Alfa-2-makroglobulin saflaştırılması; proteinaz varlığında alfa-2-makroglobulinin diğer inhibitörlerle interaksiyonunun incelenmesi
Purification of alpha-2-macroglobulin, investigation of the interaction of alpha-2-M with the other inhibitors in the presence of proteinase
- Tez No: 40168
- Danışmanlar: DOÇ.DR. NİLGÜN SÜMER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Alfa 1-antitripsin, Alfa makroglobülinler, Proteaz inhibitörleri, Alpha 1 antitrypsin, Alpha macroglobulins, Proteases inhibitors
- Yıl: 1995
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
5. ÖZET İnsan plazma alfa-1-proteinaz inhibitörü (a-1-PI) ve alfa-2- makroglobulininin (a-2-M) antiproteinaz etkisini incelemek üzere, sığır pankreas tripsini, pH 6.9 ve 25°C de: (i) Saf a-1-PI, (ii) saf a-2-M, (iii) saf inhibitor karışımları ve (iv) diyalizlenmiş plazma ile preinkübe edildi. Substrat olarak N-benzoil-L-arjinin etil ester (BAEE) kullanıldığında, a-2-M' e enterne tripsinin serbest tripsine göre % 12+ 3 oranında daha fazla BAEE hidroliz aktivitesi gösterdiği bulundu, a- 1-PI ve a-2-M karışımları ile yapılan titrasyonlarda gözlenen limit aktiviteden iki inhibitörün tripsinle assosiyasyon hız sabitlerinin oranı (ka-2-M/ka-ı-Pi) hesaplandı. Bu oran saf inhibitor karışımlarında 10+ 1.5 düzeyindeydi ve inhibitörler için rapor edilen bağımsız hız sabitlerinden hesaplanan orandan (ka_2-M/ka-ı-Pi=3°) farklıydı. Bulgular a-2-M ve a-1-PT nin karışımlarda bağımsız davranmadığını düşündürdü. Dansillenmiş a-2-M (DNS-M) ve a-1-PI kullanılarak yapılan fluoresans titrasyonlarında DNS-M ile a-1-Pl arasında spesifik bağlanma gözlendi. Verilerin protein derişimi bazında ve aktif (a-1-Pl) bazında analizi yapıldı. Bağlanma ile ilgili Kd değeri, sırasıyla 0.3± 0.04 nM ve 0.09±0.12 y,M; stoikiyometri, sırasıyla 1 a-2-M:4 a-1-PI ve 1 a-2-M:1 a-1PI düzeyinde bulundu. Saf inhibitor karışımlarında gözlenen hız sabiti oranı ile beklenen oran arasındaki farkın a-2-M ile a-1-PI arasındaki ilişkiden kaynaklanabileceği sonucuna varıldı. 38
Özet (Çeviri)
6. ABSTRACT The inhibitory properties of human alpha-1-proteinase inhibitor (a-1-PI) and alpha-2-macroglobulin were studied by incubating bovine pancreatic trypsin (at pH 6.9, 25°C) with: (i) Purified a-1-PI, (ii) purified a-2-M, (iii) mixtures of purified inhibitor and (iv) dialyzed plasma. Residual tryptic activity was determined using N-benzoyl-L- arginine ethyl ester (BAEE) as substrate; entrapment in a-2-M increased BAEE hydrolyzing activity by 12+3%. Limiting activities observed in titrations of enzyme with mixtures of a-1-PI and a-2-M were used to calculate association rate constant ratios (ka-2-M^a-i-pi) for the two inhibitors, ka-2-M/ka-i-Pi was found to be 10±1.5 for mixtures of pure inhibitor. This was significantly lower than the value deduced from association rate reported for each inhibitor, suggesting that a-2-M and a-1-PI do not act independently in mixtures. Fluorescence titration study using dansylated a-2-M (DNS-M) and a-1- Pl indicated specific binding between DNS-M and a-1-PI. Binding parameters calculated on the basis of protein concentrations were: Kd, 0.3+0.04 p.M; stoichiometry, 1 a-2M:1 a-1PI. The corresponding values based on active (a-1-PI) were 0.09±0.12 p.M and 1 a-2-M:1 a- 1-PI, respectively. It was concluded that the different relative efficiencies of a-2-M and a-1-PI in isolation and in mixtures could arise from binding interactions between the two inhibitors. 39
Benzer Tezler
- Böbrek hücre kültürlerinde kalsiyum oksalat kristallerinin agregasyonunun araştırılması
Başlık çevirisi yok
ÇİĞDEM ÖZBAŞLI LEVİ
- Alfa-2 makroglobulin kapan tepkimesi üzerine bir çalışma
A Study on trapping reaction of alpha-2 macroglobulin
HİLAL ŞİMŞEK
- Akut faz reaktanlarından alfa-2-makroglobülin, haptoglobin, C-reaktif proteinin plevra sıvılarının ayırıcı tanısında katkısı
The role of acute phase reactans, alpha-2-macroglobuline, haptoglobine, C- reactive protein in the differentiation diagnosis of pleural fluid
JALE YAĞIZ
- Çocukluk çağı nefrotik sendromlu hastalarda alfa-2 makroglobulin ve lipoprotein (a)'nın araştırılması
Investigation of the alpha-2 macroglobulin and lipoprotein (a) in patients with childhood nephrotic syndrome
HANDAN AYDINGÜLÜ (BAYRAM)
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1998
BiyokimyaÇukurova ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NURTEN DİKMEN
- Romatoid artrit ve osteoartritli hastalarda serum ve sinovyal sıvı CRP, alfa-1 antitripsin, alfa-1 asidglikoprotein, haptoglobin, prealbumin ve alfa-2 makroglobulin seviyelerinin araştırılması
Investigation of serum and snovial fluid levels of CRP, AAT, AAG, HAP, PA and AMG of patients with RA and osteoarthritis
MAHMUT AY
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1998
BiyokimyaSelçuk ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MEHMET GÜRBİLEK