been developed and the efficiency in purification of monomeric sarcosine oxidase (MSOX) has been investigated. The sarcosine bound macroporous cryogels have been synthesized by free radical polymerization. For this purpose, metharcyloylamidohistidine (MAH) as the functional monomer and nano MAH-Sarcosine spheres have been synthesized and characterized by FT-IR in the first part of the study. Then, cryogel columns have been prepared by polymerization of MAH-Sarcosine and functional monomer in the presence of cross-linker N,N' Methylenebisacrylamide. Characterization of the prepared cryogel columns has been carried out by swelling tests, BET, SEM and FT-IR analysis. In the final step of the study, purification of MSOX from crude extracts of Bacillus cereus bacteria has been carried out by using prepared cryogel separation columns. Protein content of the purified MSOX has been determined by Bradford technique. Enzyme activity and kinetic studies have been carried out by UV spectrophotometric analysis. Molecular weight and purity degree of the purified enzyme have also been determined by SDS-PAGE analysis.
Benzer Tezler
- Sarkozin tayini için yeni bir biyosensör geliştirilmesi
Development of a novel biosensor for determination of sarcosine
DUYGU KILIÇ
- Kreatin ve kreatinin tayinlerine yönelik enzim temelli hibrit biyosensörlerin geliştirilmesi
Enzyme based on hybrid biosensor for the development for determination of creatine and creatinine
ÇAĞRI ALTUĞ
- Kendiliğinden tek tabaka oluşumuna dayalı enzim temelli biyosensör sistemleri geliştirilmesi
Development of enzyme biosensor systems based on self-assembled monolayer
EMİNE YORGANCI
- Kreatin tayini için yeni bir amperometrik biyosensör hazırlanması
The preparation of a new amperometric biosensor for determination of creatine
SÜLEYMAN ÇALIŞKAN
- Kreatin tayini için pıli(vinilferrosen)'e kreatiaz ve sarkosin oksidazın immobilize edilmesi ile hazırlanmış amperometrik enzim elektrot
Amperometric enzyme electrode for creatine determination prepared by the immobilization of creatinase and sarcosin oxidase in poly(vinlyferrocen)
PINAR ESRA ERDEN
