Bacillus sp. P22 soyu alkalen proteazının üretim koşullarının optimizasyonu, enzimin saflaştırılması ve nitelendirilmesi
Optimization of the conditions for the production of alkaline protease by Bacillus sp. P22 and purification and characterization of the enzyme
- Tez No: 405821
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. SALİHA İŞSEVER ÖZTÜRK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Biology, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2015
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gebze Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 192
Özet
Alkalen proteazlar proteinleri oluşturan amino asitler arasındaki peptit bağlarının hidrolizini alkali koşullarda katalizleyen önemli endüstriyel enzimlerdir. Dünya enzim pazarında yaklaşık % 60 pay sahibi olan alkalen proteazlar başta deterjan, süt ürünleri, gıda ve deri endüstrilerinde olmak üzere pek çok endüstriyel süreçte kullanılmaktadır. Bu çalışmada, yerel bir izolat olan Bacillus sp. P22 alkalen proteazının üretim koşullarının optimize edilmesi, enzimin saflaştırılması ve nitelendirilmesi amaçlandı. Bu amaçla, çeşitli karbon ve azot kaynakları ile metal tuzları gibi besi yeri bileşenleri ve sıcaklık, pH, aşılama miktarı, çalkalama hızı, havalandırma oranı gibi inkübasyon koşulları test edilerek, enzim üretiminin en iyi olduğu fermentasyon şartları belirlendi. Enzim amonyum sülfat çöktürmesi, iyon değiştirici kromatografi ve moleküler elek kromatografisi yöntemleri ile üç basamakta % 21 verimle 13 kez saflaştırıldı. Kısmen saflaştırılan enzim ile gerçekleştirilen nitelendirme çalışmaları sonucunda; Bacillus sp. P22 alkalen proteazının optimal çalışma sıcaklığının 40 °C ve optimal çalışma pH değerinin 10.5 olduğu belirlendi. Enzimin 15-50 °C ve pH 8-11 aralıklarında kararlı olduğu, 10 mM CaCl2'ün 50 ve 60 °C'ta enzimin sıcaklık kararlılığını önemli ölçüde artırdığı görüldü. 10 mM EDTA ve PMSF varlığında proteolitik aktivitenin inhibe olduğu, enzimin SDS, Triton X-100, Tween 80, Tween 20 gibi deterjanlar ve aseton, etanol, metanol, izopropanol ve etilen glikol gibi organik çözücüler varlığında aktivitesini önemli ölçüde koruduğu gözlendi.
Özet (Çeviri)
Because of their capability of cleaving peptide bonds between amino acids at alkaline conditions, alkaline proteases have broad applications in detergent, food, dairy and leather industries where stability and activity are required in tough conditions. Constituting 60 % of the global enzyme market alkaline proteases are significant industrial enzymes. In this study, production of alkaline protease of the local isolate Bacillus sp. P22 was optimized, the enzyme was purified and its charactheristics were determined. The optimum media composition that is promoting enzyme production was defined by testing different carbon and nitrogen sources and metal salts as well as varied incubation temperature, pH, inoculum rate, agitation speed and aeration ratio. The enzyme was purified for 13 times with 21 % yield in three steps employing ammonium sulphate precipitation, ion exchange and gel filtration chromatographies. In following characterization studies the optimal reaction temperature and pH of Bacillus sp. P22 alkaline protease were found to be 40 °C and 10.5 respectively. The enzyme was found to be stable in 15-50 °C and pH 8-11 ranges whereas its temperature stability was increased in the presence 10 mM CaCl2 at 50 and 60 °C. Enzymatic activity was inhibited in the presence of 10 mM EDTA and PMSF. Proteolytic activity of Bacillus sp. P22 alkaline protease retained to a great extent in the presence of detergents SDS, Triton X-100, Tween 80, Tween 20 and organic solvents acetone, ethanol, methanol, isopropanol and ethilene glycol, thus proving the potential of Bacillus sp. P22 alkaline protease as a detergent additive.
Benzer Tezler
- Detection, optimization, purification and determination of antimicrobial activity of protease from Bacillus sp.
Bacıllus sp.'den proteazın tespiti, optimizasyonu, saflaştırılması ve antimikrobiyal aktivitesinin belirlenmesi
SAIF SHAMSALDEEN MOHAMMED AL-GBURI
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyolojiÇankırı Karatekin ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TAMER KEÇELİ
DR. ÖĞR. ÜYESİ FAHAD K. Y. AL-DULAIMI
- Bacillus sp. türlerinde siderofor üretimi ve Bacillus cereus DSM 4312'de siderofor üretiminin optimizasyonu
Siderophore production from bacillus sp. species and optimization of siderophore production from Bacillus cereus DSM 4312
ENİS GÜNEY
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
BiyoteknolojiGebze Yüksek Teknoloji EnstitüsüMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. FATMA İNCİ ÖZDEMİR
- Bacillus sp. EBTA6 ile proteaz üretiminin optimizasyonu ve enzimin endüstriyel kullanım olanaklarının araştırılması
Optimization of protease production by Bacillus sp. EBTA6 and investigation of industrial application potentials of the enzyme
SELİN DEMİR
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
BiyoteknolojiSakarya ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYŞE AVCI
- Doğal izolat bacıllus suşlarından keratinaz enzimi üretimi ve karakterizasyonu
Production and charactrization of keratinase enzyme from natural isolate bacillus strains
ABOUBACAR SIDIKI DANSOKO
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
BiyolojiÇukurova ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HATİCE GÜVENMEZ
- Bacıllus Sp.'den anti-fungal (biokontrol ajan) etkinlik gösteren kitinaz üretimi
Antifungal chitinase (bio-control agent) production from bacillus sp
SEÇİL BERNA KUZU HOŞSÖZ