Adipoz kökenli mezenkimal kök hücre dizilerinin geliştirilmesi, immünfenotipik karakterizasyonu ve farklılaşma özelliklerinin incelenmesi
Development of adipose-derived mesenchymal stem cell lines, their immunophenotypical characterization and evaluation of differentiation properties
- Tez No: 392681
- Danışmanlar: PROF. DR. YAŞAR MURAT ELÇİN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biyomühendislik, Biochemistry, Bioengineering
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2015
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu çalışmada, cerrahi operasyonlarla uzaklaştırılan atık insan adipoz dokularından, adipoz mezenkimal kök hücreler (AMKH) izole edildi. Hücrelerin immünfenotipik karakterizasyonu ve koloni oluşturma kapasiteleri belirlendi. Çeşitli büyüme faktörleri kullanılarak farklılaşma özellikleri incelendi. Aynı atık adipoz dokularından ekstraselüler matriks (ECM) fiziksel (homojenizasyon, santrifüjleme, kalıplama) ve kimyasal (çapraz bağlama) basamaklar içeren bir protokol geliştirilerek hücrelerinden arındırıldı, uzun ince lifler ve gözenekler bulunduran bir iskele malzemesi üretildi. Hazırlanan iskelenin su ve tampon tutma kapasitesi belirlendi. AMKH'ler hazırlanan iskelelere tohumlandı. Belli zaman noktalarında toplanan örneklerde hücre canlılığı ile malzemeye tutunma ve çoğalma davranışları MTT testi ve SEM analizleriyle belirlendi. Hücre-iskele yapılarının kıkırdak doku oluşturma kapasitelerinin incelenmesi amacıyla TGFβ-3 ve BMP-6 içeren kondrojenik vasat ortamında 42 gün kültürü sürdürüldü. Belli zaman noktalarında toplanan örneklerde kondrojenik protein ifadesi immüno/histo-kimyasal analizlerle takip edildi. Kondrojenik farklılaşma sonrası hücrelerce sentezlenen toplam sGAG miktarı dimetilmetilen mavisi boya bağlanma testi ile ölçüldü. SEM bulguları iskelenin oldukça gözenekli olduğunu, hücrelerin iskelelere tutunduğunu, MTT testi sonuçları hücrelerin iskelelerde yaşayabilirliğinin yüksek olduğunu, çoğalmaya devam ettiklerini, immüno/histo-kimyasal analizler ise TGFβ-3 ve BMP-6 içeren kondrojenik vasat ortamında kondrogenezin gerçekleştiğini gösterdi. GAG analizi kondrogenezi doğrular şekilde, sGAG miktarının yapılar içinde zamanla arttığını gösterdi. Elde edilen sonuçlar, insan atık adipoz dokusunun hem ECM hem de kök hücrelerin eldesi açısından oldukça zengin ve önemli bir kaynak olduğu, aynı kaynaktan elde edilen matriks iskeleler ve mezenkimal kök hücrelerin uygun kültür şartlarında otolog kıkırdak doku mühendisliğinde kullanılma potansiyeline sahip olduğu görüşünü destekledi.
Özet (Çeviri)
In this study, adipose mesenchymal stem cells (AMSCs) were isolated from human waste adipose tissues harvested by surgical operations. Immunophenotypical characterization and colony forming capacity of cells were determined. Differentiation characteristics were examined using a variety of growth factors. Extracellular matrix (ECM) of same waste adipose tissues was decellularized using a protocol composed of physical (homogenization, centrifugation, molding) and chemical (crosslinking) steps, thus a scaffold material containing long thin fibers and pores was produced. Water and buffer uptake capacity of scaffold was determined. ECM scaffold was seeded with AMSCs. Cell viability, adhesion/proliferation behavior of cells were evaluted by MTT assay and SEM analysis. To examine cartilage-forming capacity of cell-laden constructs 42-day culture in chondrogenic medium containing TGFβ-3 ve BMP-6 was maintained. Chondrogenic protein expression were followed by immuno/histo-chemical analysis. Glycosaminoglycans (sGAG) synthesized by cells was measured by dimethylmethylene blue dye binding assay. SEM observations and MTT assay showed that scaffold had a highly porous structure and the cells were well attached to the scaffold with good cellular viability and high proliferation. Immuno/histo-chemical analysis proved that chondrogenesis occurred under the chondrogenic conditions with TGFβ-3 and BMP-6. sGAG analysis pointed out that the amount of GAG increased in constructs by time confirming chondrogenesis. All results supported that human waste adipose tissue is a rich and important source for obtaining ECM, as well as stem cells and matrix scaffolds and mesenchymal stem cells obtained from same adipose tissue have potential in autologous cartilage tissue engineering under proper culture conditions.
Benzer Tezler
- Adipoz kökenli mezenkimal kök hücre ve Ishikawa hücre hattının ko-kültür ortamında SOCS3 ilişkili miRNA dizilerinin değişen ekspresyon seviyelerinin analizi
Analysis of altered expression levels of SOCS3-related miRNA sequences in a co-culture system of adipose-derived mesenchymal stem cells and Ishikawa cell line
AYŞENUR KURT
Yüksek Lisans
Türkçe
2025
Histoloji ve Embriyolojiİstanbul Medipol ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İLKNUR KESKİN
- Adipoz kökenli mezenkimal kök hücre koşullu besiyerinin testis torsiyonunda kan-testis bariyer proteinleri ve sperm parametreleri üzerine etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of adipose-derived mesenchymal stem cell conditioned medium on blood-testis barrier proteins and sperm parameters in testicular torsion
MOHAMAD AMJAD TULIMAT
Yüksek Lisans
Türkçe
2026
Histoloji ve Embriyolojiİstanbul Medipol ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ BİRCAN KOLBAŞI ERKAN
- Diz osteoartriti hastalarında adipoz kökenli mezenkimal kök hücre enjeksiyonu ve kortikosteroid enjeksiyonu tedavi etkinliklerinin ağrı, fonksiyon açısından retrospektif olarak karşılaştırılması ve osteoartrit evreleri ile ilişkisi
Retrospective comparison of adipose-derived mesenchymal stem cell and corticosteroid ınjections on pain and function in knee osteoarthritis and the association with osteoarthritis stages
MERVE BÜŞRA TEVKE
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2025
Fiziksel Tıp ve RehabilitasyonAydın Adnan Menderes ÜniversitesiFiziksel Tıp ve Rehabilitasyon Ana Bilim Dalı
PROF. DR. YASEMİN ÖZKAN
- İnterpolasyon fleplerinde neovaskülarizasyonu hızlandırmak için rat adipoz doku kökenli mezenkimal kök hücre kullanılması
Use of rat adipose-derived mesenchymal stem cell to accelerate the neovascularization of interpolation flap in a rat model
HAKKI HAYRETTİN İZMİRLİ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2011
Plastik ve Rekonstrüktif CerrahiKocaeli ÜniversitesiPlastik Rekonstrüktif ve Estetik Cerrahi Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. M. ŞAHİN ALAGÖZ
- Konvansiyonel yaklaşım ve piezoelektrik cihazlar ile yapılan kalvarium osteotomilerinin ve adipoz kökenli mezenkimal kök hücre uygulamalarının beyin parankimi ve zarları üzerindeki etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of conventional and piezoelectric calvarial osteotomies and adipose-derived mesenchymal stem cell applications on the brain parenchyma and meninges
ALAZ ÇIRAK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2026
Plastik ve Rekonstrüktif CerrahiHacettepe ÜniversitesiPlastik Rekonstrüktif ve Estetik Cerrahi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MERT ÇALIŞ